双黄凝胶剂的制备及应用研究

刘安廷 张合城 罗玉萍 黄文丽 廖惠婉

凝胶剂是近年来兴起的下种药物新剂型,《中国药典》版一部在附录中规定，凝胶剂系指提取物与适宜基质，具有凝胶特性的半固体或稠厚体液体制剂，可从口腔，鼻腔，眼粘膜，消化道粘膜，阴道，直肠，皮肤等多种途径给药。凝胶剂在化学药制剂方面近年来应用比较迅速，而中药凝胶剂只处于待开发阶段。中药凝胶剂是对我国传统中药的一次创新，是属于现代中医药剂型的一种。中药凝胶剂经皮给药的方式，可避免肝脏的首过效应，可以使药物在外部病变区域直接发挥药效，对于一些皮肤疾病[1]，中药凝胶比中药的内服更快更有效，因此发展中药凝胶及安全性研究是现代中医药发展的一个方向。故本次我们对双黄凝胶剂的制备及应用开展了相关研究，以下是具体内容：

1 药材提取方法的筛选及双黄凝胶剂的制备

1.1 药材的提取

取处方量的黄连，黄柏粉碎成粗粉，以正交试验方法对本品的提取工艺进行了考察，确定各药材的提取工艺，以60%乙醇为溶媒，用渗漉法分别提取，提取液浓缩至每毫升相当于原药材1 g的浓度，抽滤，置冰箱中保存备用[2]。

1.2 双黄凝胶剂的制备

将处方量药物及辅料按制备工艺配制成双黄凝胶剂并建立质量标准。

2 药物体外透皮释放试验

2.1 药物接受液的选择

本实验接收液模拟人体生理条件，选用生理盐水，但药物水溶性差，且提取药液时以60%乙醇为溶媒，故接收液选用60%乙醇生理盐水，并调PH至6.5～7.5[3]。

2.2 药物透皮释放装置

采用 Franze 扩散池，接收室容积为6.8 mL，有效扩散面积为2.27 cm2，扩散池由两部分组成，上部分为药物供给室，用于加入药物，下部分为接收池，接收池容积为6.8 mL 装接收液接收药物，并放有磁搅拌子[4-6]。接收室侧边突出的部分为取样口，用于吸取药液，两部分中间放透过介质（雄性离体小鼠皮），并用夹子夹紧。

2.3 离体鼠皮的制备

取雄性小鼠，约20 g，取下腹部皮肤，用脱毛膏脱去鼠毛，迅速用生理盐水冲洗，并置冰箱中保存备用。使用期限为1周[7]。

2.4 透皮试验方法

建立双黄凝胶剂透皮扩散试验，采用容积为6.8 mL的立式Franze 扩散池，接收池与供给室之间放置处理好的鼠皮，接收池注入60%的乙醇生理盐水，并放入磁搅拌子，用夹子夹紧后加入300 mg配制好的双黄凝胶剂，并将其放入药物透皮扩散试验仪中，开启磁力搅拌，转速为400 rpm，恒温水浴（37±0.5）℃。放置过程中接收液与离体皮肤接触处不得有气泡[8-9]。8 h内每半个小时取样，将接收液全部抽出并补入等量接收液，在检测波长下测定吸光度，并算出药物单位面积累积渗透量Q。对处方及工艺不断改进，使4 h内体外透皮释放达50%以上。

3 急性皮肤毒性试验

豚鼠共分为5组，每组8只，分别为完整皮肤凝胶剂组、完整皮肤空白凝胶剂组、破损皮肤凝胶剂组、破损皮肤空白凝胶剂组、空白对照组。用脱毛膏将豚鼠背部脊柱两侧的毛均匀脱掉，养24 h观察其皮肤是否破损及基本情况。破损皮肤用一次性无菌注射器针头将皮肤“#”字划破来制备，以渗出细小血珠为佳[10]。完整皮肤、破损皮肤凝胶剂组均匀涂抹等量双黄凝胶剂，完整皮肤、破损皮肤空白凝胶剂组均匀涂抹等量空白凝胶剂作为空白对照。给药24 h后去除残留的药物，连续7天观察皮肤的反应情况以及豚鼠活动、摄食、呼吸、眼睛等情况。若有动物死亡，应及时进行尸检，必要时进行病理学检查。

4 皮肤刺激性试验

4.1 家兔皮肤的准备

用脱毛膏将家兔背部脊柱两侧的毛均匀脱掉，饲养24 h观察其皮肤是否破损及基本情况。将每只家兔脱毛区域分为4部分，分别为脊柱左上区，左下区，右上区，右下区，其中脊柱左上区、右上区分别为完整皮肤刺激试验区、完整皮肤空白对照区。脊柱左下区、右下区分别为破损皮肤刺激试验区、空白对照区。破损皮肤用一次性无菌注射器针头将皮肤“#”字划破来制备，以渗出细小血珠为佳[11]。

4.2 单次给药皮肤刺激性试验

取经处理后的健康家兔10只，脊柱左侧（包括左上区、左下区）均匀涂抹等量双黄凝胶剂，右侧（包括右上区、右下区）均匀涂抹等量空白凝胶剂作为空白对照，用医用纱布及医用胶布固定。24 h去除纱布，用生理盐水去除残留的药物，于去除药物后1 h、24 h、48 h、72 h观察试验部位有无红斑及水肿及其恢复等情况。

4.3 多次给药皮肤刺激性试验

给药方法与单次给药皮肤刺激性试验相同，连续给药7天，每天一次，每次换药前观察试验部位的情况，第7天结束后，去除纱布及残留药物，于1 h、24 h、48 h、72 h观察试验部位有无红斑及水肿及其恢复等情况。

5 结果与讨论

中药凝胶剂是对我国传统中药的一次创新，是属于现代中医药剂型的一种，经皮给药的方式，可避免肝脏的首过效应，可以使药物在外部病变区域直接发挥药效，比中药的内服更有效。不仅具备传统中药制剂所不具备的优势，还可容纳复方中药的细粉、提取液、浸膏剂等[12]。目前常用于抗炎镇痛、抗病毒、止痛等方面。凝胶剂具有美观、使用舒适、生物利用度高、稳定性好、不良反应少、不污染衣着等优点而且凝胶采用优良的基质，基质用量小，易于药物的溶出，涂抹在皮肤上，有舒适感，无刺激性，便于患者使用和携带，更容易被患者所接受该剂型有其独特的优点，能够产生较好的经济效益与社会效益，而且其工艺条件要求不苛刻，适合中药复方制剂的生产现状，因此是一种值得开发的剂型[13]。广东省大部分地区属于亚热带季风气候，全年炎热和潮湿，尤其是夏季，这种季节性特征极易诱发以湿热为主的各种皮肤病，湿疹、湿疮、皮炎等。黄连味苦、寒，归心、脾、胃、肝、胆及大肠经，具有清热燥湿、泄火解毒等功效。另外采用抑菌圈实验法，以黄连中四种主要生物碱小檗碱、黄连碱、巴马汀和药根碱对19种微生物进行了药物敏感性实验，结果表明4种生物碱均有一定的抗菌作用，且小檗碱抗菌能力最强。有研究以黄连、连翘、板蓝根、穿心莲等8种中药材对常引起医院内感染的7种条件致病菌进行了体外药物敏感试验，黄连的抗菌活性最强，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等7种常见的条件致病细菌普遍具有明显的抑制作用[14]。大量的临床研究发现，黄连及其复方治疗湿疹、湿疮、皮炎等疾病效果显著。黄柏具有清热燥湿、解毒泻火、抗菌消炎等功效，可用于治疗湿疹、湿疮、皮炎等疾病。杨磊等对黄柏拟进行初步的药效学实验，结果表明黄柏具有良好的抗炎、抗菌作用;欧丽兰等采用乙酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加和角叉菜胶诱导大鼠胸膜炎模型来观察黄柏醇提取物的抗炎作用[15]。结果表明黄柏醇提取物具有良好的抗炎作用，其抗炎机制可能是影响炎症介质的产生和抗氧化作用。根据临床研究发现，黄柏及其复方对湿疹、湿疮、皮炎等疾病的治疗效果显著，安全性高黄柏与黄连同为清热燥湿、泻火解毒药。两者配合使用，可起协同作用，增强疗效。黄连得黄柏相助，功专于下，加强清热燥湿、解毒泻火、抗菌消炎等作用。本研究以黄连、黄柏提取液为主药，与亲水性凝胶基质卡波姆-940等辅料制成双黄凝胶剂。并对其透皮吸收能力以及皮肤毒性进行研究，为治疗湿疹、湿疮、皮炎等疾病的临床研究提供数据。本研究所得双黄凝胶剂无油腻感，涂抹均匀，容易清洗，与皮肤耦合良好，生物利用度高，涂抹后可在患部皮肤形成一层很薄的保护膜，具有保护作用。可避免肝脏的首过效应，可以使药物在外部病变区域直接发挥药效，而且携带、贮存、运输等均较方便。