野生香菇菌株筛选试验

李 蓉 张金钰 陈俊良 陈 丽 陶祥生 叶长文

（1浙江省庆元县食用菌科学技术研究中心/浙江省丽水食用菌技术创新服务平台/浙江省食用菌工程技术研究中心，浙江庆元323800；2庆元县农业局，浙江庆元323800）

香菇（Lentinus edodes），属担子菌亚门伞菌纲伞菌目香菇属。香菇人工栽培有800多年的历史，香菇产业的发展不仅是传承了一个产业，更传承着香菇的历史、香菇的文化。香菇菌种直接决定了香菇的产量和质量。香菇菌种研发的重点方向，首先是野生种质资源的收集和利用[1]。

研究对从浙江庆元及福建省龙岩市采集的野生香菇种质进行形态特征、培养特性比较，以庆元当地主栽品种为对照，筛选出高产野生香菇菌株，对丰富、开发利用香菇种质资源具有重要意义。现将试验结果总结如下。

1 材料与方法

1.1 供试香菇菌株

庆元周边地区采集的45个野生香菇菌株，编号和来源分别为L-1～L-14，2014年采于福建武平县十方镇；L-16～L-41，2014年采于福建上杭县白沙镇；L-42～L-44，2014年采于福建永定县坎市镇；L-45、L-47，2014年采于庆元县巾子峰；10个对照菌株L-48～L-57为浙江省庆元县食用菌科学技术研究中心保藏菌株，具体见表1。

表1 对照香菇菌株编号及名称

1.2 培养材料

平板PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖2 g，蛋白胨 2 g，加水1 000 mL。

培养料：木屑78%，麸皮20%，石膏1%，红糖1%。料含水量60%，pH值自然。

1.3 试验方法

1.3.1 供试香菇菌株间拮抗试验

将55个（45个野生香菇菌株、10个对照菌株）试验菌株活化后，在同一平板上按品字形接种3个菌株，在25℃、相对湿度50%培养。观察菌丝间的拮抗反应情况[2]。

1.3.2 供试香菇菌株菌丝生长速度测定

将55个（45个野生香菇菌株、10个对照菌株）试验菌株在PDA平板上培养7 d后，6 mm打孔器切取菌龄相同的接种块，再接种于PDA培养基上，分别于10℃、15℃、20℃、25℃ 、30℃[3]，相对湿度50%下避光培养，在第5天、第7天、第9天、第11天划线。设三个重复，计算每个菌株菌丝生长平均速度。

菌丝平均生长速度（mm/d）=菌落半径/生长天数

1.3.3 供试香菇菌株菌丝及菌落性状测定

将55个（45个野生香菇菌株、10个对照菌株）试验菌株在PDA平板上培养7 d后，6 mm打孔器切取菌龄相同的接种块，再接种于直径90 mm的PDA培养皿中培养，设三个重复。培养温度25℃，避光培养。培养7 d后观察菌丝浓密度差异，培养30 d后观察菌落表面有无被膜形成、有无色素生成[3]。

1.3.4 供试香菇菌株子实体性状及产量测定

将51个菌株（45个野生香菇菌株、6个目前主栽对照品种）在一致的环境条件下接种、发菌、出菇。每个菌袋（15 cm×55 cm×0.005 cm）装湿料1.7～1.9 kg，98～100℃灭菌14～15 h。4月20日打孔接种，接种后加套外袋，室内黑暗条件25℃培养。5月4日，待菌丝长满三分之一，进行第1次刺孔增氧，每袋均匀刺孔20个。5月19日，待菌丝快长满全袋时进行第2次刺孔增氧，每袋均匀刺孔40个。9月26日菌袋搬至低棚出菇，10月17日看到菌袋上有较多原基时脱袋，进入出菇管理。每个菌株接种100袋计算成活率，选择其中无杂菌污染的90袋分成3个小区统计产量。

采收第二潮菇（12月出菇的子实体）测定记录子实体性状（菌盖纵切形状、菌盖直径、菌盖厚度、菌柄长度、菌柄直径、菌盖紧实度、菌柄紧实度、菌盖顶部着色、鳞片大小、菌褶有无及菌褶排列方式、菌褶密度、菌褶颜色，菌柄纵切面形状、菌柄着色、菌柄纤毛密度，子实体着生状态）。

2 结果与分析

2.1 拮抗试验结果

拮抗试验结果表明，55个香菇菌株（45个野生香菇菌株、10个对照）间均有拮抗性。L-4与L-41菌株之间的拮抗反应弱，表明它们的亲缘关系较近；其余各菌株间都有强烈或非常强烈的拮抗反应，这表明这些菌株间的亲缘关系较远。

2.2 供试香菇菌株的菌丝生长速度比较

在10℃、15℃、20℃、25℃ 30℃不同温度梯度下培养后测定各个菌株的菌丝生长速度。结果表明，所有菌株在10℃、15℃下菌丝生长速度均较慢；L-1、L-17、L-18、L-30、L-33、L-38、L-50这7个菌株在30℃时菌丝生长最快；L-2、L-5、L-7、L-9、L-10、L-11、L-12、L-13、L-14、L-16、L-19、L-21、L-22、L-25、L-26、L-27、L-28、L-29、L-35、L-36、L-37、L-39、L-40、L-41、L-42、L-43 、L-44、L-47、L-49、L-55、L-57这31个菌株在25℃菌丝生长最快；L-3、L-4、L-6、L-8、L-23、L-31、L-48、L-51、L-52、L-53、L-54 11个菌株在20℃时菌丝生长最快；L-20、L-24、L-32、L-34、L-45、L-56 6个菌株在20℃时菌丝生长速度较快，在30℃时菌丝生长速度最快，但在此温度时菌丝很快产生色素，因此认为其菌丝生长最适温度为20℃。

2.3 供试香菇菌株菌丝及菌落形态

培养7 d后观察菌丝浓密度，只有L-9和L-51菌丝浓密度为疏，L-2、L-17、L-18、L-26菌丝浓密度为中，其余均为密。

图1 不同菌株的部分拮抗现象

培养7 d后观察菌丝均匀度，L-3、L-5、L-6、L-7、L-8、L-10、L-12、L-16、L-19、L-20、L-27、L-29、L-31、L-33、L-36、L-39、L-40、L-41、L-42、L-43、L-44、L-48、L-49、L-51这24个菌株菌丝生长不均匀，其余菌丝均可均匀生长。

培养30 d后观察菌丝被膜形成情况，L-1、L-2、L-3、L-4、L-9、L-10、L-11、L-12、L-14、L-16、L-17、L-18、L-21、L-28、L-31、L-32、L-35、L-37、L-43、L-44、L-45、L-48、L-49、L-50、L-51、L-52、L-53、L-54、L-55、L-57这30个菌株无被膜的形成，其余均有被膜的形成。

培养30 d后观察菌落色素，L-1、L-3、L-5、L-7、L-8、L-10、L-11、L-12、L-18、L-22、L-23、L-25、L-26、L-28、L-30、L-31、L-32、L-34、L-35、L-37、L-39、L-41、L-42、L-43、L-45、L-47、L-53、L-54、L-55、L-56这30个菌株无色素生成，其余均有色素生成。

2.4 供试香菇菌株子实体产量

根据栽培结果统计，成活率最高的是L-20，成活率达到96%，其次为L-4，成活率达到92%，其余成活率均在70%以下。单产最高的是L-44和L-23，产量达到637.66 g/袋和632.50 g/袋，与对照主栽培品种L-49（庆元9015）的630.56 g/袋和L-57（庆科20）的634.13 g/袋相当。其次为L-22、L-38、L-42，产量分别为617.41 g/袋、615.25 g/袋、602.24 g/袋，L-16、L-18、L-26、L-29、L-35、L-43产量在504.38～556.28 g/袋，其余产量均在500 g/袋以下。所有野生香菇菌株均具有出菇较迟、菇体较薄的特性。多个菌株在同一时间采取相同的出菇管理措施，可能由于菌株自身特性差异、统一管理方法不具针对性等原因而导致部分菌株产量较低。菌株L-23、L-44具有出菇时间集中、出菇整齐、子实体小、菇盖薄而多的特性。

对照中L-49和L-57产量最高，分别为630.56 g/袋 和 634.13 g/袋 ，其 次 为 L-48，产 量 为602.97 g/袋，其余产量均在500 g/袋以下。主要是因为对照品种L-50、L-52均不适宜低矮棚栽培，L-56属于短菌龄香菇品种，不适宜与长菌龄野生香菇品种在同一时间采用相同方法栽培管理。

表2 部分香菇菌株子实体性状

L-39虽然产量不高，但是鲜菇具有野生香菇特有的香味。

2.5 部分香菇菌株子实体性状

主要对产量较高的几个香菇菌株进行子实体性状分析，结果见表2。由表2结果可见：菌盖形态，只有L-22菌盖呈凹形，其余均呈凸形；菌盖紧实度，三个对照（L-48、L-49、L-57）菌盖结实，野生香菇L-23、L-39菌盖结实；其余菌盖紧实度为中或疏松；L-23和L-44由于，出菇期集中在12月10日-次年1月10日，出菇量达到总产量的71.6%，且爆发出菇原基数量多，使子实体着生成丛生状；菌盖直径/菌柄长度值越大，表明该菇体菌柄相对越短，L-22、L-23、L-39、L-42菌柄相对较短；菌盖直径/菌盖厚度值越小表明菇越厚，L-42和三个对照（L-48、L-49、L-57）菇相对较厚，菇质较优。

3 小结与讨论

真菌的拮抗反应是体细胞不亲和的直接体现[4，5]。食用菌是具有重要经济价值的一类真菌，体细胞的不亲和性现象同样普遍存在。由于拮抗分类鉴定具有简单、快速、直观等优点，因此是最常用的食用菌菌种鉴定方法。诸多研究显示，该方法具有较高的可靠性，如黄伞的拮抗反应分类结果与以酯酶同工酶的分类方法相一致[6]，金针菇拮抗分类与RAPD分析结果吻合[7]。此外，白灵菇[8]、真姬菇[9]、姬松茸[10]、香菇[11]、灵芝[12]等拮抗分类鉴定结果与其他鉴定方法的分类结果也相吻合。

野生香菇经驯化栽培，均可正常出菇，但菇盖总体较薄，商品性状较差。但从产量看，筛选出的L-44和L-23，产量分别达到637.66 g/袋和632.50 g/袋，与目前主栽品种中的高产品种“庆元9015”“庆科20”的产量相当，且L-23和L-44出菇期均较集中，可作为高产或工厂化香菇育种目标菌株进行进一步驯化，培育成高产或工厂化主栽香菇菌株。L-42产量为602.24 g/袋，但菇质相对较优，可作为优质香菇育种目标菌株进行进一步驯化。L-39由于具有特殊野生香菇香味，可作为风味鲜香菇育种目标菌株开展进一步研究。