表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂联合化疗促进食管癌细胞凋亡的研究

程效良　江峰　黄建　何枝生　彭亚琼

[摘要]目的 探討西妥昔单抗联合化疗的最佳抗瘤效应及分子机制，以期为食管癌靶向治疗的临床应用提供一定的理论依据。方法 选取2017年1月～2018年12月在我院接受治疗的60例食管癌患者作为研究对象，按照随机数字表法将其分为对照组和观察组，每组各30例。对照组患者接受紫杉醇+顺铂新辅助化疗，观察组患者接受西妥昔单抗联合紫杉醇+顺铂新辅助化疗。比较两组患者化疗前后的转录因子叉头框蛋白A1（FOXA1）、ATP结合盒转运子E1（ABCE1）、泛素化特异性蛋白酶39（USP39）、神经巢蛋白mRNA（Nestin mRNA）促增值基因表达量和硝酸戊四醇酯（PETN）、锌指转录因子4（KLF4）、肺癌肿瘤抑制物1（TSLC1）、膜联蛋白A2（ANXA2）抗增殖基因表达量。结果 化疗前，两组患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）;化疗后，两组患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表达量均低于化疗前，差异有统计学意义（P<0.05），观察组患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestinm RNA表达量低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。化疗前，两组患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）;化疗后，两组患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表达量均高于化疗前，差异有统计学意义（P>0.05），观察组患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表达量均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 西妥昔单抗联合化疗可有效抑制食管癌细胞的恶性程度，抑制其增殖侵袭。

[关键词]表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂;食管癌;细胞凋亡;抑制

[中图分类号] R735.1          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）11（b）-0004-04

Study on promoting apoptosis of esophageal carcinoma cells induced by epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor combined with chemotherapy

CHENG Xiao-liang1   JIANG Feng1   HUANG Jian1   HE Zhi-sheng1   PENG Ya-qiong2

1. Department of Thoracic Surgery， Jiangxi Cancer Hospital， Nanchang   330000， China; 2. Department of Medical Records， Jiangxi Provincial Tumor Hospital， Nanchang   330000， China

[Abstract] Objective To investigate the optimal anti-tumor effect and molecular mechanism of Cetuximab combined with chemotherapy， in order to provide a theoretical basis for the clinical application of targeted therapy for esophageal cancer. Methods Sixty patients with esophageal cancer who were treated in our hospital from January 2017 to December 2018 were selected as subjects in the study. According to the random number table method， they were divided into control group and observation group， with 30 cases in each group. In the control group， Paclitaxel plus Cisplatin neoadjuvant chemotherapy was used， while in the observation group， Cetuximab was added besides Paclitaxel plus Cisplatin neoadjuvant chemotherapy. The expression quantity of gene proliferation of transcription factors such as forkhead box protein A1 （FOXA1）， ATP binding cassette E1 （ABCE1）， ubiquitin-specific protease 39 （USP39）， and nestin mRNA （Nestin mRNA） and the expression quantity of gene anti-proliferation of pentaerythritol nitrate （PETN）， zinc finger transcription factor 4 （KLF4）， lung cancer tumor suppressor 1 （TSLC1）， annexin A2 （ANXA2） were compared before and after chemotherapy in the two groups. Results Before chemotherapy， there were no significant differences in FOXA1， ABCE1， USP39， and Nestin mRNA between the control group and the observation group （P>0.05）. The levels of FOXA1， ABCE1， USP39 and Nestin mRNA were lower compared with those before chemotherapy， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of FOXA1， ABCE1， USP39 and Nestin mRNA in the observation group were lower than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Before chemotherapy， there were no significant differences in PETN， KLF4， TSLC1 and ANXA2 between the control group and the observation group （P>0.05）. After chemotherapy， the expression of PETN， KLF4， TSLC1 and ANXA2 were all higher than those before chemotherapy， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of PETN， KLF4， TSLC1 and ANXA2 in the observation group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Cetuximab combined with chemotherapy can effectively inhibit the malignant degree of esophageal cancer cells as well as their proliferation and invasion.

[Key words] Epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor; Esophageal cancer; Apoptosis; Inhibition

食管癌是我国常见的恶性肿瘤，预后极差，会对患者的生命安全构成直接性的威胁。近年来，受到人口老龄化加剧、人们饮食习惯改变等因素的影响，食管癌的发病率有了明显上升，临床防治形势不容乐观。既往研究表明，食管癌的预后与多种因素有关，其中与表皮生长因子受体表达的关系密切。因此，对于食管癌的治疗，应该注重对表皮生长因子受体表达的改善。西妥昔单抗是特异性针对表皮生长因子受体IgG1单克隆抗体，能与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的配体结合，从而阻断下游信号传导通路[1]。研究表明，在EGFR表达阳性的恶性肿瘤治疗过程中，单药治疗或联合化疗，抗肿瘤活性均有良好的效果[2]。目前尚不明确西妥昔单抗与化疗以何种顺序给药效果最佳。因此，本研究选取在我院接受治疗的60例食管癌患者作为研究对象，对EGFR酪氨酸激酶抑制剂（selective tyrosine kinase inhibitor，TKIs）联合化疗促进食管癌细胞凋亡的相关情况展开探究，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2017年1月～2018年12月在我院接受治疗的60例食管癌患者作为研究对象，按照随机数字表法将其分为对照组和观察组，每组各30例。对照组中，男18例，女12例;年龄37～78岁，平均（65.32±2.37）岁;病程3～10年，平均（5.61±0.78）年;肿瘤分期：Ⅲ期17例，Ⅳ期13例。观察组中，男20例，女10例;年齡35～76岁，平均（64.97±2.41）岁;病程3～11年，平均（5.52±0.69）年;肿瘤分期：Ⅲ期18例，Ⅳ期12例。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

纳入标准：①患者经病理诊断确诊为原发性食管癌;②患者均为首次确诊，入院前未接受系统治疗;③患者均知晓本研究内容和目的，并签署知情同意书;④本研究经我院医学伦理委员会审核及同意。排除标准：①有既往食管癌手术史者;②合并其他系统恶性肿瘤者;③合并心、肝、肾等器质性严重病变者;④对本研究使用药物过敏者;⑤有神经系统疾病及认知障碍者;⑥临床资料不完整者。

1.2方法

对照组患者接受紫杉醇（宁波绿之健药业有限公司，国药准字H20053622）+顺铂（广东岭南制药有限公司，国药准字H20143124）新辅助化疗。化疗方案：紫杉醇135 mg/m2，静脉滴注30 min，每天1次;顺铂75 mg/m2，静脉滴注30 min，每天1次。21 d为1个疗程，连续化疗2个疗程。

观察组患者接受西妥昔单抗（Boehringer Ingelheim Pharma Gmb H Co. KG，批准文号S20050095）联合紫杉醇+顺铂新辅助化疗。①化疗方案：同对照组。②西妥昔单抗用量：首剂静脉滴注负荷剂量400 mg/m2西妥昔单抗，于120 min内滴注完成;然后每周给予250 mg/m2（静脉滴注60 min）。

1.3观察指标

观察比较两组患者化疗前后的转录因子叉头框蛋白A1（foxhead box A1，FOXA1）、ATP结合盒转运子E1（ATP-binding cassette trans-porter E1，ABCE1）、泛素化特异性蛋白酶39（ubiquitin-specific protease，USP39）、神经巢蛋白mRNA（nestin messenger ribouncleic acid，Nestin mRNA）促增值基因和硝酸戊四醇酯（pentaerythritol tetranitrate，PETN）、锌指转录因子4（krtippel-like factor，KLF4）、肺癌肿瘤抑制物1（tumor suppressor in lung cancer 1，TSLC1）、膜联蛋白A2（annexin A2，ANXA2）抗增殖基因表达情况。

化疗前胃镜取患者的食管肿瘤组织标本、化疗后留取患者的术中肿瘤组织标本，并将标本经裂解细胞→沉淀总RNA→RNA洗涤干燥→RNA纯度及浓度测定→反转录合成样品cDNA→荧光定量PCR目标基因扩增等步骤处理。

1.4统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验;计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组患者化疗前后食管癌组织中促增殖基因表达量的比较

两组患者化疗前的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）;两组患者化疗后的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表达量均低于化疗前，差异有统计学意义（P<0.05）;观察组患者化疗后的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表达量均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。

2.2两组患者化疗前后食管癌组织中抗增殖基因表达量的比较

两组患者化疗前的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）;两组患者化疗后的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表达量均高于化疗前，差异有统计学意义（P<0.05）;观察组患者化疗后的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表达量均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

3讨论

临床恶性肿瘤中，食管癌属于常见病和多发病，其发病率和致死率均位居恶性肿瘤的前列[3]。食管癌的严重程度较高，预后性较高，一旦诊治不及时，将直接威胁到患者的生命安全，因此早期食管癌进行手术治疗可获得更高的治愈率。晚期食管癌的主要治疗手段是联合化疗及放疗，化疗药物主要包括顺铂加氟尿嘧啶、顺铂加多西紫杉醇、顺铂加紫杉醇及奥沙利铂加氟尿嘧啶等，但各方案治疗的完全缓解率低，缓解期短，目前尚无标准化疗方案[4-5]。

肿瘤分子靶向治疗是近年来肿瘤治疗研究领域的热点，它以肿瘤细胞的某个基因特性改变为作用靶点，在发挥更强的抗肿瘤活性同时，减少对正常细胞的毒副作用，成为肿瘤治疗新的方向[6-7]。EGFR，也被称为HER-1或cerbB-1，对细胞生长和分化、血管生成和凋亡均有着相应的调控作用。目前，恶性肿瘤的发生、发展及预后的相关因素中，EGFR的信号通路的变化已被明确为其中之一[8-9]。在上皮来源恶性肿瘤患者中，绝大部分的患者EGFR的表达存在过度现象。文献报道显示，食管癌患者存在EGFR高表达的占比40%～80%[10-11]。EGFR-TKIs是EGFR激酶区（TK）的激酶活性抑制剂，相当一部分属于小分子喹唑啉类衍生物，其与ATP竞争性结合胞外配体，对ATP与TK的结合起到抑制作用，从而阻断酪氨酸自身磷酸化，最终对EGFR的激活实现抑制，间接地促进癌细胞凋亡，达到抑制肿瘤浸润或者远期转移的目的[12-13]。

西妥昔单抗是为IgG1单克隆抗体，具有干扰EGFR及下游信号激活，从而抑制细胞分化和血管生成的作用[14-17]。臨床对于西妥昔单抗在恶性肿瘤中的应用研究并不少见，对其在恶性肿瘤中的应用效果也表现出了认可。国内一项针对西妥昔单抗治疗恶性肿瘤的研究[18]发现，低分化食管腺癌EGFR的表达为57.0%，低恶性肿瘤则为13.0%，两者比较，差异有统计学意义（P<0.05），同时对于低分化食管腺癌患者而言，其中位存活时间结果为：EGFR阴性患者35个月，阳性患者16个月。有研究者在EGFR阳性的低位食管癌和胃癌的Ⅰ/Ⅱ期临床试验中，应用西妥昔单抗联合表柔比星、顺铂、卡培他滨，结果提示，患者的反应率达53%，疗效高于单纯化疗组[19]。本研究结果提示，化疗后，两组患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表达量均低于化疗前，差异有统计学意义（P<0.05），观察组患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表达量低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），化疗后，两组患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表达量均高于化疗前，差异有统计学意义（P>0.05），观察组患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表达量均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），提示在实施不同的干预方案后，观察组患者的促增殖基因表达均低于对照组，抗增殖基因表达均高于对照组，说明了西妥昔单抗联合化疗食管癌的有效性，对细胞凋亡具有重要的促进意义。

综上所述，西妥昔单抗联合化疗可有效抑制食管癌细胞的恶性程度，抑制其增殖侵袭，达到促进癌细胞凋亡的目的。

[参考文献]

[1]乔建兵，陈文萍，王琳，等.西妥昔单抗联合顺铂对荷食管鳞癌裸鼠移植瘤的抑制作用[J].中华肿瘤防治杂志，2015， 22（12）：907-910.

[2]商悦，刘旭杰，陈淑珍.表没食子儿茶素没食子酸酯与西妥昔单抗联用体内外抗食管癌细胞Eca-109的作用研究[J].中国医药生物技术，2015，10（1）：18-24.

[3]Xiao BK，Yang JY，Dong JX，et al.Meta-analysis of seven randomized control trials to assess the efficacy and toxicity of combining EGFR-TKI with chemotherapy for patients with advanced NSCLC who failed first-line treatment[J].Asian Pac J Cancer Prev，2015，16（7）：2915-2921.

[4]顾佳佳，尹丽，吴婧，等.西妥昔单抗体外协同增加顺铂对人鼻咽癌细胞株的抗肿瘤作用[J].中国肿瘤，2016，25（4）：303-308.

[5]季艳霞，康振桥，陈永革.晚期非小细胞肺癌表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）获得性耐药患者化疗后序贯应用EGFR-TKI的疗效评价[J].中国医师进修杂志，2018，41（8）：731.

[6]Park S，Keam B，Kim SH，et al.Pemetrexed singlet versus nonpemetrexed-based platinum doublet as second-line chemotherapy after first-line epidermal growth factor receptor （EGFR） tyrosine kinase inhibitor failure in non-small cell lung cancer patients with EGFR mutations[J].Cancer Res Treat，2015，47（4）：630-637.

[7]庞歆桥，曹邦伟.细胞自噬与EGFR抑制剂在肿瘤治疗中的研究进展[J].临床与病理杂志，2016，36（5）：681-689.

[8]赵玉林，邹剑.西妥昔单抗联合紫杉醇+顺铂新辅助化疗对食管癌细胞增殖及侵袭活力的影响[J].海南医学院学报，2017，23（14）：1953-1956.

[9]庞歆桥，赵鹏飞，杨凡，等.黄芪甲苷联合西妥昔单抗对人结肠癌细胞系RKO自噬调节与增殖的抑制作用[J].实用医学杂志，2016，32（18）：2992-2995.

[10]Miyauchi E，Inoue A，Kobayashi K，et al.Efficacy of chemotherapy after first-line gefitinib therapy in EGFR mutation-positive advanced non-small cell lung cancer-data from a randomized phase Ⅲ study comparing gefitinib with carboplatin plus paclitaxel （NEJ002）[J].Jpn J Clin Oncol，2015， 45（7）：670-676.

[11]张宝月，张俊农.表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼联合山奈酚诱导卵巢癌细胞凋亡的协同机制[J].吉林大学学报（医学版），2016，42（1）：31-35.

[12]曹凤，王德林，曹玉娟，等.表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的有效性及安全性[J].中国医院用药评价与分析，2016，16（9）：1153-1155.

[13]高峰，张泽峰，王涛，等.EGFR TKIs联合化疗的给药顺序对NSCLC细胞促凋亡的影响[J].中国现代医学杂志，2018，28（14）：30-36.

[14]Hasegawa Y，Ando M，Maemondo M，et al.The role of smoking status on the progression-free survival of non-small cell lung cancer patients harboring activating epidermal growth factor receptor （EGFR） mutations receiving first-line EGFR tyrosine kinase inhibitor versus platinum doublet chemotherapy：a meta-analysis of prospective randomized trials[J].Oncologist，2015，20（3）：307-315.

[15]段佳文，武雪亮，牛玉春，等.西妥昔單抗和贝伐单抗在晚期结直肠癌一二线治疗中的研究进展[J].中国医药导报，2017，14（24）：50-53.

[16]诸慧，李佩涵，金剑.利妥昔单抗联合CHOP方案治疗中国人群弥漫大B细胞淋巴瘤效果及安全性的Meta分析[J].中国医药导报，2017，14（27）：144-152.

[17]盛薇薇，邵钰.利妥昔单抗注射液联合GDP化疗方案对非霍奇金淋巴瘤患者疗效及免疫功能的影响[J].中国医药导报，2018，15（35）：98-101.

[18]翁呈韬，张腾跃，刘亚贝，等.维拉帕米介导食管癌细胞多药耐药及细胞凋亡的实验研究[J].实用临床医药杂志，2017，21（24）：1-5.

[19]潘永红，焦琳，林采余，等.吉非替尼联合二甲双胍对EGFR-TKIs原发性耐药非小细胞肺癌H1975细胞的抑制作用及其机制研究[J].第三军医大学学报，2017，39（7）：668-674.

（收稿日期：2019-04-15  本文编辑：孟庆卿）