Girdin在宫颈癌中的表达及其与血管生成的关系

曲晓媛 刘晓庆 尹秀花

山东中医药高等专科学校

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一，占全部肿瘤发病的第三位，仅次于乳腺癌和结直肠癌，全球每年新增宫颈癌患者达50万例以上。截至目前，宫颈癌发病机制尚未完全明确，其血管生成的机制亦未完全明了。

肿瘤的发生发展、增殖侵袭及转移均依赖于肿瘤血管生成。肿瘤血管生成活跃程度对组织病理分级、放疗及预后判断都具有重要评估价值。Girdin（Gird of actin filaments）作为一种在哺乳动物中普遍表达的肌动蛋白结合蛋白[1]，在肿瘤的起始进展过程中扮演重要角色[2]。本研究旨在探索与肿瘤血管生成关系密切的Girdin在宫颈癌中的表达及其与血管生成的关系，以明确其在宫颈癌血管生成中的作用。

一、资料和方法

（一）一般资料

选择烟台毓璜顶医院2015年1月至2016年12月经手术病理证实的宫颈癌患者60例，作为实验组。所有患者均首次发病，术前未行任何治疗。另选择同期在该院因收集的正常宫颈组织标本20例，作为对照组。该研究已经伦理学委员会批准，患者知情同意。

（二）主要试剂

兔抗人Girdin多克隆抗体，鼠抗人CD34单克隆抗体。

（三）方法

1.标本处理。术中取新鲜标本，10%甲醛固定，常规石蜡包埋。每例组织连续切片4μm×3片，一片行HE染色明确病理诊断，其余两张行免疫组化染色。

2.免疫组化（Envision二步法）染色。实验步骤严格按照操作方法说明进行，Girdin多克隆抗体浓度1：120，CD34单克隆抗体浓度1：60。阴性对照采用PBS代替一抗，阳性对照采用结肠癌组织。

3.免疫组化结果判定。

（1）Girdin判定标准。Girdin阳性结果为细胞浆内出现棕黄色颗粒。每张切片随机观察10个高倍镜视野，计数100个宫颈癌细胞中阳性细胞数目，根据胞浆染色强度和阳性细胞百分比评定。胞浆染色强度：无染色计0分，浅黄色计1分，棕黄色计2分，深棕色计3分。阳性细胞百分比：无染色细胞为0分，染色细胞≤25%为1分，染色细胞26%～50%为2分，染色细胞＞50%为3分。上述两项相乘，按乘积分4级：0分为阴性（-），1～2分为弱阳性（＋），3～5分为中等阳性（＋＋），≥6分为强阳性（＋＋＋）。

（2） MVD计数。CD34标记肿瘤组织血管内皮细胞。以清晰棕黄色单个或数个血管内皮细胞围绕成簇作为1个血管标记。低倍镜选择MVD热区，转高倍镜下计数，取5个视野MVD平均值作为MVD。

（四）统计学方法

采用SPSS17.0统计软件。计量数据用均数±标准差表示。各参数值之间比较用x2检验及相关系数检验，相关性采用Spearman等级相关检验，以P ＜0.05为差异有显著性。

二、结果

（一） Girdin在正常宫颈组织和宫颈癌中的表达

Girdin在正常宫颈组织中不表达。宫颈癌中Girdin阳性率61.7%(37/60)。Girdin在宫颈癌中表达高于正常宫颈组织，差异有显著性（P＜0.05）。

（二）宫颈癌组织中的MVD计数

正常宫颈组织中MVD 18.3±3.99，宫颈癌中MVD 39.35±5.13。宫颈癌组织与正常宫颈组织MVD计数比较，差异有显著性(P＜0.05）。

（三）宫颈癌中Girdin与MVD之间的关系

宫颈癌中Girdin表达与MVD呈正相关（r=0.420，P＜0.01）。

三、讨论

（一）Girdin在宫颈癌中的表达

Girdin是日本学者于2005年首次发现并报道的一种细胞内大分子蛋白，普遍表达于哺乳动物细胞中，由1870个氨基酸组成，分子量220～250kDa，在维持肌动蛋白的结构、调控肿瘤细胞的增殖侵袭和转移、血管生成、创伤修复及细胞自噬等方面发挥重要作用。研究显示[3]，Girdin在乳腺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤组织中均高表达。本研究显示，Girdin在正常宫颈组织中不表达，在宫颈癌中高表达，提示Girdin与宫颈癌的发生发展密切相关。表皮生长因子受体信号被激活时，Akt可直接激活Girdin[4]，活化的Girdin在细胞内重新分布，募集肌动蛋白、促进片状伪足形成，最终促进细胞移行。Girdin和Akt可相互激活，因此，宫颈癌的发生发展过程中很可能存在这一信号通路的活化，从而促进癌细胞的存活和发展。但Girdin在宫颈癌中的具体作用机制尚不清楚，有待于进一步探索。

（二）宫颈癌中 Girdin表达与血管生成的关系

本研究结果显示，宫颈癌中CD34表达明显高于正常宫颈组织，说明宫颈癌中新生血管丰富，其发生发展与微血管密度之间可能存在某种关系，提示宫颈癌的新生血管生成可以为癌细胞提供充足的营养和血供，从而促进宫颈癌的恶性生物学行为。我们同时发现，宫颈癌中Girdin表达与MVD呈正相关，提示Girdin高表达可促进宫颈癌新生血管的形成，从而促进癌细胞的增殖、侵袭及转移。内皮细胞移行是组织血管再生最主要的一环。Girdin广泛分布于内皮细胞和血管平滑肌细胞中，是出生后血管形成不可或缺的蛋白，在细胞迁徙和重组肌动蛋白骨架中起着关键作用，提示Girdin可能与血管生成相关。

综上所述，Girdin与宫颈癌血管生成之间具有较好的相关性，提示Girdin在宫颈癌的血管生成中起重要作用，但其具体的作用机制，尚需深入探究，以期为宫颈癌的抗血管生成治疗提供新的认识。