化痰通脉饮干预多囊卵巢综合征大鼠脂质代谢紊乱的机制研究

广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530023

多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome，PCOS)是一种发病多因性，临床表现多态性(闭经或月经稀少、卵巢多囊改变、不孕、多毛、肥胖及黑棘皮征)的综合征，其内分泌学特征包括高雄激素、高黄体生成激素、高胰岛素及胰岛素，其发病率约占育龄妇女的6.6%～6.8%，其中约有50%～60%的PCOS患者伴有胰岛素抵抗(insulinresistance，IR)，而胰岛素抵抗在普通人群中IR的发病率仅为10%～25%，说明PCOS和 IR的发病具有极大的关联性[1-2]。同时，与IR相关的脂质代谢紊乱会增加PCOS患者动脉粥样硬化、冠心病的风险并诱导其他远期并发症的出现。中医认为，痰湿阻滞会导致PCOS患者发生肥胖、痤疮和不孕，同时痰湿阻滞气血运行不畅则会引起血瘀，则导至闭经、月经稀发、月经过少、不孕等症[3]。

化痰通脉饮为本课题组临床治疗PCOS的经验方，由半夏、苍术、白术、茯苓、鸡血藤、当归、丹参、桃仁、泽兰、瓦楞子、陈皮、川芎和香附组成，具有燥湿化痰，活血化瘀，理气调经之功效[4]。根据临床观察及初步临床研究表明该方具有改善PCOS临床症状、胰岛素抵抗调整脂质代谢紊乱的作用。然而，截至目前，化痰通脉饮改善脂质代谢紊乱的作用机制研究还未见报道，基于此，本研究通过制作PCOS大鼠模型，分析化痰通脉饮对模型大鼠的胰岛素抵抗及脂质代谢紊乱的治疗作用，佐证化痰祛瘀同治法的治疗作用，为临床治疗多囊卵巢综合征提供科学的证据。

1 材料与仪器

1.1 动物 选用8周龄SPF级雌性SD大鼠共48只(180～220 g)，均购置于广西医科大学实验动物中心(许可证号：SCXK-20140002)。饲养期间给予充足的食物和浓度为5 %的葡萄糖饮水，室温22±3℃，湿度为(50±15)%，每天给予 12 h(06:00～18:00)的周期性光照。

1.2 药材和试剂 化痰通脉饮所用药材：陈皮、茯苓、香附、苍术、瓦楞子、当归、鸡血藤、丹参、泽兰、川芎、桃仁和法半夏购置于南宁生源中药饮片有限公司。经广西农业科学院莫长明副研究员鉴定，半夏为天南星科植物半夏Pinelliaternata的干燥块茎；苍术为菊科植物茅苍术Atractylodeslancea的干燥根茎；白术为菊科植物白术AtractylodesmacrocephalaKoid.的干燥根茎；茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poriacocos的干燥菌核；鸡血藤为豆科植物密花豆SpatholobussuberectusDunn的干燥藤茎；当归为伞形科植物当归Angelicasinensis的干燥根；丹参为唇形科植物丹参Salviamiltiorrhiza的干燥根；桃仁为蔷薇科植物桃Prunuspersica的干燥成熟种子；泽兰为唇形科植物毛叶地瓜儿苗LycopiHerba的干燥地上部分；瓦楞子为蚶科动物毛蚶ArcasubcrenataLischke的贝壳；陈皮为芸香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培变种的干燥成熟果皮；川芎为伞形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort的干燥根；香附为莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根茎。盐酸二甲双胍片(批号：1207097，中美上海施贵宝制药有限公司)；注射用绒促性素(批号：1504012，马鞍山丰源制药公司)；精蛋白生物合成人胰岛素注射液(批号：150541，丹麦诺和诺德公司)；大鼠胰岛素(INS)试剂盒(批号：20160331，南京建成生物工程研究所)。

2 方法

2.1 药材的提取 提取方法参考广西中医药大学第一附属医院中药房已经在临床上取得疗效的提取工艺，半夏15 g,苍术15 g,白术15 g,茯苓20 g,鸡血藤20 g,当归10 g,丹参15 g,桃仁10 g,泽兰15 g,瓦楞子10 g,陈皮6 g,川芎10 g,香附15 g。上药加6倍水浸泡2 h，回流提取1 h滤过，所得药渣以同法再提取1次，合并滤液，浓缩至4.8 g/mL的生药提取液，4 ℃保存备用。

2.2 动物分组及造模方法 所有大鼠适应性饲养1周后被随机分为对照组、模型组、阳性对照组和化痰通脉饮低(L-HTY)、中(M-HTY)、高剂量(H-HTY)组，每组8只。除对照组外，其余5组采用“胰岛素(INS)联合HCG诱导大鼠PCOS模型”[5]的造模方案，给予高脂饲料、葡萄糖水(50 g/L)饮用，第1～10天每晚腹部皮下注射精蛋白锌重组人胰岛素注射液，剂量由0.5 IU起始并逐渐递增(每日增加0.5 IU)至5.0 IU，第11～22天每晚腹部皮下注射精蛋白锌重组人胰岛素注射液 6.0 IU，同时给予HCG 3.0 IU(溶于0.2 mL生理盐水)股内侧皮下注射，每天早晚各1次。对照组给予普通饲料和饮用水，第1～10天每晚腹部皮下注射0.2 mL生理盐水，第11～22天，每天早晚各增加注射1次0.2 mL生理盐水。第22天后，各组均停止注射；模型组停止给予50 g/L葡萄糖水，改为普通饮用水。模型成功标志为：与正常组比较，PCOS模型组大鼠卵巢表面较苍白，体积增大。镜下见卵泡扩张，卵母细胞或放射冠消失，颗粒细胞层数减少至2～3层，部分卵泡闭锁，无或仅见少量黄体形成鉴定为造模成功。造模成功后，HTY各个剂量组(低中高剂量组分别为8、16和24 g/kg/d)连续灌胃21 d，停用1天，再用药21 d。阳性对照组给予灌胃二甲双胍(156.25 g/kg/d)，模型组和对照组给予蒸馏水，同法灌胃。

2.3 观察指标及方法

2.3.1 大鼠体重测量 分别于造模前和造模结束后，用电子天平测量大鼠体重。

2.3.2 大鼠血清HDL-C、LDL-C、TG和INS生化指标的检测 末次给药后，各组大鼠治疗前禁食12 h，腹主动脉取血，3 000 r/min 离心10 min分离血清，存储于-80 ℃备用。ELISA 检测血清胰岛素(INS)，生化检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)。

3 结果

3.1 化痰通脉饮对PCOS大鼠体重的影响 造模前各组大鼠体重相当，各组大鼠间体重没有显著差异，造模过程中，PCOS大鼠发胖，体重明显增加，模型组与空白组比较具有高度显著差异(P<0.01)；化痰通脉饮中、高剂量组均能从不同程度上减少PCOS大鼠的体重增加(P<0.01、P<0.05)。结果见表1。

组别剂量体重/g给药前给药后Control0217.17±10.80239.99±12.63**Model0217.04±13.79264.21±15.60Positive156.25mg·kg-1·d-1223.14±11.07252.57±14.14L-HTY8g·kg-1·d-1217.34±11.11261.25±24.24M-HTY16g·kg-1·d-1219.92±14.02246.37±15.09*H-HTY24g·kg-1·d-1216.90±14.18248.28±10.51*

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 化痰通脉饮对大鼠血清HDL-C、LDL-C、TG和INS生化指标的影响 结果表明，与对照组相比，PCOS大鼠血液中LDC-C、TG和INS水平显著上升(P<0.01～0.05)；HDL-C显著下降(P<0.01)。二甲双胍和化痰通脉饮各个剂量组均能不同程度的改善PCOS大鼠HDL-C和TG水平的紊乱，且化痰通脉饮高剂量组能降低PCOS大鼠的胰岛素水平。结果见表2。

组别HDL-CLDL-CTGINSControl1.52±0.14**0.12±0.05*0.41±0.21*17.67±1.25*Mondel1.14±0.130.21±0.050.62±0.0519.25±1.44Postive1.39±0.17*0.24±0.060.53±0.06*17.16±2.80L-HTY1.14±0.140.26±0.140.47±0.05**17.98±0.28M-HTY1.49±0.09**0.23±0.080.46±0.06**18.35±0.72H-HTY1.35±0.20*0.21±0.050.62±0.2015.60±1.63*

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4 讨论

多囊卵巢综合征常于青春期后发病，表现为卵泡膜细胞良性增生引起的雄激素生成过多造成月经紊乱、持续排卵障碍、卵巢多囊样变及高雄激素血症等。然而PCOS的病理生理机制复杂，至今仍未清楚[6]。目前，大量实验证实胰岛素抵抗(IR)与PCOS的发病机制关系最为密切，胰岛素水平上升导致卵巢分泌过多的雄激素，并使其转化为二氢睾酮，进一步引起卵泡刺激素(FSH)-颗粒细胞轴功能低下，导致大量卵泡发育而无优势卵泡形成。此外，高雄激素血症还会导致PCOS患者体内脂质代谢紊乱，是导致动脉粥样硬化和高血压等心血管疾病的危险因素[7- 8]。因此，治疗胰岛素抵抗并调节脂质代谢紊乱可以调节多囊卵巢综合症并预防后续心血管并发症的发生。

祖国医学没有与多囊卵巢综合征相应的病名，常将其归于“月经后期”、“月经过少”、“ 闭经”、“ 癥瘕”、“不孕” 等范畴。本课题组前期研究表明，痰湿阻滞是多囊卵巢综合征患者的重要病理基础，会导致肥胖，痤疮，不孕的发生[9]。临床研究表明，痰湿阻滞证型患者存在糖脂代谢紊乱，胰岛素敏感指数下降，表明糖脂代谢紊乱、胰岛素抵抗是临床痰证患者重要的病理生理学基础[3, 10]。化痰通脉饮方中半夏燥湿化痰，为治痰湿之要药，能治经络四肢、皮里膜外之痰；白术健脾燥湿，中焦运化；苍术醒脾助运，开郁宽中，疏化水湿；苍术、白术相须为用，健脾燥湿，改善痰证患者体质。茯苓健脾利湿；当归、鸡血藤养血活血；丹参活血调经；桃仁活血祛瘀；泽兰既能活血化瘀，又能行水；瓦楞子消痰化瘀，软坚散结；陈皮理气燥湿；川芎活血祛瘀，行气开郁；香附理气解郁调经。诸药相和，共奏健脾化痰、活血调经之功效。

肥胖是多囊卵巢综合征的常见的四大症之一，肥胖主要表现为机体脂肪组织的堆积，其不仅会降低性激素结合球蛋白水平，还会促进雄激素与胰岛素的分泌，加剧IR[11]，而高浓度的雄激素、胰岛素水平又会进一步导致脂肪分布异常。因此，控制肥胖和腰臀比对于PCOS患者具有积极的意义，其不但能减轻月经紊乱、多毛和痤疮等症状，还能诱发排卵并改善妊娠结果，同时能减少其远期疾病如糖尿病、高血压和冠心病的发生[12]。本研究中，PCOS模型大鼠的体重明显高于对照组，而化痰通脉饮中、高剂量均能在不同程度上显著降低模型大鼠体重。

血脂代谢异常是 PCOS 患者的临床表现之一，主要表现为外周血中 TG 及 LDL 水平的上升，HDL的下降，相关分析表明，提示 IR、高胰岛素血症是PCOS血脂异常的重要原因[13]。HDL-C含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关，对血管起保护作用，其能清除血管脂质, 是血管保护因子。LDL-C是动脉粥样硬化脂蛋白(AS)，容易沉淀于AS的斑块中。高浓度的甘油三酯水平可增加 PCOS 患者患动脉粥样硬化和冠心病的风险。本研究结果显示，化痰通脉饮高剂量可以显著降低PCOS模型大鼠INS水平，同时，各个剂量组均能调节TG和HDL-C水平的紊乱。说明了化痰通脉饮可以改善PCOS发病过程中胰岛素抵抗，并提高脂质代谢能力，同时降低PCOS患者远期心血管病的危险性。

本研究通过建立PCOS大鼠模型，分析了化痰通脉饮对模型大鼠的胰岛素抵抗及脂质代谢紊乱的治疗作用，佐证化痰祛瘀同治法的治疗作用，为多囊卵巢综合征的临床治疗提供科学的依据。