河源地区无偿献血人群乙型肝炎病毒感染标志物检测结果分析

刘丽华 聂湘辉 程丽娜 黄仕云 刘 静

广东省河源市中心血站，广东河源 517000

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是危害 人们健康的严重问题之一，在国家法定传染病报告系统中，乙肝报告病例居乙类传染病的首位[1]。输血是HBV传播的主要途径之一，在采供血机构现行检测的传染病项目中，HBV经输血传播风险最高[2]。为减低输血传播病毒风险，2016年1月起我站响应国家号召改变血液样本检测策略：在两遍酶免检测的基础上增加HBV、HCV及HIV核酸检测。为了解开展核酸检测后河源地区献血人群HBV感染情况，本研究对2016 ～ 2018年无偿献血者样本HBV感染标志物检测情况进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采用整群抽样方法选取2016年1月1日～2018年12月31日在本站参加无偿献血的无偿献血者60 351例为研究对象。纳入标准：（1）体检合格；（2）乙肝表面抗原胶体金试纸条快速检测合格；（3）谷丙转氨酶（ALT）罗氏干式试纸条初筛合格；（4）血红蛋白初筛合格。采集无偿献血者全血两管，分别用于HBsAg ELISA（5mL）和HBV DNA（8mL，带分离胶）检测，均用EDTA-K2抗凝。

1.2 主要试剂和设备

HBsAg ELISA检测采用法国伯乐及珠海丽珠公司试剂；抗-HCV ELISA检测采用北京万泰及珠海丽珠公司试剂；HIV-Ag/Ab ELISA检测采用法国伯乐及珠海丽珠公司试剂；抗-TP ELISA检测采用北京万泰及珠海丽珠公司。ALT的检测采用迈瑞公司试剂。ELISA检测主要仪器为Xantus44/OH-150全自动加样仪、BEPIII全自动酶免分析仪、UranusAE 268全自动酶免仪等。HBV DNA检测采用上海浩源公司的ChiTas BSS1200全自动血液核酸检测仪及配套试剂。HBV病毒载量测定采用美国罗氏公司High Pure Viral Nucleic Acid Large Volume Kit进行提取。采用大连宝生物公司的Premix Ex Taq（Perfect Real Time）试剂盒和美国Agilent公司的MX3005P实时荧光定量仪测定HBV病毒载量。血源筛查试剂均为国家检定权威机构批检合格。

1.3 方法

1.3.1 献血前初筛 所有无偿献血者经HBsAg胶体金试纸与ALT初筛，初筛合格后进行血液采集。所有无偿献血者都签署知情同意书，符合医学伦理学。

1.3.2 血清学检测 采用两个不同生产厂家的试剂对所有研究对象样本进行HBsAg、抗-HCV、HIV-Ag/Ab、抗-TP检测。如双试剂或任一试剂阳性，判为不合格；双试剂均阴性，判为合格。ALT速率法检测结果＞50U/L判为不合格。

1.3.3 病毒核酸检测（NAT） HBV DNA检测排除标准：（1）HBsAg、抗-HCV、HIV-Ag/Ab、抗-TP ELISA检测不合格；（2）ALT速率法检测不合格。对ELISA及ALT检测结果合格的样本57 594例，采用上海浩源公司的ChiTas BSS1200全自动血液核酸检测仪以8混样模式提取血浆样本病毒核酸，进行荧光PCR HBV/HCV/HIV分项检测，对混样检测阳性的样本进行单人份拆分检测，拆分阳性判为不合格。

1.3.4 病毒载量的测定 对HBV DNA检测不合格样本128例进行HBV病毒载量测定。引物序列：HBV-1为5'-CAA CCT CCA ATC ACT CAC CAA C-3'、HBV-2为5'-ATA TGA TAA AAC GCC GCA GAC AC-3'，双标探针BS-1为5'-（Cy5）TCC TCC AAT TTG TCCTGG TTA TCG CT-（BHQ2）-3（引物探针由上海英骏生物技术公司广州分公司合成）；反应体系为2×Premix Ex Taq 12.5μL，Rox DyeⅡ（50×）0.4μL，引物HBV-1（10μmol/L）终浓度为0.4μmol/L，引物HBV-2（10μmol/L）终浓度为0.4μmol/L，探 针BS-1（5μmol/L）终 浓 度 为0.2μmol/L，补蒸馏水至25μL；反应条件为95℃ 10min，95℃ 30s、56℃ 1min，42个循环；HBV国际标准品（NIBSCcode：97/750，5×105IU per vial）。

1.4 统计学分析

采用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBsAg及HBsAg-/HBV DNA+总体检出率

河源地区60 351例无偿献血样本中检出HBsAg 667例，检出率为1.11%；57 594例ELISA及ALT检测结果阴性的样本中检出 HBsAg-/HBV DNA+128例，检出率为0.22%。

2.2 不同年份、年龄及献血次数的献血者HBsAg及HBV DNA检出率

2016～2018 年不同年份间HBsAg、HBsAg-/HBV DNA+检出率差异均无统计学意义（χ2=3.846，P=0.145；χ2=8.402，P=0.150）。不 同 年 龄、不 同献血次数间HBsAg检出率差异均有统计学意义（χ2=51.513，P=0.000；χ2=492.800，P=0.000）。不同年龄、不同献血次数间HBsAg-/HBV DNA+检出率差异均有统计学意义（χ2=34.217，P=0.000；χ2=15.617，P=0.000）。见表1。

表1 不同年份、年龄及献血次数的献血者样本HBsAg及HBV DNA检出情况

2.3 QPCR病毒定量结果

128例HBsAg-/HBV DNA+样本，其中95例病毒载量范围为0.210～1383.929IU/mL，中位数26.786 IU/mL，其余33例均不可定量，见表2。

表2 HBsAg-/HBV DNA+样本QPCR定量结果

3 讨论

采供血机构血液检测项目“乙型肝炎病毒（HBV）感染标志物”指的是乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）。我国属于HBV感染中等流行区[3]，但广东省仍然是乙肝高度流行区，广东省2014～2015年涉及169 211人的乙肝病毒社区流行病学调查数据广东省的HBsAg阳性率为8.76%，其中在23～59岁的成人群体中HBsAg阳性率高达12.71%[4]。2016 ～ 2018年我站HBsAg每年检出率分别为1.23%、1.02%、1.08%，三年间检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。河源地区HBsAg检出率低于广东潮汕（2.34%）[5]、四川绵阳（1.44%）[6]，高于深圳（0.63%）[7]及江苏南京（0.34%）[8]，提示HBsAg在不同地区的差异明显，经过献血前初筛，献血人员阳性率显著低于正常人群，但河源地区高于如深圳、南京等一线城市。自开展核酸检测以来，共检测57 594份样本，检出128例HBsAg-/HBV DNA+样本，检出率为0.22%，高于韶关（0.10%，1：949）[9]及深圳地区（0.056%）[10]核酸检出率。HBV总检出率为1.32%（795/60 351）显著高于未开展核酸检测前三年的检出率1.17%（P＜0.05）。说明ELISA联合NAT检测有效降低了输血传播HBV风险。河源地区HBsAg及HBV DNA阳性率均偏高，推测一方面是人群感染基数偏高，另一方面可能与该地区献血人群结构相关。从献血人群结构分析，HBsAg及HBV DNA的检出率随着年龄的增加逐渐增高，其中18～25岁献血者检出率最低，与叶贤林等[11]研究结论相符。我国1992年把乙肝疫苗纳入免疫规划，18～25岁年龄段人群均接受了乙肝疫苗注射，推测乙肝疫苗的接种可明显降低献血人群HBV感染的风险。此外，本研究中重复献血者HBsAg检出率明显低于初次献血者。建议该地区从固定献血者，特别是经乙肝疫苗免疫的低年龄段人群采集血液，可有效降低输血传播HBV风险。

本研究33例HBsAg-/HBV DNA+样本不可定量，占总定量样本数的26%（33/128）；95例病毒可定量的HBsAg-/HBV DNA+样本中，病毒载量5～50 IU/mL占57%（54/95），1100～1400 IU/mL占5%（5/95）。提示HBsAg-/HBV DNA+献血者主要为低水平HBV感染，与周怡等[12-14]研究结果相符。本课题组后期将进一步对以上献血者进行追踪随访，补充乙肝两对半及巢式PCR数据，对核酸检测结果进行确认并明确具体感染类型。我站核酸系统单样本检测HBV DNA灵敏度为6.3IU/mL，8样本混合检测灵敏度为50IU/mL，而目前研究数据显示隐匿性感染导致的HBV输血传播的最低感染剂量为3IU/mL[15]，远低于我站核酸检测系统的检测灵敏度，因此应选用更灵敏的核酸检测系统以进一步降低HBV经输血传播风险，提升血液安全。

综上所述，河源地区无偿献血者乙肝病毒感染标志物检出率较高，ELISA联合NAT检测有效降低了输血传播HBV风险。从固定献血人群及经乙肝疫苗免疫的低年龄段人群采集血液，可有效降低输血传播HBV风险。