高效液相色谱法测定解郁安神颗粒中栀子苷的含量

林凡友 陈仁燕 罗晓倩 杜玲杰

[摘要]目的 建立高效液相色谱（HPLC）法测定解郁安神颗粒中栀子苷含量的方法。方法 采用Thermo C18色谱柱，以乙腈-水（15∶85）为流动相，检测波长为236 nm，柱温为室温25℃。结果 栀子苷在20.26～67.52 μg/ml范围内，线性方程为A=14.357C+6.4276（r=0.9996），栀子苷平均回收率为99.87%，RSD为0.49%，精密度和稳定性的RSD分别为1.56%和1.58%。测定3批解郁安神颗粒，平均含量为6.78 mg/袋，RSD为1.41%。结论 该法准确性高、专属性强，可以作为栀子苷含量检测的有效方法。

[关键词]解郁安神颗粒；高效液相色谱法；栀子苷；含量测定

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）11（c）-0044-04

[Abstract] Objective To establish the high performance liquid chromatography （HPLC） method for the determination of Geniposide in Jieyu Anshen Granules. Methods The HPLC was carried out with Thermo C18 using acetonitrile-water （15：85） as a mobile phase. The detection wavelength was 236 nm and the column temperature was 25℃. Rseults The linear equation of Geniposide was A=14.357C+6.4276 （r=0.9996） in the range of 20.26-67.52 μg/ml. The average recovery of geniposide was 99.87% （RSD=0.49%）. The RSD of precision and stability were 1.56% and 1.58%， respectively. Determination of 3 batches samples， the average content was 6.78 mg/bag （RSD=0.64%）. Conclusion It shows that this method is high accuracy and specificity， it can be used as an effective method for the determination of Geniposide content.

[Key words] Jieyu Anshen Granules； High performance liquid chromatography； Geniposide； Content determination

解郁安神顆粒由柴胡、炒栀子等16味中药材组成，具有舒肝解郁[1-2]、安神定志的功能。临床用于治疗情志不畅、肝郁气滞所致的失眠[3-4]、焦虑[5]、健忘、更年期综合征见上述证候者等[6-7]。主药栀子的有效成分栀子苷、熊果酸和总有机酸，其中栀子苷药理作用广泛，生物学效应丰富，具有保肝利胆[8-9]、抗氧化[10]、镇痛及抗炎等作用[11-12]，应用前景广阔。准确检测栀子苷含量是控制解郁安神颗粒质量的有效途径，栀子苷含量的测定方法有薄层扫描法、毛细管电泳法[13]及高效液相色谱法（HPLC）[14-15]等。HPLC是目前应用广泛，准确性高的一种检测方法，为准确检测栀子苷含量，本文采用了HPLC对栀子苷含量进行检测，以保证解郁安神颗粒质量和疗效，现报道如下。

1仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪（G1314F型紫外检测器，美国安捷伦公司）；MS105DU型电子天平；栀子苷对照品（批号110749-201316，中国食品药品检定研究院）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国天地有限公司）；水为纯化水；其他试剂均为分析纯；解郁安神颗粒（翔宇药业股份有限公司，批号160101、160102、160103）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱Thermo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-水（15∶85），检测波长236 nm，流速1.0 ml/min，柱温为室温25℃，进样量为10 μl。理论板数按栀子苷峰计算应≥3000。

2.2溶液的制备

2.2.1供试品溶液 取解郁安神样品适量，研细过4号筛，精密称定1 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20 ml，称定重量，加热回流40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过取续滤液，即得。

2.2.2对照品溶液 精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含300 μg的溶液，摇匀，作为对照品储备液。再加甲醇稀释制成每毫升含30 μg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。

2.2.3阴性供试品溶液 按供试品溶液制备方法，制备不含栀子苷的阴性样品溶液。

2.3专属性试验

精密量取上述3种溶液各10 μl进行测定。结果显示，理论板数按栀子苷峰计均>3000，阴性供试品溶液对主峰没有干扰，分离度均>1.5，表明该方法专属性良好。

2.4线性关系考察

精密吸取对照品储备液适量置10 ml的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得不同浓度的线性溶液，依法测定。以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线。结果显示，线性方程为：A=14.357C+6.4276，相关系数r= 0.9996，栀子苷溶液在20.26～67.52 μg/ml内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系（表1）。

2.5精密度试验

取对照品溶液，连续进样5次，并记录色谱图。结果显示，峰面积的RSD值为1.56%（表2），表明该方法的系统精密度良好。

2.6稳定性试验

将供试品溶液室温放置12 h，每2小时测定1次。结果显示，栀子苷峰面积RSD值为1.58%（表3），供试品溶液在 12 h内稳定性良好，计算含量为6.78 mg/袋。

2.7加样回收率试验

取160101批样品（含量6.78 mg/袋，每袋5 g），加入高、中、低浓度对照品溶液适量与所取供试品中待测成分之比控制在0.8∶1、1∶1、1.2∶1左右，依法进样测定，计算回收率。结果显示，含量测定各浓度下回收率在98.1%～101.0%，RSD为0.49%（表4），表明该方法准确度良好。

2.8耐用性试验

2.8.1柱温 在柱温分别为20、25、30℃条件下测定含量。结果显示，栀子苷平均含量为6.57 mg/袋，RSD为1.13%，耐用性较好。

2.8.2流速 在流速分别为0.9、1.0、1.1 ml/min条件下测定含量。结果显示，栀子苷平均含量为6.64 mg/袋，RSD为1.48%，耐用性较好。

2.8.3流动相 在流动相乙腈与水的比例分别为11∶89、15∶85、19∶81条件下测定含量。结果显示，栀子苷平均含量为6.72 mg/袋，RSD为1.26%，耐用性较好。

2.8.4检测波长 在检测波长分别为232、236、240 nm条件下测定含量。结果显示，栀子苷平均含量为6.65 mg/袋，RSD为1.27%，耐用性较好。

2.8.5色谱柱 色谱柱分别为热电C18和迪马C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）测定含量。结果显示，使用不同型号的色谱柱，栀子苷平均含量为6.74 mg/袋，RSD为1.38%（表5），耐用性较好。

2.9样品含量测定

取3批解郁安神颗粒，依法测定栀子苷含量，3批样品平均含量为6.78 mg/袋，RSD为1.41%（表6）。

3讨论

取栀子苷对照品溶液，在200～400 nm波长范围内扫描，结果栀子苷在236 nm波长处有最大吸收且无干扰，选定236 nm作为检测波长，采用甲醇为提取剂，提取率高，方法简单污染性小。

近年来，随着科技的发展，人们对药品的质量、安全日益重视。本文建立的HPLC检测栀子苷含量的方法，重点为提高解郁安神颗粒质量，严格监控有效成分含量。与薄层扫描法、毛细管电泳法相比，HPLC法能有效检测栀子苷含量，分离度高，无其他杂质峰干扰、检测性强准确可靠，为解郁安神颗粒的质量控制提供有效的参考依据。解郁安神颗粒是中成药，药材种类较多，本研究中测定方法的建立，可以为进一步控制药品质量提供依据，增加多组分的含量控制是下一步研究的方向。

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