SAA、IL-6及HE4在卵巢癌患者中的表达及应用价值

孙文杰，高翠红*，于艳丽，崔娇姣，周鹏翔，杜潘艳，蒙长虹

(1唐山市妇幼保健院检验科，唐山 063000;2唐山市妇幼保健院妇科;3唐山市工人医院检验科)

卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤，其发病率在妇科恶性肿瘤中占第二位，并呈逐渐上升的趋势，死亡率非常高，严重危害广大妇女的身心健康[1],卵巢癌好发于55-65岁的绝经后妇女[2]，在妇科恶性肿瘤中预后最差[3]，早期症状较隐匿，恶性程度高，发现临床症状时往往已到晚期而难以救治。因此早期诊断、早期治疗是改善卵巢癌预后的关键。CA125用于卵巢癌筛查，已应用多年，由于其灵敏度和特异性的局限，临床迫切需要寻找适用于卵巢癌早期筛查的标志物。近年来研究发现,肿瘤的进展和转移可能与炎症反应有关[4],炎性介质白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein,SAA)及人附睾蛋白4(HE4)的研究,日渐成为热点，发现三者能有效预测肿瘤转移和评估肿瘤预后[5],有较好的临床应用前景。本研究对SAA、IL-6和HE4与卵巢癌TNM分期和病理分级的关系进行研究,并分析它们之间的相关性,以探讨其对卵巢癌的诊断价值,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2014-07～2017-12在唐山市妇幼保健院收治住院的卵巢肿瘤患者120例，其中恶性肿瘤48例，均经腹腔镜活检后病理诊断明确为卵巢癌。其中浆液性癌24例、黏液性癌17例、透明细胞癌7例。良性肿瘤72例,年龄24-72岁，中位年龄44岁，包括卵巢成熟性畸胎瘤22例，单纯囊肿23例，卵巢良性囊腺瘤18例，卵泡膜细胞瘤4例，纤维瘤5例。所有卵巢肿瘤患者均为首发病例，术前1个月未行放化疗，并排除其他系统肿瘤，盆腔炎、炎症和免疫系统病史除外。选取同期在本院体检的正常对照组50例，女性，年龄25-70岁，中位年龄41岁，心、肝、肾和胰腺功能正常，无其他良恶性肿瘤，近期无感染，没有应用免疫制剂。本研究得到医院伦理委员会批准，所有对象均知情同意。

1.2 卵巢癌患者病理分级和临床分期

卵巢癌患者病理分级按照2006年《NCCN遗传性/家族性高风险评估指南：乳腺和卵巢》评分标准[6]2-4分为高分化癌22例，5-7分为中分化癌15例，8-10分为低分化癌11例。按2009年的FIGO手术-病理分期标准进行分期,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为16,11,13,8例。

1.3 仪器和试剂

采用美国贝克曼DXI800化学发光免疫分析仪和配套试剂盒检测血清中HE4含量。采用ELISA法测定IL-6和SAA含量，试剂由上海圆创生物技术有限公司提供，具体操作严格按说明书进行。酶标仪为美国Thermo公司生产。

1.4 方法

取所有受检者术前晨起空腹静脉血3 ml预先置于有分离胶的试管中，混合5-10 min后，3 000 r/min离心15 min左右，尽快分离血清。采用ELISA法测定SAA(mg/L)、IL-6(pg/ml)的含量，用化学发光法测定HE4的含量(pmol/L)。

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 卵巢良恶性肿瘤组和对照组SAA、IL-6、HE4的比较

由表1可以看出，卵巢癌组SAA、HE4、IL-6水平显著高于卵巢良性肿瘤组和正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢良性肿瘤组和正常对照组三个指标分别比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 卵巢良恶性肿瘤组和对照组SAA、IL-6、HE4的水平变化Table 1 Comparison of SAA, IL- 6 and HE4 levels between benign group, malignant ovarian tumor group and control

与对照组比较，*P<0.05；与轻度组比较，#P<0.05

2.2 卵巢癌SAA、IL-6、HE4表达与临床表现的关系

方差分析表明卵巢癌患者中，SAA、IL-6、HE4的表达随着前列腺癌临床分期程度的增加而增高，各期两两比较，三者在各期间差异均有统计学意义(P<0.05，见表2)，SAA、IL-6、HE4随临床分期的升高而升高(见表2)。

表2 卵巢癌患者SAA、IL-6、HE4表达与临床分期的关系Table 2 Relationship between SAA，IL-6，HE4 and clinical staging in ovarian cancer

卵巢癌患者中，SAA、IL-6、HE4的表达随着卵巢癌分化程度的降低而表达增高。方差分析结果显示不同分化程度的SAA、IL-6、HE4表达差异有显著性(P<0.05，见表3)。两两比较显示，中分化和低分化SAA、IL-6、HE4水平明显高于高分化(P<0.05)。SAA、IL-6、HE4随病理分级的升高而降低。

2.3 SAA与HE4和IL-6的相关性分析

Spearman等级相关分析表明，SAA与HE4和IL-6呈正相关，相关系数分别为0.67,0.54，均P<0.05；HE4和IL-6无相关性。

表3 SAA、IL-6、HE4与卵巢癌病理分级的关系Table 3 Relationship between SAA，IL-6，HE4 and pathological grading in ovarian cancer patients

2.4 SAA、IL-6、HE4诊断卵巢癌的ROC曲线分析

IL-6、HE4、SAA诊断卵巢癌两两联合检测的ROC曲线见图1-3。从表4可以看出SAA、HE4联合检测的曲线下面积为0.932；SAA、IL-6联合检测曲线下面积为0.945；IL-6、HE4联合检测的曲线下面积为0.945。

图1 SAA与HE4联合检测卵巢癌的ROC曲线分析Figure 1 ROC curves of combined detection of SAA and HE4 for ovarian cancer

图2 SAA与IL-6联合检测卵巢癌的ROC曲线分析Figure 2 ROC curves of combined detection of in diagnosis of ovarian cancer

图3 HE4与IL-6联合检测卵巢癌的ROC曲线分析Figure 3 ROC curves of combined detection of HE4 and IL-6 in diagnosis of ovarian cancer

IL-6、HE4、SAA三者联合检测的ROC曲线分析，面积为0.987，HE4+IL-6+SAA联合检测诊断价值最高，高于IL-6、HE4、SAA两两联合检测(见图4和表4)。

图4 SAA、IL-6与HE4三者联合检测卵巢癌的ROC曲线分析Figure 4 ROC curves of combined detection of SAA，IL-6 and HE4 for ovarian cancer

表4 卵巢癌SAA、IL-6、HE4联合检测的ROC曲线分析Table 4 The results of ROC curves of SAA，IL-6 and HE4 in diagnosis of ovarian cancer

3 讨论

卵巢恶性肿瘤分泌的人附睾蛋白4(HE4)是一种N-糖基化的小分子分泌型蛋白，多项研究表明HE4在人体正常组织、癌旁组织不表达或低表达，在卵巢癌组织中尤其是卵巢子宫内膜样癌中高表达[7,8]，表明HE4可做为卵巢癌诊断及鉴别诊断的HE4有效手段，是一种新型卵巢癌的肿瘤标志物[9,10]。本研究结果表明，HE4可鉴别诊断卵巢恶性和良性肿瘤，且诊断卵巢癌的敏感度和特异性分别为88.9%、92.1%。HE4和卵巢癌的病理分级成负相关和临床分期成正相关。越来越多证据表明,肿瘤的发生和炎症关系密切，炎症的存在可以促进肿瘤的发生发展[11]。

SAA是在IL-1、IL-6及TNF的诱导下由肝脏合成的蛋白质，参与了多种恶性肿瘤发生发展[12]。SAA在炎症发生和发展的过程中被认为是早期的生物标志物。研究表明，SAA的浓度和肿瘤的阶段密切相关，这说明SAA可以作为一种监测癌症进程的生物标志物[13]。SAA在正常人血清中含量很低，在多数癌症中会升高。本研究表明，卵巢癌患者的SAA水平显著高于卵巢良性增生患者和正常对照组的水平，提示SAA水平在鉴别卵巢良、恶性疾病具有一定的参考价值。Weinstein等[14]的研究提示SAA在多种恶性肿瘤患者中显著增高，且晚期肿瘤的SAA水平明显高于早期肿瘤的水平。本研究表明SAA随着临床分期的升高和病理分级的升高而递减，也证明了这一点。

IL-6是淋巴细胞、单核-巨噬细胞及某些肿瘤细胞产生的，调节机体损伤和炎症反应的重要淋巴因子。当机体受到炎症时，血清中的含量会迅速升高[15]。在肿瘤发生损伤、坏死或者炎症时，IL-6的水平也会升高。因此，IL-6的血清值可以作为早期诊断肿瘤炎症反应程度的一个指标，IL-6可刺激肝脏生成SAA，进而导致SAA的升高，本研究相关分析表明二者成高度正相关。IL-6、SAA与卵巢癌的病程、病情相关，病情越严重，IL-6、SAA水平越高，炎性反应程度越高，肿瘤越容易发生转移。可能是由于高水平的IL-6影响卵巢癌细胞的粘连合力和血管形成，进而促进肿瘤广泛转移。本研究结果与文献报道一致[16]，这些结果提示卵巢癌患者疾病过程中存在炎性反应，临床分期越高，炎性反应程度越高，肿瘤越容易发生转移。

本研究对卵巢癌的诊断中，以HE4+IL-6+SAA联合检测具有较高的敏感度和特异性，分别为99.1%、97.9%，高于三个指标两两检测。

综上所述，SAA、IL-6和HE4是卵巢癌早期诊断的较好的标志物，可用于卵巢癌的辅助诊断和预后判断，可以避免过度诊断。监测卵巢癌患者外周血的HE4,IL-6,SAA变化可早期预测卵巢癌分期和分级，对于病情评估、病程监测，预测肿瘤转移和评估肿瘤预后有很高的应用价值。