TLRs及其传导通路在慢性鼻窦炎鼻息肉组织中的表达及意义

马科 张明欣

慢性鼻窦炎并鼻息肉主要为源自筛窦、上颔窦及中鼻甲附近区域的发炎反应，然其详细的病因及发生机制仍不清楚[1]。显微镜下可见以嗜酸性球为主的鼻窦黏膜发炎细胞浸润，先前研究显示此现象受到趋化嗜酸性球的细胞激素表现所调控，故推测鼻息肉的形成可能与微生物感染、过敏原刺激及宿主本身的免疫反应有关[2-3]。血液嗜酸性球浓度也被发现与组织嗜酸性球的浸润程度、鼻息肉的大小，鼻窦计算机断层摄影的严重性及术后再发息肉中活化的嗜酸性球数量有关[4-5]。因此慢性鼻窦炎患者组织及血液中的嗜酸性球及其相关细胞激素的浓度也可作为评估临床症状、治疗效果、预后以及研究其病理发生机制的依据[6]。采用免疫组织化学技术检测60例鼻窦炎鼻息肉黏膜组织中Toll样受体2(toll-like receptor 2，TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4，TLR4)蛋白的表达和分布，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2017年2月到2018年4月收治的60例鼻窦炎鼻息肉患者为研究组，按照临床分型分期标准：Ⅰ型16例，其中1期5例，2期7例，3期4例；Ⅱ型30例，其中1期5例，2期12例，3期13例；Ⅲ型14例。Ⅰ型取自炎性黏膜，Ⅱ型和Ⅲ型均取自息肉组织。同期选取20例正常筛窦黏膜组织进行对照。所有入组患者均签署知情同意书，本研究已通过医院伦理委员会的批准。

1.2 方法 采用免疫组化SABC法。石蜡切片常规脱蜡、水化，抗原修复，3%过氧化氢溶液阻断内源性过氧化物酶，分别滴加兔抗人TLR2、TLR4多克隆抗体，TLR2、TLR4多克隆抗体，SABC检验试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司。按试剂盒说明行免疫组织化学染色，以细胞膜和胞浆出现棕黄色颗粒为阳性染色。

1.3 观察指标 以图像分析软件进行图像分析处理，计算累计光密度值。研究组Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型鼻窦炎鼻息肉患者以及对照组各组间TLR2和TLR4表达程度的差异。

1.4 统计学处理 采用SPSS 24.0统计软件包进行统计学处理。不同分型的累计光密度值计量资料用()表示，组间比较采用独立样本t检验。计数资料用率表示，组间比较用χ2检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 TLR2、TLR4免疫反应 TLR2、TLR4主要表达在鼻腔黏膜上皮细胞、固有层炎性细胞及黏膜下层腺体的胞浆和胞膜上(图1)。

图1 TLR2、TLR4免疫反应

2.2 TLR2在各组的表达 各组鼻腔黏膜组织中均有TLR2的表达。各型各期均较对照组高，并且随着分型的升高其表达也随之增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)；但Ⅰ型和Ⅱ型各期之间差异无统计学意义(表1)。

表1 TLR2在各组的表达()

表1 TLR2在各组的表达()

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2.3 TLR4在各组的表达 各组鼻腔黏膜组织中均有TLR4的表达。各型各期均较对照组高，并且随着分型的升高其表达也随之增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)；但Ⅰ型和Ⅱ型各期之间差异无统计学意义(表2)。

表2 TLR4在各组的表达()

表2 TLR4在各组的表达()

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3 讨论

鼻窦炎的主要症状包括颜面疼痛或压力感，鼻塞、脓性鼻涕、嗅觉减退或丧失等；次要症状则包括头痛、发烧、口臭、疲倦、牙痛、咳嗽及耳部症状等[7-8]。鼻窦口鼻道综合体是上颔窦、前筛窦、额窦开口与固有鼻腔的交会处，窦口阻塞正是慢性鼻窦炎形成过程中的关键性变化[9-10]。一般而言鼻窦开口要维持正常运作，必须靠健全的黏膜分泌，及上皮纤毛正常的运动，两者皆为外来致病微生物无法入侵黏膜的重要因素[11-12]。慢性鼻窦炎常来自于急性鼻窦炎的治疗不足，造成鼻腔黏膜的肿胀，且当鼻窦开口渐渐阻塞后，鼻窦空腔中的氧气会被鼻窦黏膜吸收[13]，形成缺氧状态及超氧化物生成，导致纤毛运动不良，因而鼻窦内黏液滞积、黏膜增厚、发炎细胞浸润及血管通透性增加，使细菌更易滋生[14-15]。慢性鼻窦炎患者鼻黏膜会对前述致病菌及鼻腔中正常情况下共存而无致病的数种霉菌产生免疫发炎反应，分泌免疫蛋白以对抗或消灭霉菌[16-17]，但同时也破坏黏膜的防御机制，引起续发性的细菌感染以致慢性鼻窦炎的生成[18]。

Toll样受体(TLRs)通过识别病原相关分子模式(PAMPs)激活信号转导途径级联反应，诱导I-IFNs、促炎性细胞因子、趋化因子、MHC分子和共刺激分子等一系列抗病原因子的分泌与表达以及DCs的成熟，激发机体的天然免疫反应并介导建立获得性免疫反应[19]。然而，近年来随着对TLRs研究的不断深入，发现TLRs及其多态性或免疫缺陷也与许多疾病密切相关。TLRs不仅在机体的免疫防御中扮演着重要的角色，还在疾病的发生发展中发挥着重要作用，为安全、高效药物与疫苗的合理设计和开发提供依据[20]。通过本研究表明，TLR2、TLR4主要表达在鼻腔黏膜上皮细胞、固有层炎性细胞及黏膜下层腺体的胞浆和胞膜上。慢性鼻窦炎鼻息肉各型各期均较对照组高；并且随着分型的升高，TLR2、TLR4的表达量也随之增加，差异具有统计学意义。因此，TLR2和TLR4在鼻窦炎鼻息肉中的表达可能与鼻窦炎鼻息肉的发病机制存在着一定的相互关联，TLRs在该机制中可能扮演重要角色。