石渠白菌母种培养条件初探

杨春敏 胡生华 黄建初

（广州工商学院，广东广州510850）

石渠白菌又名“石渠白蘑菇”[1]，是四川省甘孜藏族自治州石渠县的著名特产，每年盛夏七、八月，在海拔3800～4200 m的石渠草原上，就能发现石渠白菌点缀在牧草中。它的学名各家说法不一，微生物专家毕志树鉴定为白色白桩菇，王巍[2]将其归为黄绿蜜环菌。白桩菇并无菌环，而黄绿蜜环菌的形态描述与石渠白菌相差甚远。笔者对其进行分子鉴定，确定其为蘑菇属的一种。

石渠白菌味道鲜美，经济价值高，但是其身处高原，不耐储存和运输，这也影响了对它的研究和开发。笔者对石渠白菌菌丝培养条件进行初步试验，以期为人工驯化栽培提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

新鲜石渠白菌子实体（图1、图2）采集于石渠县南部草原，通过组织分离得到试验用母种。

图1 石渠白菌子实体采集地

图2 石渠白菌子实体

1.2 试验方法

母种培养基：①高原土50 g，马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 L。②高原土100 g，马铃薯200 g，葡萄糖 20 g，琼脂 20 g，水 1 L。③高原土150 g，马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂 20 g，水 1 L。④高原土 200 g，马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂20 g，水 1 L。⑤蔗糖 20 g，尿素 5 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，琼脂20 g，水 1 L。⑥葡萄糖 20 g，蛋白胨3 g，酵母提取物 2 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，琼脂 20 g，水 1 L。⑦葡萄糖 20 g，蛋白胨 5 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，琼脂20 g，水1 L。⑧蔗糖20 g，NaNO35 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，琼脂20 g，水 1 L。⑨蔗糖 20 g，酵母提取物 5 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，肌醇 0.0005 g，琼脂20 g，水1 L。⑩葡萄糖10 g，麦芽糖5 g，可溶性淀粉 5 g，酵母提取物 5 g，MgSO40.5 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，琼脂20 g，水1 L。⑪（CK）培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 L。其中培养基①-④中高原土和水用于制作土壤浸出液。

将培养皿中的母种用1 cm打孔器沿菌丝外延打孔，将菌丝圆片分别接种于上述培养基中，每个培养皿接种1片，每个配方做5个平行。将接种的培养皿置于20℃的培养箱中，培养30 d。测定石渠白菌菌丝生长速度，同时观察菌丝形态及特征。

1.3 培养温度试验

将培养皿中的母种用1 cm打孔器沿菌丝外延打孔，将菌丝圆片接种于上述筛选出的最佳培养基中，分别置于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃的培养箱中培养30 d，每个温度做5个平行。测定石渠白菌菌丝生长速度。

2 结果与分析

2.1 供试母种培养基上石渠白菌菌丝培养结果

供试母种培养基上石渠白菌菌丝培养结果见见表1。

由表1可以看出，在培养基①-④及培养基CK中，石渠白菌菌丝粗壮，颜色洁白，气生菌丝及基内菌丝浓密；平均生长速度在0.6 mm/d以上，特别是培养基②，菌丝的平均生长速度达到最大0.66 mm/d，说明添加适量高原土浸出液能促进石渠白菌菌丝的生长，这可能与高原土浸出液中含有丰富的碳氮源和微量元素有关。在培养基⑤中，菌丝不能生长，说明尿素对石渠白菌菌丝生长有抑制作用。在培养基⑧中，菌丝生长最慢，说明石渠白菌菌丝不能很好地利用硝酸盐。对比培养基⑥、⑦、⑨、⑩，可以初步判断在促进石渠白菌菌丝生长速度方面，葡萄糖优于蔗糖，酵母提取物优于蛋白胨。

表1 供试母种培养基上石渠白菌菌丝生长情况

2.2 供试培养基上白菌原基形成情况

在供试母种培养基上石渠白菌原基形成情况见表2。

表2 供试母种培养基上石渠白菌菌丝原基形成情况

由表2可知，除了培养基⑤、⑦、⑧、⑩中无原基产生外，其余培养基中均发现有原基，其中培养基②和⑨5个平皿中均产生了原基，培养基②中产生的原基个数最多。说明添加的土壤浸出液对石渠白菌菌丝基团形成具有促进作用，但过高浓度下菌丝基团形成反而受抑制。培养基⑨五皿都出现了原基，可能是配方中添加了肌醇，肌醇可促进细胞新陈代谢、促进生长发育，这说明肌醇对石渠白菌的菌丝基团、子实体的形成起到一定促进作用。观察发现：石渠白菌母种培养基中原基发生点均集中在原接种点周围（图3），多皿培养基上出现白色菌丝基团，分布较散，看起来像小菇蕾（图4），并伴有“吐水”现象（图5），同时，多皿培养基上菌丝出现“扭结”现象（图6）。一般，食用菌在营养适合环境下，菌丝开始扭结形成原基并出现“吐水”现象，继续给予一定的光照和湿度等刺激，就会发育成菇蕾，是出菇征兆[3]。由此可见，石渠白菌具有人工驯化的可能。

2.3 培养温度试验结果

试验结果见表3和图7。由表3和图7可知，石渠白菌菌丝可以在培养温度5～30℃生长，15～25℃是石渠白菌菌丝适宜的生长温度，而最适生长温度为20℃，35℃以上是石渠白菌菌丝致死温度。

表3 不同培养温度石渠白菌菌丝生长速度（培养基②）

图3 石渠白菌原基（培养基②）

图4 接种点附近的白色基团（培养基②）

图5 原基及“吐水”现象（培养基②）

图6 菌丝出现“扭结”现象（培养基②）

图7 不同培养温度石渠白菌菌丝生长状态（培养基②）

3 小结

试验已经初步找到最适合石渠白菌生长条件，即为母种培养基高原土100 g，马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 L；培养的最适温度为20℃。另外，在母种培养基中，石渠白菌也具有了产生原基的能力，这也奠定了人工驯化的基础。石渠白菌是一种与牧草共生的菌根菌，人工驯化难度大，所以要对石渠白菌进行人工栽培还有很长的路要走。