合肥地区2 558例体检女性HPV感染及亚型分布情况

吴丹丹，彭丽朵，乔金平，徐元宏

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种双链DNA病毒，已鉴定的型别超过200种。HPV依据其引发疾病的恶性程度，分为高危型和低危型，低危型主要引起皮肤疣等良性病变，以6、11型最为多见[1]；而高危型的持续感染在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变、宫颈小细胞神经内分泌癌等肿瘤的发展中起到了关键的作用[2-3]。

HPV在世界范围内的感染具有普遍性，不同国家及地区的亚型分布各不相同[3-5]。高危型在西方国家主要以16、18型最为常见，亚洲国家则以16、18、52和58型常见。目前接种HPV疫苗是一种有效降低患宫颈癌风险的方式，国外已上市的疫苗有二价、四价和九价3种，国产的疫苗尚未上市，目前已鉴定的高危型有10余种型别[6]。该研究通过对合肥地区常规体检女性的宫颈脱落细胞进行HPV 基因分型检测，分析普通体检人群HPV特别是高危型的感染情况和基因型分布特点，以期为合肥地区人群在HPV疫苗的选择上提供指导，同时也为针对我国人群感染特点的国产HPV疫苗的开发提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1研究对象 选取2016年1月1日～2017年12月31日在安徽医科大学第一附属医院体检中心常规体检的2 558位女性，年龄22～84(42.55±9.99)岁。

1.1.2标本采集与保存 以无菌拭子采集宫颈分泌物，将拭子头部放入脱落细胞保存液中，2 h内送检。采集的标本若不能及时前处理，应置于-20 ℃ 保存。

1.1.3试剂与仪器 HPV27型核酸分型检测试剂盒(流式荧光法，包括核酸扩增组份、杂交组份、脱落细胞保存液、核酸提取试剂)、基因扩增仪购自上海透景公司；金属浴、冷冻离心机购自德国Eppendorf公司；Luminex200 多功能流式点阵仪购自美国Luminex公司。

1.2实验方法

1.2.1核酸提取 将采集好的标本涡旋混匀，取200 μl标本至1.5 ml离心管，12 000 r/min离心1 min，弃上清液，向沉淀物中加入200 μl核酸提取试剂，涡旋混匀，100 ℃ 煮沸15 min，15 000 r/min离心5 min，即可得到热裂解法提取的核酸，所得核酸将用于下一步实验或于-20 ℃ 中保存待用。

1.2.2多重PCR 依据说明书进行多重PCR。PCR反应体系含引物混合液5 μl、PCR预混液10 μl、Taq酶0.8 μl和DNA模板5 μl。 反应条件为95 ℃、5 min; 95 ℃、30 s，58 ℃、30 s，72 ℃、30 s,5个循环;95 ℃ 、30 s，55 ℃、30 s，72 ℃、30 s, 35个循环;72 ℃、 3 min，4 ℃ 维持，即可得到扩增的PCR产物。

1.2.3杂交和上机检测 依据说明书进行微球与PCR产物的杂交。反应体系为微球杂交液22 μl，PCR产物3 μl。反应条件为95 ℃、5 min,48 ℃、 30 min。此步反应完成后，加入75 μl 链霉亲和素-藻红蛋白(SA-PE)，48 ℃、 15 min，即可得到杂交产物。再使用Luminex 200(需48 ℃ 预热)进行杂交产物的检测。

1.3统计学处理采用SPSS 24.0软件进行分析，资料以频数及频率表示，采用χ2检验，以α=0.05为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1HPV感染率检测2 558例常规体检标本，主要人群分布为22～84岁女性。其中阳性样本397例，阳性率为15.52% (397/2 558)，样本被分为4个年龄段，结果见表1。经χ2检验，各年龄段之间，总阳性率(χ2=3.624，P=0.305)，高危型阳性率(χ2=1.975，P=0.578)，低危型阳性率(χ2=4.507，P=0.212)，差异无统计学意义。不同年龄段单重感染和多重感染分布情况见表2，各年龄段的感染率随同时感染型别的个数增加而减少，以单一感染最高 (12.28%)，五重感染最低 (0.04%)。

表1 HPV感染与年龄分布

1部分体检者为多重感染，故高危型例数与低危型例数之和大于阳性人数

表2 HPV单一感染与多重感染在不同年龄段分布情况 [n(%)]

1该阳性率为此感染人数与该年龄段检测总人数比值

观察各感染组年龄分布，单重、二重、四重感染的感染高峰年龄均为>50岁组，而三重和五重的感染高峰年龄为21～30岁组。

2.2HPV27种亚型感染率2 558例标本中共检测出26种型别(除26型外)。低危型别的检出率为6.61% (169/2 558)，高危型别为13.02% (333/2 558)。高危型和低危型所占总阳性型别例数的比例分别为66.33% (333/502)和33.67% (169/502)。由表3可知，高危型中52 (9.76%)、16 (9.16%)、58 (6.77%)和53 (5.98%)为优势亚型；低危型中，61 (6.77%)、81 (5.78%)、55 (5.38%)和43 (4.98%)为优势亚型。

表3 合肥地区女性HPV各亚型阳性分布比例

1部分体检者为多重感染，故HPV型别例数 (502)之和大于阳性人数 (393)

表4为不同年龄优势亚型的分布情况，21～30岁组中，16、43和52等亚型常见，31～40岁组以16、52、61和58亚型常见，41～50岁组以 16、52、53和58亚型常见，大于50岁组以52、61和53亚型常见。据表中数据可推断，30岁以下女性主要感染亚型为16；30～50岁女性16和52均为最常见亚型；而50岁以上女性，则以52为主要感染亚型。

表4 不同年龄组HPV感染的优势亚型分布

3 讨论

宫颈癌是女性好发的第二位恶性肿瘤，研究[3]表明高危型可直接引起浸润性宫颈癌。HPV基因型分布受种族和地区的影响较大，进行不同地区的HPV年龄和亚型分布研究对HPV的流行病学及疫苗接种有重要意义。现有的合肥地区的HPV感染分布资料主要以门诊及住院就诊患者为主，且样本量较低，反映普通人群中的分布情况有所欠缺。而多数HPV感染是亚临床和隐匿性的，本研究对象为常规体检人群，主要探讨合肥地区的HPV亚型分布和年龄分布。结果显示合肥地区HPV基因亚型中阳性比例最高的高危型分别是52 (9.76%)、16 (9.16%)、58 (6.77%)和53型 (5.98%)，比例最高的低危型分别是61 (6.77%)、81 (5.78%)、55 (5.38%)和43 (4.98%)型。感染的总阳性率随年龄段依次递增，且以一种或两种型别感染最为常见。

与其他地区相比，合肥地区的感染既有相似点也有不同点。其一，高危型感染率较高的基因型别与国内大部分地区相同，主要以16、52和58型最为多见[7]。低危型别中，合肥地区以61型 (6.77%)阳性率最高，这个和成都地区相似[8]，而其他地区的研究由于使用的分型试剂盒不包括61型，所以其他地区缺乏此型别的数据。本研究数据显示，合肥地区16型(1.94%)的感染偏向20～30岁女性，>50岁女性则主要以52型(2.17%)感染为主；而30～50岁女性人群中16型和52型阳性率相同 (1.95%，33/1 690)，而现有研究[9]表明52型亦可引起宫内病变，如子宫内膜癌和子宫肌瘤等；因此本地区30岁以上女性在患有相关疾病时应注意检查是否有52型的感染；反之亦然，对确定有52型感染的女性，也应注意是否患有相关疾病。其二，HPV的年龄分布，其他地区感染阳性率大多有两个年龄高峰[ (南京，30～39岁、50～59岁)、 (苏州，<20岁、>50岁)、 (珠海，<21岁、>50岁)][10-12]，而本研究HPV常规体检人群缺乏22岁及以下人群的数据，所以可能缺乏第一个年龄高峰的数据。而在22岁以上人群中，合肥地区女性HPV感染阳性率随着年龄增长而增高，>50岁为感染高峰年龄，这一点和其他地区是相似的。50岁以上女性可能因其处于绝经后雌激素水平紊乱和免疫力下降的阶段，更容易被HPV病毒感染[10]，从而呈现较高的感染率，因此，本地区50岁以上女性更需要重视HPV感染和宫颈癌的筛查。

由于缺少抗HPV病毒的有效药物，HPV更多依靠接种疫苗来预防感染。国际上现有的HPV疫苗主要有3种类型：二价 (16、18)、四价 (6、11、16、18)和九价 (6、11、16、18、31、3、45、52、58)[6]。国内已引进的二价及四价疫苗并未覆盖亚洲地区高发的52和58两型，而合肥地区更是以52型为高感染率型别，大多数年龄段的女性都被发现有此型别的感染。因此覆盖了52、58型的九价疫苗可能更适合本地区未感染HPV病毒的女性人群；虽然有报道[13]称二价疫苗在避免16、18型感染的同时，还可为31、45型提供有限的交叉保护。

综上所述，本研究通过统计分析合肥地区体检女性人群的HPV感染及基因型别分布特点，对研究HPV感染的流行病学和宫颈癌的预防等提供一定的理论依据，尤其对本地区女性人群HPV疫苗接种有一定的指导意义。