意大利牛舌草抗氧化及抗血栓作用研究

朱晓东， 张佳佳， 郭玉婷， 兰 卫

(1乌鲁木齐市中医医院， 乌鲁木齐 830000； 新疆医科大学2克拉玛依学院， 新疆 克拉玛依 834099； 3中医学院， 乌鲁木齐 830011)

意大利牛舌草为紫草科意大利牛舌草(AnchusaitalicaRetiz)或琉璃苣(Borageofficinalis)的干燥地上部分[1,2]，主要化学成分为挥发油、三萜、黄酮等化合物[2]，具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等功效，临床上多用于抑郁症、高血压、肺炎及结核疾病的治疗[3]。本研究采用大鼠动脉血栓模型和正常小鼠模型，探究意大利牛舌草提取物抗血栓及抗氧化作用，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器AL204型电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)， UV-2550型紫外光谱仪(日本岛津公司)，BCD-238W型冰箱 (中国海尔有限公司)，微量移液枪(上海玻利鸽仪器有限公司)。

1.2试剂复方氯化钠注射液(国药集团新疆制药有限公司，批号 H65020068)，FeCl3(成都市临江化工厂，批号XK-001-2002101)，水合氯醛(武汉市和盛化工有限公司，批号1005412)，阿司匹林肠溶片(拜耳医药保健有限公司，批号J20130078)，超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，丙二醛(MDA)测试盒，谷胱甘肽过氧化物酶，(GSH-PX)测试盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3药材意大利牛舌草2017年2月购于新疆维吾尔药业有限公司(批号20160518)，经新疆医科大学中医学院资源教研室盛萍教授鉴定为紫草科植物意大利牛舌草(AnchusaitalicaRetiz)的干燥地上部分。

1.4实验动物SPF昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(20.0±2.0)g；Wistar大鼠，雌雄各半，体质量(200.0±20.0)g，购于新疆医科大学动物中心，许可证号：SCXK(新)2011-0004。

2 方法

2.1药材的提取方法将意大利牛舌草阴干后粉碎，称取5.0 kg粗粉2份置于容器中，分别加入蒸馏水、70%乙醇回流提取，提取液浓缩后得到意大利牛舌草水提物932 g，意大利牛舌草醇提物浸膏563 g。

2.2动物的分组及给药方法取健康昆明小鼠70只，随机分为7组(n=10)，正常对照组小鼠给予等体积蒸馏水，意大利牛舌草水提物高(678.40 mg/kg)、中(339.20 mg/kg)、低(169.60 mg/kg)剂量组，意大利牛舌草乙醇提物高(409.50 mg/kg)、中(204.75 mg/kg)、低剂量组(102.38 mg/kg)，小鼠每天灌胃给药1次，连续灌胃21 d。

2.3意大利牛舌草提取物的抗氧化作用末次给药24 h后，将小鼠摘除眼球取血，脱颈处死，室温静置2 h后放于冰箱4℃下3 h，待血液凝固血块收缩后，3 500 r/min离心15 min，取上层黄色血清于试管中，按试剂盒方法说明书测定小鼠血清中的SOD、MDA、GSH-PX含量。

2.4意大利牛舌草提取物对小鼠凝血时间(CT)的影响取健康昆明种小鼠40只，随机分为4组，正常对照组给予等体积蒸馏水，阳性对照组灌服阿司匹林(80 mg/kg)，意大利牛舌草醇提物组(204.75 mg/kg)，意大利牛舌草水提物组(339.20 mg/kg)，各组小鼠每天灌胃1次，连续灌胃14 d，于末次给药1 h后，用玻璃毛细管插入小鼠眼内眦后静脉丛中4～5 mm，轻轻转动，自血液流入毛细管内开始计时，待血液注满后，轻轻取出，每隔30 s折断毛细管约0.5 cm，观察折断处是否有血凝丝，至血凝丝出现为止，所用时间即为CT。

2.5意大利牛舌草提取物对小鼠止血时间(BT)的影响按“2.4”项下方法将小鼠分组、灌胃给药，给药1 h后，用利剪将距小鼠尾尖0.5 cm处剪断，从血液自行溢出时开始计时，每隔30 s用滤纸片吸去血滴1次，直至出血自然停止(滤纸吸时无血)，所用时间即为BT。

2.6意大利牛舌草提取物对大鼠体内动脉血栓形成的影响取Wistar大鼠24只，随机分成4组，正常对照组给予等体积蒸馏水，阳性对照组灌服阿司匹林(80 mg/kg)，意大利牛舌草醇提物组(141.75 mg/kg)，意大利牛舌草水提物组(234.83 mg/kg)。末次给药前禁食不禁水12 h，灌胃给药1 h后，用10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉, 将大鼠固定于鼠台，分离右颈总动脉,用塑料薄膜片隔开动脉与周围的组织,将滤纸剪成1 cm×1 c m的滤纸片，用35%的FeCl3浸润,包裹动脉20 min后，取出包裹处动脉段内的血栓，放在滤纸上，吸干血液，用电子天秤准确称量血栓湿重，并用千分尺准确测量血栓长度，计算血栓抑制率，血栓抑制率/% =(对照组血栓重量-给药组血栓重量)/对照组血栓重量×100%。

3 结果

3.1意大利牛舌草对小鼠抗氧化作用研究与正常对照组比较，意大利牛舌草醇提物高剂量组小鼠血清中SOD、GSH-PX活性升高， MDA含量降低，差异有统计学意义(P<0.01)；意大利牛舌草醇提物中、低剂量组小鼠血清中SOD、GSH-PX活性升高， MDA含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较，意大利牛舌草水提物高、中、低剂量组小鼠血清中SOD、GSH-PX活性升高，而使MDA含量降低，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 意大利牛舌草提取物对小鼠血清中SOD、MDA、GSH-PX的影响

注：与正常对照组比较,*P<0.05，**P<0.01。

3.2意大利牛舌草提取物对正常小鼠凝血、止血时间的影响与正常对照组比较，意大利牛舌草醇提物组小鼠凝血时间延长，差异有统计学意义(P<0.01)；意大利牛舌草水提物组小鼠凝血时间延长，差异有统计学意义(P<0.05)；意大利牛舌草醇提物组和意大利牛舌草水提物小鼠止血时间均延长，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

3.3意大利牛舌草提取物对大鼠体内动脉血栓形成的影响与正常对照组比较，意大利牛舌草醇提物组大鼠血栓湿重降低，差异均有统计学意义(P<0.01)；意大利牛舌草水提物组大鼠血栓湿重降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。阳性对照组血栓抑制率为45.09%，意大利牛舌草醇提物血栓抑制率为42.76%，意大利牛舌草水提物血栓抑制率为36.68%，见表3。

表2 意大利牛舌草提取物对正常小鼠凝血、止血时间的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

表3 意大利牛舌草提取物对大鼠体内动脉血栓形成的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4 讨论

血栓的形成与血管内皮损伤、血小板数量和活性、血液凝固性、抗凝活性、血液流变性异常等因素有关，是一个复杂的生理、生化及病理过程[4,5]。当机体内血管壁有损伤，凝血活性升高，血小板粘附、聚集性增强，血流速度缓慢，血液粘度增强时，就容易形成血栓[6]。凝血时间是观察药物对机体凝血机制有无影响的重要指标，主要受机体凝血因子的含量、功能以及血液中凝血因素、抗凝血因子活性的影响。目前有多种动脉血栓模型的建模方法，本研究采用FeCl3诱导建立大鼠颈总动脉血栓模型，其原理是利用FeCl3损伤血管壁，使血管内膜受损，从而激活血小板和凝血系统，在损伤局部形成阻塞性血栓[7]。该建模方法简单、易控制、重复性好，通过损伤血管壁内皮细胞而引起的血栓，更接近于临床上自发性血栓的组织形态特征。研究表明自由基与人类大部分常见疾病的发生有关，如心脑血管疾病、癌症的发生都与自由基有着密切的关系[8-9]。根据自由基学说理论，当机体衰老时，抗氧化系统抗氧化能力下降，自由基代谢产物增加，进而加速机体衰老,因此提高抗氧化酶的活性，降低自由基代谢产物的生成，是延缓衰老的重要途径[10-13]。本研究发现意大利牛舌草提物可抑制血栓形成，改善机体抗氧化能力，减少机体氧化损伤而发挥防治心血管疾病的作用，但其确切的药理作用机制仍有待于进一步研究。