氟西汀对脑卒中后抑郁大鼠学习记忆能力和氧化应激反应的影响

方 玲 马 婉

(杭州市第七人民医院，浙江 杭州 310013)

脑卒中后抑郁是脑卒中后最常见的一种神经精神并发症，除表现神经功能缺损外，还出现意志缺乏、自责自罪、消极悲观、情绪低落、焦虑、失眠，严重者会出现自杀倾向〔1〕。临床调查显示脑卒中后抑郁发病率不断上升，严重影响患者日常生活能力、认知功能及神经功能，成为影响患者脑卒中复发及功能恢复的独立危险因素〔2，3〕。脑卒中后抑郁具体发病机制尚未完全阐明，与氧化应激直接相关的氧化-抗氧化系统失衡假说受到重视，且相关研究认为过多的氧自由基可损害神经元，使其水平降低，导致单胺类神经递质释放减少，从而引起抑郁症的发生〔4，5〕。因此，本研究探讨氟西汀对脑卒中后抑郁大鼠学习记忆能力和氧化应激反应的影响。

1 材料与方法

1.1实验动物 SPF级SD大鼠40只，雌性大鼠20只，雄性大鼠20只，体重(220±20)g，放置于适宜的温度和湿度条件下适应性饲养7 d。所有大鼠来源于上海实验动物中心。

1.2实验药物 盐酸文拉法辛胶囊(生产厂家：成都康弘药业集团股份有限公司)；盐酸氟西汀胶囊(生产厂家：礼来苏州制药有限公司)。

1.3主要试剂和仪器 大鼠丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(上海金穗生物科技有限公司)。DB001 Morris水迷宫(北京智鼠多宝生物科技有限公司)。

1.4方法

1.4.1实验分组及给药 40只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、试验组，每组10只。正常组：给予大鼠等剂量生理盐水灌胃，每天1次；模型组于造模成功后给予大鼠等剂量生理盐水灌胃，每天1次；阳性对照组：给予大鼠盐酸文拉法辛胶囊10 mg/kg灌胃，每天1次；试验组：给予大鼠盐酸氟西汀胶囊10 mg/kg，每天1次。末次给药后大鼠禁食12 h，给予大鼠3 ml/kg的10%水合氯醛腹腔注射麻醉，于大鼠腹主动脉取血，取大鼠脑，剥离海马，放置于-20℃保存备用。

1.4.2开野试验 采用敞箱(规格：80 cm×80 cm×40 cm)，底面划分成25个面积相等的方格，将大鼠放入适应60 s后，观察大鼠3 min内水平运动格数(大鼠四爪皆进入计数为1分)、垂直竖立次数(大鼠攀附箱底或者两前爪腾空计为1分)，以总分为最后得分。将大鼠每次均从同一角落放入，待测试结束后，采用消毒液擦拭，晾干待用。

1.4.3Morris水迷宫试验 该试验共分为A、B、C、D 4个象限。首先于大鼠训练前，加自来水于水迷宫中，再加墨汁使水变漆黑，将平台置于D象限水面下2 cm左右，使其可于实验光线下对大鼠不可见。试验均于9∶00～15∶00进行，需保持大鼠室内安静，灯光状态及物品放置一致，水温(23±2)℃。于第1～4天对大鼠进行定位航行实验：从4个象限按照逆时针方向将大鼠面向池壁放于水中，观察且计时60 s。采用摄像系统记录大鼠寻找且爬上平台的时间为逃避潜伏期，若大鼠60 s内未找到平台，则引导其至平台，让其停留15 s，逃避潜伏期计为60 s。完成后以4 d的逃避潜伏期反映大鼠的学习能力。于大鼠第5天进行空间探索实验：将平撤除，从距原平台最远的B象限将大鼠面向池壁放入水中，并且记录大鼠在60 s内各象限游泳时间，空间探索时间以在原平台所在D象限游泳时间，作为记忆成绩。

1.4.4海马SOD和MDA水平检测 取1.4.1剥离的海马组织，采用比色法测定SOD和MDA水平。

1.5观察指标 ①观察各组自主活动次数变化；②观察各组逃避潜伏期变化；③观察各组空间探索时间变化；④观察各组海马组织内SOD和MDA水平变化。

1.6统计学方法 采用SPSS19.0软件进行χ2、t及F检验。

2 结 果

2.1各组自主活动次数变化比较 与正常组自主活动次数〔(35.91±5.98)次〕比较，模型组〔(4.79±1.42)次〕、阳性对照组〔(18.36±4.91)次〕和试验组〔(23.69±2.76)次〕自主活动次数明显降低(P<0.05)；与模型组比较，阳性对照组和试验组自主活动次数明显增加(P<0.05)；试验组大鼠自主活动次数明显多于阳性对照组(P<0.05)，差异有统计学意义。

2.2各组逃避潜伏期变化比较 与正常组比较，模型组、阳性对照组和试验组大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05)；与模型组比较，阳性对照组和试验组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)；试验组大鼠逃避潜伏期明显低于阳性对照组(P<0.05)，差异有统计学意义，见表1。

表1 各组逃避潜伏期变化比较

与正常组比较：1)P<0.05；与模型组比较：2)P<0.05；与阳性对照组比较：3)P<0.05，下表同

2.3各组空间探索时间变化比较 与正常组空间探索时间〔(28.31±3.74)s〕比较，模型组〔(16.47±2.12)s〕、阳性对照组 〔(22.13±1.64)s〕和试验组〔(25.43±2.80)s〕大鼠空间探索时间明显降低(P<0.05)；与模型组比较，阳性对照组和试验组大鼠空间探索时间明显延长(P<0.05)；试验组大鼠空间探索时间明显长于阳性对照组(P<0.05)，差异均有统计学意义。

2.4各组海马组织内SOD和MDA水平变化比较 与正常组比较，模型组、阳性对照组和试验组海马组织内SOD水平明显降低，而MDA水平明显升高(P<0.05)；与模型组比较，阳性对照组和试验组海马组织内SOD水平明显升高，而MDA水平明显下降(P<0.05)；试验组海马组织内SOD水平明显高于阳性对照组，而MDA水平显著低于阳性组(P<0.05)，差异均有统计学意义，见表2。

表2 各组海马组织内SOD和MDA水平变化比较

3 讨 论

脑卒中后抑郁主要是脑卒中后出现以兴趣减退、情绪低落为主要表现的一种病症，是脑卒中常见并发症，严重影响脑卒中治疗和预后〔6,7〕。目前，脑卒中后抑郁治疗以抗抑郁细胞改善症状为主。氟西汀是一种选择性5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂，是常见的临床上一线抗抑郁药物，但目前对其潜在的抗抑郁作用仍不十分明确〔8,9〕。研究报道发现，氟西汀治疗能够诱导正常大鼠海马和皮层EAAT2表达升高〔10〕。开野试验主要是一种广泛用于动脉的自主活动能力及探索能力的评价，其活动评分主要反映大鼠的活动，并且垂直活动评分可反映大鼠对新鲜环境的好奇程度〔11〕。而开野试验中，大鼠水平活动下降主要反映其活动度减少，垂直活动下降主要反映对新鲜缓解的好奇程度减少〔12〕。本研究表明，氟西汀可增加大鼠自主活动次数。Morris水迷宫试验是一种主要用于考察动物空间学习记忆能力，该实验方法广泛用于与大脑海马组织病变相关神经系统疾病的研究〔13,14〕。本研究结果显示氟西汀可提高学习记忆能力。近年来，氧化应激作为研究热点，被认为精神疾病的重要原因之一，如抑郁症、脑卒中等〔15〕，认为脑卒中后抑郁发病机制中，与氧化应激直接相关的氧化-抗氧化系统失衡假说受到广大学者关注。MDA和SOD是氧化-抗氧化系统中重要的两个因子〔16〕。本研究表明，氟西汀可通过提高SOD水平降低MDA水平，改善氧化应激。综上所述，氟西汀可改善脑卒中后抑郁大鼠学习记忆能力，其机制可能与降低脑内MDA水平和增加SOD水平相关。