淋巴细胞主动免疫治疗对复发性流产患者BA水平及妊娠结局的影响

朱淑嫔 赵军招

(温州医科大学附属第二医院生殖中心 温州 325000)

复发性流产(Recurrent spontaneous abortion ，RSA)发病率逐年上升，其发病机制较复杂[1]。有研究证实，RSA会降低机体细胞免疫功能[2]。淋巴细胞主动免疫治疗(Lymphocyte active immunotherapy，LIT)能够有效控制母体对胚胎免疫排外反应，是治疗RSA的首选[3]。本研究回顾性分析RSA患者的临床资料，旨在探讨LIT对RSA患者BA水平及妊娠结局的影响。

1 一般资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年4月～2018年4月我院收治的102例RSA患者作为研究对象。纳入标准：(1)连续流产≥3次；(2)血清BA呈阴性且内分泌水平正常；(3)夫妇双方染色体核型正常。排除标准：(1)配偶精液异常；(2)TORCH检测呈阳性；(3)有生殖道感染及生殖道畸形。按照随机数字法分为观察组53例和对照组49例。观察组平均年龄(30.24±1.21)岁，流产次数3～5次；对照组平均年龄(31.20±1.17)岁，流产次数3～5次。两组患者年龄、流产次数等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准，且均签署知情同意书。

1.2 方法

全组患者均接受黄体酮胶囊200mg/d保胎治疗，观察组加用LIT治疗。具体方法如下：抽取20～30ml配偶或第三方健康供血者外周静脉血，保存。将抽取静脉血加入25ml肝素钠(东营天东制药有限公司，国药准字号：H20058187)及25ml生理盐水；采用Ficoll密度梯度离心法分离淋巴细胞，使用无菌生理盐水洗涤3次，清除血小板，制作成浓度为2～4×107个/ml的淋巴细胞悬液；患者均行常规消毒后，取前臂内侧皮注，分为6～8点，0.2～0.3ml次/点，注射点之间间隔3cm。免疫治疗每4次一个疗程，每次间隔4周。1个疗程后复查两组患者BA水平，若未到达正常水平，则继续加强免疫治疗；若到达正常水平，则鼓励妊娠，在确定宫内妊娠迹象后免疫治疗3周/次，妊娠16周后，超声检查胎儿正常后停止治疗。

1.3 观察指标

治疗前及治疗3个疗程后，抽取2ml双方外周静脉血，分离血清；采用双荧光标记流式细胞分析仪(诺诗乐生物科技(苏州)有限公司，Namocell)检测外周血T细胞中CD3+、CD4+、CD8+封闭效率(BE)，BA转阳治疗后由负值转为正值。1ml外周静脉血直接离心取血清，采用酶联免疫法检测患者血清肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha，TNF-α)、干扰素(interferon，INF)-γ、白细胞介素(Interleukin，IL)-4及IL-10细胞因子水平，并统计患者治疗后妊娠情况。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组患者免疫治疗前后外周血T淋巴细胞BE变化比较

治疗3个疗程后，观察组转阳50例(96.15%)，对照组转阳43例(87.76%)。组间比较，观察组CD3+BE、CD4+BE、CD8+BE明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

组别CD3+BECD4+ BECD8+ BE观察组(n=53)治疗前-1.71±1.390.19±1.350.63±0.43治疗后1.70±1.37∗1.73±1.38∗1.49±0.43∗对照组(n=49)治疗前-1.53±1.330.22±1.330.72±0.77治疗后1.26±1.39∗1.39±1.23∗1.02±0.35∗

注：*表示治疗后组间比较，P<0.05。

2.2 两组患者免疫治疗前后血清细胞因子水平比较

两组患者组内治疗后比较，差异无统计学意义(P>0.05)；组间比较，观察组治疗后TNF-α、INF-γ水平明显低于对照组，IL-4、IL-10水平明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

组别TNF-αINF-γIL-4IL-10观察组(n=53)治疗前29.18±5.97334.64±61.3410.64±3.4417.41±4.36治疗后24.37±5.93∗254.44±69.37∗12.30±3.74∗20.20±4.56∗对照组(n=49)治疗前30.94±5.84335.23±70.7210.73±3.5817.45±4.43治疗后27.67±5.38278.70±64.379.33±3.2615.37±4.63

注：*表示治疗后组间比较，P<0.05。

2.3 配偶或第三方淋巴细胞对主动免疫治疗疗效的影响

治疗后，配偶或第三方淋巴细胞与各指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)；妊娠结局，配偶或第三方淋巴细胞与妊娠失败患者比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 配偶或第三方淋巴细胞对主动免疫治疗疗效的影响

项目CD3CD4CD8配偶68.93±6.3735.03±5.9130.87±7.33第三方66.32±6.3533.99±5.5230.41±7.38t2.0700.9160.315P0.0410.3610.752

2.4 两组患者妊娠结局比较

观察组治疗成功率79.25%明显高于对照组的40.82%，差异具有统计学意义(χ2=14.202,P<0.05)，见表4。

表4 两组患者妊娠结局比较[n(%)]

组别成功分娩流产治疗成功率观察组(n=53)42(79.25)11(20.75)79.25(42/53)对照组(n=49)20(40.82)29(59.18)40.82(20/49)

3 讨论

RSA的病因主要分为非免疫性和免疫性两大类，免疫性包括自身相关型和同种免疫型[4]。相关研究表明，母胎双方免疫不适应，造成母体排斥胚胎，从而形成流产；同种免疫型中T淋巴细胞具有重要意义[5]。

正常孕产妇的血清中分布大量BA，因其具有抗原和阻碍组合的特点，能够结合胎儿胎盘滋养层抗原阻滞母体免疫系统识别和杀伤胚胎父系抗原[6]，临床BA缺乏代表T淋巴细胞活化比率不足[7]。本研究结果表示，两组患者采用LIT治疗3个疗程后，观察组转阳率96.15%与对照组转阳率87.76%比较，治疗后观察组CD3+BE、CD4+BE、CD8+BE明显高于对照组，提示LIT方案能够有效改善BA水平，使其达到正常水平，Th1/Th2平衡与RSA患者妊娠结局密切相关[8]。本研究发现从妊娠结局上来看，使用父系淋巴细胞或第三者淋巴细胞都无差异性，这与有关研究一致。本研究结果表示,LIT方案治疗RSA患者疗效显著，能够对BA转阳率及T淋巴细胞BE水平进行增高，同时能维持Th1/Th2细胞因子平衡。

综上所述，LIT治疗RSA患者疗效显著，有利于增高BA水平转阳和T淋巴细胞BE水平，同时提高患者成功妊娠率。