IL-2治疗与肝细胞癌化疗敏感性的相关性

平秀琴 秦萍 王黎洲

【摘要】 目的 探究白细胞介素-2（IL-2）治疗与肝细胞癌（HCC）化疗敏感性的相关性。方法 选取经IL-2治疗的36例肝细胞癌化疗患者为观察组， 取 S-P 免疫组织化学方法;选择同期非IL-2治疗的36例肝细胞癌化疗患者为对照组， 检测肝细胞癌存档石蜡包埋切片组织中多药耐药相关蛋白1（MRP1）、IL-2 受体α链的表达。观察免疫组化实验结果， 比较两组MRP1、IL-2受体α链表达。结果 细胞浆内和（或）细胞膜是MRP1 在肝组织中的表达定位， 其中较显著的是胞浆内。其阳性细胞呈弥散性或灶状分布， 免疫组化染色为棕黄色细颗粒状， 在癌旁及肝癌组织、肝硬化表达中显著增高， 正常肝细胞中低表达， 细胞间质中无显著着色情况出现。同时以PBS代替一抗为阴性对照组， 细胞胞浆和细胞外间质都存在， 可见散在棕黄色着色于两张切片镜下， 考虑实验操作污染造成， 结果均视为阴性， 且余切片没有染色。IL-2受体α链其免疫组化染色呈胞膜型， 呈棕黄色。且PBS液为一抗对照组无显著着色。观察组MRP1、IL-2受体α链表达吸光度A分别为（0.33630±0.04466）、（0.30180±0.04022）高于对照组的（0.30070±0.03763）、（0.26300±0.02223）， 差异有统计学意义（P<0.05）。结论 针对肝细胞癌患者， 采用IL-2治疗， 在增加机体抗肿瘤免疫时， 相应的提升了患者肝癌细胞对化疗药物的耐受性， 所以在以化疗为主要手段时联合应用IL-2降低临床治疗效果。

【关键词】 肝细胞癌;白细胞介素-2;化疗;敏感性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.35.022

在我国， 肝细胞癌为常见恶性肿瘤之一， 最佳的治疗方式是手术切除， 但是当前仅仅有30%的切除率[1]。针对难以手术切除及巩固治疗的患者， 主要的治疗方式是化疗。但是肝癌并非化疗敏感的肿瘤， 因多药耐药蛋白降低肝癌化疗的疗效， 且又因临床诊断的肝癌大多数是晚期， 对化疗药物不敏感， 大多处在G0期[2]。另外针对肝癌的综合治疗， 免疫治疗的介入提供了全新思路， 临床及实验证明联合或单用， 可實现对消化道恶性肿瘤治疗效果的显著增加。但是当前IL-2和化疗间是否存在拮抗或协同作用， 报道依旧很少。此次研究对IL-2治疗与肝细胞癌化疗敏感性的相关性进行探究， 结果如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2018年1～12月经IL-2治疗的36例肝细胞癌化疗患者作为观察组， 选择同期非IL-2治疗的36例肝细胞癌患者为对照组。患者均签订了知情同意书。存档石蜡包埋组织切片， 实施二次切除的肝细胞癌标本。观察组年龄18～85岁， 平均年龄（52.2±11.4）岁;男20例， 女16例;部分患者为皮下注射， 1个疗程时间为7 d， 100万 U/（次·d）， 进行1～4次不等， 部分患者经肝动脉所置化疗泵或门静脉注射， 28～33 d-1， 5～10 次不等， 100万U/次。对照组年龄19～84岁， 平均年龄（51.8±11.3）岁;男19例， 女17例。排除化疗史、手术方式或经动脉化疗栓塞（TACE）、病程、肿瘤分期等因素对MRP1表达影响作用。两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。患者均签订了知情同意书。

1. 2 方法 观察组取S-P免疫组织化学方法， 对照组检测肝细胞癌存档石蜡包埋切片组织中MRP1、IL-2 受体α链的表达。存档石蜡包埋组织切片， 实施二次切除的肝细胞癌标本。

1. 2. 1 试剂 选择美国Santa Cruz 生物技术有限公司生产的， 武汉苑凌生物实验器械公司的鼠抗人MRP1单抗（sc-18835）。同时选择美国Sigma公司生产、北京中山生物技术有限公司的 DAB显色剂及S-P免疫组化试剂盒;武汉博士德生物工程有限公司生产的抗IL-2受体α链单抗[3]。

1. 2. 2 方法

1. 2. 2. 1 图象分析 选择半定量方法， 把切片放大200倍取图， 同时对各切片的染色强度进行分析， 选择高清晰度医学图文分析系统HMIAS-2000。经盲法取3个视野， 计算吸光度， 获得的平均值是切片的吸光度值[4]。

1. 2. 2. 2 S-P免疫组织化学染色 常规化的把上述标本石蜡切片， 微波抗原修复， 蛋白酶消化。选择苏木素轻度衬染细胞核。参见S-P试剂盒说明书的具体步骤[5]。DAB显色， 以IL-2受体α链抗体为阴性对照， 抗MRP1抗体经磷酸盐缓冲液（PBS）液代替。

1. 3 观察指标 观察免疫组化实验结果， 比较两组MRP1、IL-2受体α链表达。

1. 4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验;计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 免疫组化实验结果 细胞浆内和（或）细胞膜是MRP1在肝组织中的表达定位， 其中较显著的是胞浆内。其阳性细胞呈弥散性或灶状分布， 免疫组化染色为棕黄色细颗粒状， 在癌旁及肝癌组织、肝硬化表达中显著增高， 正常肝细胞中低表达， 细胞间质中无显著着色情况出现。同时以PBS代替一抗为阴性对照组， 细胞胞浆和细胞外间质都存在， 可见散在棕黄色着色于两张切片镜下， 考虑实验操作污染造成， 结果均视为阴性， 且余切片没有染色。IL-2受体α链其免疫组化染色呈胞膜型， 呈棕黄色。且PBS液为一抗对照组无显著着色。

2. 2 两组MRP1 、IL-2受体α链表达比较 观察组MRP1、IL-2受体α链表达高于对照组， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3 讨论

在肿瘤免疫治療中， IL-2为关键的细胞因子之一， 可经提升淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）、自然杀伤（NK）细胞活性， 激活肿瘤浸润淋巴细胞， 增强细胞毒性T细胞（CTL）对肿瘤细胞杀伤作用， 使肿瘤生长停止， 诱导机体抗肿瘤免疫反应， 改善化疗所致的免疫抑制[6]。此次研究中， 细胞浆内和（或）细胞膜是MRP1在肝组织中的表达定位， 其中较显著的是胞浆内。其阳性细胞呈弥散性或灶状分布， 免疫组化染色为棕黄色细颗粒状， 在癌旁及肝癌组织、肝硬化表达中显著增高， 正常肝细胞中低表达， 细胞间质中无显著着色情况出现。同时以 PBS 代替一抗为阴性对照组， 细胞胞浆和细胞外间质都存在， 可见散在棕黄色着色于 两张切片镜下， 考虑实验操作污染造成， 结果均视为阴性， 且余切片没有染色。IL-2受体α链其免疫组化染色呈胞膜型， 呈棕黄色。且PBS 液为一抗对照组无显著着色。观察组MRP1 、IL-2受体α链表达高于对照组， 差异有统计学意义（P<0.05）。说明IL-2的治疗具有显著有效性， 患者对化疗药物的耐药性经IL-2 的治疗显著增加。

综上所述， 对肝细胞癌患者采用IL-2治疗， 在增加机体抗肿瘤免疫时相应的提升了患者肝癌细胞对化疗药物的耐受性， 所以在以化疗为主要手段时联合应用IL-2会降低临床治疗的效果。

参考文献

[1] 周黎强， 余春慧， 赵亮. 肝动脉灌注化疗术与口服索拉非尼治疗晚期肝癌的疗效. 临床医学研究与实践， 2018， 3（18）：24-25.

[2] 白琛， 唐芳， 杨茹， 等. 肝动脉化疗栓塞联合恩替卡韦治疗乙型肝炎相关性原发性肝细胞癌的疗效及其对炎性因子和免疫功能的影响. 兰州大学学报（医学版）， 2016， 42（1）：10-15.

[3] 刘俊， 武金才， 郑进方， 等. 中晚期肝癌介入治疗后应用血必净的临床疗效观察. 海南医学， 2018， 29（3）：413-415.

[4] 贾利刚， 张媛， 田菲. 叶酸联合辛复宁对人乳头瘤病毒感染宫颈癌患者血清CRP、HGF、IL-2、TNF-α水平影响研究. 中国生化药物杂志， 2015， 35（10）：96-98.

[5] 肖琦. Foxp3、Il-2、Il-10和TGF-β1在肝细胞癌中的表达及TACE对其表达的影响. 南昌大学， 2012.

[6] 邱盛续， 徐正进， 连圣杰. 肝动脉化疗栓塞术联合射频消融术对大肝癌患者的疗效及免疫功能状态的影响. 福建医药杂志， 2019， 41（1）：30-33.

[收稿日期：2019-04-25]