蒲公英水提物对小鼠应激性肝损伤的保护作用研究

王 萌， 王帅伟， 隋欣儒， 尹广达， 范博铭， 张雪梅

(延边大学农学院，吉林 延吉 133002)

大肠杆菌(Escherichiacoli)是一种典型的革兰氏阴性无芽胞直杆菌，属于猪体内的常驻菌，一旦机体免疫力下降或环境变化就会引起仔猪发病，猪大肠杆菌病在养殖业是危害严重的常见病和多发病，发病率已达到60%以上。猪源性大肠杆菌病具有流行性广、发病率高、死亡率高的特点，长期以来给养猪业带来了巨大的经济损失。目前，细菌耐药性导致的问题非常严重，尤其是大肠杆菌对抗菌药物的耐药性问题已在世界范围内引起了重视[1]。由于耐药菌株的产生，使得抗生素药效降低。所以开发不易产生耐药性、药效强、成本低的新型药物是未来防治大肠杆菌病的主要方向。

蒲公英(Dandelion)别名婆婆丁、蒲公草、黄花地丁等[2]。蒲公英作为一种传统中药,含有丰富的生物活性物质，包括甾醇、生物碱、萜类、糖蛋白、低聚糖等[3-4]。蒲公英具有清热解毒、消肿散结、利湿、利尿通淋、保肝利胆等功效，现代药理研究表明，其具有抗氧化、抗疲劳、抗菌和抗炎等多种作用[5-7]，且价格低廉、毒副作用小，被广泛用于疔疮肿痛、乳痈、眼痛目赤、肺痈、热淋涩痛、急性乳腺炎、感冒等多种炎症性疾病的治疗。本试验探讨了蒲公英水提物对猪源大肠杆菌所引起的应激性肝损伤的保护作用和血清中炎性细胞因子的表达调节效果，为蒲公英药物的进一步研发和畜禽大肠杆菌性疾病的防治提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

体重18～22 g昆明小鼠25只，8周龄，购自延边大学实验动物中心。

1.2 试验菌株

猪源大肠杆菌分离株D4菌悬液，由延边大学农学院动物医学系药理毒理实验室在延边某养殖场分离鉴定菌株。

1.3 蒲公英水提物

将药店买来的蒲公英干草置于煎器中，加水浸没药材，浸泡适宜时间后，加热至煮沸，保持微微沸腾一定时间，分离煎出液，药渣依法煎出3次，至煎液味淡为止，合并3次煎出液，浓缩至规定浓度。

1.4 主要试剂

TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ、IL-4试剂盒均购于Biolegend 公司；GSH、SOD试剂盒均购于南京建成研究所。

1.5 试验方法

1) 试验动物分组与给药

选25只小鼠，适应性饲养3 d后，随机分为5组，每组5只，分别为空白组、模型组及蒲公英提取物低、中、高剂量组(2.5、5、10 g/kg)。蒲公英提取物高、中、低剂量组连续灌胃7 d，2次/d，空白组灌胃等体积生理盐水。

2) 动物模型的建立

给药7 d后，除空白组外，每组小鼠均腹腔注射猪源大肠杆菌分离株D4菌悬液1×109CFU/kg，空白组腹腔注射等体积灭菌生理盐水。

3) 小鼠肝组织中GSH和SOD活性的测定

用匀浆器将肝脏制成匀浆，取上清液。根据GSH和SOD的试剂盒说明书，检测小鼠肝脏中GSH和SOD的活性。

4) ELISA法测定细胞因子的含量

各组小鼠于接菌24 h后眼球取血，分离血清，严格按照ELISA说明书测定血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、IL-4的含量。

5) 统计学分析

2 结果与分析

2.1 蒲公英水提物对应激性肝损伤小鼠肝组织匀浆GSH和SOD含量的影响

由表1,2可知，与空白组相比，模型组极显著的降低了小鼠肝脏中GSH和 SOD的含量(P<0.01)。与模型组相比，蒲公英水提物高剂量组能极显著提高GSH和SOD的活性(P<0.01)，中、低剂量组显著增加了 GSH的活性(P<0.05)，中剂量组显著增强了 SOD的活性(P<0.05)，而低剂量组对小鼠肝脏中SOD的活性增强无显著性的差异(P>0.05)。结果表明：蒲公英水提物能以剂量依赖方式增强猪源性大肠杆菌所致应激性肝损伤小鼠肝脏中GSH和SOD的活性。

表1蒲公英水提物对小鼠肝组织匀浆GSH含量的影响

Table1EffectofdandelionextractonGSHcontentinliverhomogenateofmice

组别给药剂量(g/kg)GSH (μmol/gptot)空白组—68.17±2.65模型组—51.70±2.46##蒲公英水提物低剂量组2.557.78±3.59*蒲公英水提物中剂量组560.68±2.82*蒲公英水提物高剂量组1074.23±3.79**

注：与空白组比较,##P<0.01；与模型组比较,*P<0.05，**P<0.01。

表2蒲公英水提物对小鼠肝组织匀浆SOD含量的影响

Table2EffectofdandelionextractonSODcontentinliverhomogenateofmice

组别给药剂量(g/kg)SOD (U/mgprot)空白组—154.36±14.25模型组—64.01±11.68##蒲公英水提物低剂量组2.570.28±13.65蒲公英水提物中剂量组585.04±10.43*蒲公英水提物高剂量组10109.33±7.25**

注：与空白组比较,##P<0.01；与模型组比较,*P<0.05，**P<0.01。

2.2 蒲公英水提物对应激性肝损伤小鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ和IL-4表达量的影响

由图1 可知，相较于空白组，模型组血清中的TNF-α含量极显著升高(P<0.01)。与模型组相比，蒲公英水提物高、中剂量组极显著抑制了血清中TNF-α的分泌(P<0.01)，但低剂量组无显著差异(P>0.05)。结果表明：蒲公英水提物能通过剂量依赖方式明显抑制猪源性大肠杆菌所致应激性肝损伤小鼠血清中TNF-α的分泌。

注：与空白组比较,##P<0.01；与模型组比较,*P<0.05，**P<0.01。

由图2可知，相较于空白组，模型组血清中IL-6的含量极显著升高(P<0.01)。与模型组相比，蒲公英水提物高、中剂量组极显著抑制了血清中IL-6的分泌(P<0.01)，但低剂量组无显著差异(P>0.05)。结果表明：蒲公英水提物能剂量依赖性抑制猪源性大肠杆菌所致应激性肝损伤小鼠血清中IL-6的分泌。

注：与空白组比较,##P<0.01；与模型组比较,*P<0.05，**P<0.01。

由图3可知，相较于空白组，模型组血清IL-1β中的含量极显著升高(P<0.01)。与模型组相比，蒲公英水提物高、中剂量组能极显著抑制血清中IL-1β的分泌(P<0.01)，但低剂量组无显著差异(P>0.05)。结果表明：蒲公英水提物能剂量依赖性抑制猪源性大肠杆菌所致应激性肝损伤小鼠血清中IL-1β的分泌。

注：与空白组比较,##P<0.01；与模型组比较,*P<0.05，**P<0.01。

由图4可知，相较于空白组，模型组血清中IFN-γ的含量极显著升高(P<0.01)。与模型组相比，蒲公英水提物高、中剂量组能极显著抑制血清中IFN-γ的分泌(P<0.01)，但低剂量组无显著差异(P>0.05)。结果表明：蒲公英水提物能剂量依赖性抑制猪源性大肠杆菌所致应激性肝损伤小鼠血清中IFN-γ的分泌。

注：与空白组比较,##P<0.01；与模型组比较,*P<0.05，**P<0.01。

由图5可知，相较于空白组，模型组血清中IL-4的含量极显著升高(P<0.01)。与模型组相比，蒲公英水提物高、中剂量组能极显著抑制血清中IL-4的分泌(P<0.01)，但低剂量组无显著差异(P>0.05)。结果表明：蒲公英水提物能剂量依赖性抑制猪源性大肠杆菌所致应激性肝损伤小鼠血清中IL-4的分泌。

注：与空白组比较,##P<0.01；与模型组比较,*P<0.05，**P<0.01。

3 讨论与结论

据研究报道，蒲公英水煎剂具有广谱的抑菌作用，对大肠杆菌、痢疾杆菌、白色葡萄球菌、肺炎杆菌等均有效，尤其对大肠杆菌有较强的抑菌活性且不易产生耐药性[8-10]，可改善机体免疫抑制状态，增强和调节机体免疫功能。前人研究表明，蒲公英可以调节动物血清中IL-2、IFN-γ、IL-4 的分泌量，减少炎症反应，减轻氧化应激，使肝伤小鼠抗氧化能力升高而起到保肝作用[11-12]。蒲公英可拮抗内毒素所致的肝细胞溶酶体和线粒体的损伤，解除抗菌素作用后所释放的内毒素导致的毒性作用。对急性肝损伤的大鼠有保护作用[13]。

TNF-α、IL-6 、IL-1β和IFN-γ是由一组单核巨噬细胞、内皮细胞产生的细胞因子，具有激活细胞分化 、增强细胞杀伤靶细胞促进吞噬功能，也是机体炎症反应和一系列病理生理过程的重要炎症介质[15]。IL-4是Th2分泌主要细胞因子介导体液免疫对TNF-α有明显抑制作用[16]。小鼠血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、IL-4在模型组中分泌量显著升高，与模型组相比，蒲公英水提物高、中剂量组均能显著抑制TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、IL-4含量。由此可知，各浓度的蒲公英水提物均能提高激性肝损伤小鼠肝组织GSH、SOD活性，降低血清中相关炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、IL-4的过量表达。

综上可知，蒲公英水提物通过降低小鼠血清炎性因子的表达量及升高肝组织GSH和SOD活性，降低炎症反应，提高肝脏抗氧化能力，从而对猪源性大肠杆菌所致应激性肝损伤的小鼠肝脏起到保护作用。在临床上常用于清热解毒，消肿散结，擅长于消散痈肿和疔疮。