PIK3CA突变影响因素对鳞状细胞肺癌预后的影响*

陆乘俊，肖华，金海，王晓伟，姚仕华，施博文

（上海长海医院 1.胸外科，2.呼吸与危重症学科，上海 200433）

流行病学研究显示鳞状细胞肺癌的发病率接近0.05%～0.16%，特别是在吸烟人群中发病率更高[1]。类磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylino-sitol 3-kinases,PI3Ks）基因突变可以导致恶性肿瘤细胞的细胞增殖调控、癌细胞分化及侵袭等病理特性的改变，导致恶性肿瘤病情的进展[2-4]。为了进一步揭示PIK3CA基因突变与肺癌的关系，为临床上肺癌的预后评估提供参考，本研究选取81例鳞状细胞肺癌患者，探讨PIK3CA基因突变与临床病理特征及生存预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年2月-2016年2月于上海长海医院收治的鳞状细胞肺癌患者81例。其中，男性48例，女性33例；年龄24～68岁，中位年龄51岁。根据PIK3CA突变情况将患者分为PIK3CA突变组和未突变组，分别为8和33例。纳入标准：①术前接受放化疗；②经病理确诊；③经过肺叶或全肺根治性切除术；④术后接受以铂类为基础的联合化疗；⑤临床病理资料保存完整。排除标准：①标本不符合检测要求；②依从性差，不配合治疗随访。同时选取同患者癌旁组织（≥5 cm）作为对照。患者及家属均知情同意并签署同意书。

1.2 方法

取冻存已裂解的血清细胞裂解液，室温放置5 min使其完全溶解，每1 ml的Trizol试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿，手动剧烈振荡管体15 s后，15～30℃孵育2～3 min。4℃下1 500 r/min离心15 min，将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。于4℃下1 500 r/min离心10 min，加入逆转录酶之前先70℃干浴3 min，终溶液即为cDNA溶液，配置反应体系：上游引物1μl，下游引物3μl，Taq聚合酶 2μl，cDNA5μl，SYBR Green 110μl，ddH2O 30μl，总体积50μl。

检测仪器使用ABOI2008RT-PCR仪（日本Panasonic公司），反应产物采用树脂脱盐，经自动点样仪的spector芯片，采用基质辅助激光吸附电离飞行时间质谱进行检测。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 19.0统计学软件，计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验，Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较用Log-rank χ2检验，预后影响因素采用Cox回归模型，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PIK3CA基因突变情况

对81例石蜡包埋肺癌组织提取进行检测，共有66例提取DNA成功，成功率为81.48%；81例癌旁组织提取成功68例，成功率83.95%；肺癌组织和癌旁组织同时扩增PIK3CA外显子9和20的例数分别为41和43例，扩增效率分别为62.12%和63.24%。

同时扩增出PIK3CA外显子9和20的癌旁组织和肺癌组织，外显子9中有5例出现单个碱基突变，外显子20中有3例出现单个碱基突变，均为肺癌组织。肺癌组织PIK3CA基因突变率为19.51%，癌旁组织PIK3CA无基因突变，基因突变率为0.00%，两者基因突变率比较，差异有统计学意义（χ2=7.147，P=0.000）。

2.2 PIK3CA基因突变与病理特征的关系

不同性别、年龄、分化程度、TNM期及有无淋巴结转移患者PIK3CA基因突变率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 1。

表1 PIK3CA基因突变与病理特征关系

2.3 PIK3CA基因突变与未突变组患者中位生存期比较

PIK3CA基因突变组患者中位生存期为14个月，生存率为37.50%，PIK3CA基因未突变组患者中位生存期为26个月，生存期为73.91%，经Log-rank χ2检验，差异有统计学意义（χ2=32.915，P=0.000）。见附图。

2.4 鳞状细胞肺癌患者预后的影响因素分析

将患者性别、年龄、分化程度、淋巴结转移、TNM分期及PIK3CA基因突变作为自变量，患者预后及生存时间作为因变量，进行Cox回归分析。结果显示：分化程度、TNM分期及PIK3CA基因突变是影响患者预后的影响因素（P＜0.05）。见表2。

附图 PIK3CA基因突变与未突变组患者生存曲线比较

表2 多因素分析参数

3 讨论

肺癌特别是鳞状细胞癌容易早期发生淋巴结或者血行的转移，临床预后较差[5-6]。一项包含了124例样本量的临床回顾性随访研究显示，鳞状细胞癌的5年生存率＜35%，中位生存时间＜32个月[7-8]。而近年来越来越多的基础研究显示，在影响到肺癌的发病或者临床预后的相关因素中，基因或者表观遗传学的改变可能是促进肺癌临床预后不佳的重要风险因素[9-10]。

PIK3CA突变可以促进癌细胞的凋亡率的下降，抑制免疫监察细胞对于癌细胞的杀伤作用，并可以在影响到癌细胞的生存微环境或者氧化应激障碍等方面发挥作用，进而促进鳞状细胞癌临床分期、组织学分型等病理过程的进展[11-12]。

本研究采用基因扩增法进行了相关PIK3CA突变基因的扩增，结果发现在鳞状细胞癌癌旁组织中并没有发现明显的PIK3CA突变情况，而在癌原发病灶组织中，PIK3CA突变情况较为明显，基因突变的阳性率平均20%左右，提示PIK3CA突变可能参与到了肺癌的发生发展过程中。PIK3CA突变能够在影响到磷酸激酶的磷酸化、三磷酸肌醇的修饰或者干预肺癌细胞基因的转录翻译活性等方面，发挥了一定的刺激作用，从而促进了鳞状细胞癌的病情进展[12]。杨熹、王娜等[13-14]通过收集分析了82例样本量的肺底部鳞状细胞癌的PCR检测资料，发现其癌基因的突变率为15%～20%，且患者的病情越严重、手术效果越差或者远期生存预后越差，相关基因的阳性突变率越高，这与本研究结论较为相似。但本研究并未发现PIK3CA突变与癌组织分化细胞、临床分期或者淋巴结转移的关系，提示相关临床特征不影响PIK3CA突变效果，PIK3CA突变主要与患者的遗传表观学改变或者父系或者母系的遗传携带等有关[14]。本研究发现PIK3CA基因突变组患者中位生存期较差，生存时间较短，提示PIK3CA基因突变可以作为临床上评估肺癌患者临床预后的重要指标。Cox回归分析显示分化程度、TNM分期及PIK3CA基因突变是影响患者预后的影响因素，PIK3CA基因的突变对于恶性肿瘤临床预后的影响，主要考虑其通过癌细胞的不同特性的影响，或者在癌细胞的治疗敏感性、程序性凋亡的发生等方面发挥一定的作用，导致不良预后的发生。

综上所述，鳞状细胞肺癌组织PIK3CA基因突变高于癌旁组织，但与病理特征无明显关系，PIK3CA基因突变患者预后较未突变者差。