气相色谱法测定香砂六君丸中乙酸龙脑酯

袁惠霞 欧国灯 刘潇潇

1.广州市荔湾区中医医院，广东广州 510140；2.广东省药品检验所，广东广州 510180

香砂六君丸来源于《太平惠民和剂局方》，由木香、砂仁、党参、炒白术、茯苓等10味药组成，具有益气健脾、和胃的功效，临床上用于脾虚气滞、消化不良、嗳气食少、脘腹胀满、大便溏泄等症[1-4]。本品为全生粉入药制剂，因此，原料药材的质量和安全直接影响到成品的疗效和用药安全。砂仁为方中佐药，奏以健脾和胃，理气散寒之效。挥发油成分是砂仁重要的药效物质基础，其中乙酸龙脑酯为砂仁挥发油中主要成分[5-15]。本品质量标准收载于《中国药典》2010年版一部，目前暂未对砂仁进行有效的控制[1]，亦未见文献报道香砂六君丸中砂仁的检测。本研究建立了气相色谱法测定香砂六君丸中乙酸龙脑酯，并对收集到的23家生产企业共23批样品（浓缩丸8批，水丸15批）进行检测，为该品种砂仁的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 6890N气相色谱仪系统、FID检测器；Sartorius CP224S、CP225D 电 子 天 平； Elmasionic 300H超声波清洗器（功率350W，频率37kHz）。试剂为分析纯。乙酸龙脑酯对照品（批号为110759-200303），购自中国食品药品检定研究院。收集来自不同生产企业样品23批。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

以弹性石英毛细管柱Agilent DB-1（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm）为色谱柱；载气为高纯氮气；柱温100℃；进样口温度230℃，不分流进样；火焰离子化检测器（FID），检测器温度250℃；进样量1μL。

2.2 对照品溶液的配制

2.2.1 标准储备液 精密称取乙酸龙脑酯对照品0.12562g，置25mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为乙酸龙脑酯标准储备液（即每1mL中含乙酸龙脑酯5.0248mg）。

2.2.2 混合标准系列溶液 精密量取乙酸龙脑酯标准储备液适量，用无水乙醇逐级稀释，配制成含乙酸龙脑酯分别为 0.5025、0.1005、0.0502、0.0201、0.0100mg/mL 的标准系列溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品适量，研细，水丸取约12g，浓缩丸取约5g（相当于含砂仁1g），精密称定，精密加入无水乙醇25mL，称定重量，超声处理（功率350W，频率37kHz）30分钟，并时时振摇，使样品充分溶散，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另按《中国药典》收载的本品处方，取除砂仁外其余7味药材，按制法配制不含砂仁的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。

2.4 专属性

分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各1μL，注入气相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行分析。在此色谱条件下，阴性样品无干扰，表明该法专属性良好，见图1。

图1 乙酸龙脑酯对照品（A）、香砂六君丸样品（B）和阴性样品（C）的气相色谱图

2.5 线性关系考察

取“2.2.2”项下乙酸龙脑酯标准系列溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以对照品浓度（mg/mL）为横坐标X，测得的峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程y=7325x-2.661（r=1.0000）。结果表明，乙酸龙脑酯在0.0100～1.0050mg/mL的浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度和稳定性

取标准曲线上乙酸龙脑酯对照品溶液（0.0201 mg/mL），连续进样6 次，计算对照品峰面积的RSD为 1.5%，表明仪器精密度良好；分别在 0、2、4、6、8、12、24小时内进样测定，计算对照品峰面积的RSD为1.3%，表明乙酸龙脑酯在24小时内稳定性良好。

2.7 检出限和定量限

精密量取一系列不同浓度的乙酸龙脑酯对照品溶液各1μl注入气相色谱仪，记录色谱图，以仪器信噪比3∶1时的乙酸龙脑酯浓度3.0μg/mL作为仪器检出限。以仪器信噪比10∶1时的乙酸龙脑酯浓度10.0μg/mL作为定量限。根据浓缩丸和水丸的取样量分别为5g和10g，按“2.3”项下供试品溶液制备方法计算香砂六君丸浓缩丸和水丸样品的方法检出限分别为0.015mg/g和0.006mg/g，方法定量限分别为0.05mg/g和0.02mg/g。

2.8 重复性和回收率实验

分别取同一批水丸和浓缩丸（水丸：批号为110807；浓缩丸：批号为1202171，两批样品中均未检出乙酸龙脑酯）各6份，水丸每份取12g，浓缩丸每份取5g，精密称定，分别精密加入乙酸龙脑酯对照品溶液（0.0502mg/mL）25mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算样品中乙酸龙脑酯的回收率，结果水丸和浓缩丸的平均回收率分别为98.1%和99.2%，RSD分别为1.1%和1.2%，见表1。因样品中乙酸龙脑酯含量低于检出限，故方法重复性由回收率RSD值表示，见表1。结果表明该法准确性和重复性均良好。

2.9 样品测定

取23个生产厂家的香砂六君丸样品，每个厂家1批，共23批（浓缩丸8批，水丸15批），分别按“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定样品中乙酸龙脑酯含量，结果见表2。

3 讨论

在样品前处理的预试验中，考察了挥发油提取法、超声提取法及浸泡过夜提取法等几种提取方法，结果以超声提取法效果最佳。本方法操作简便，测定准确，同时可以消除杂质成分的干扰。

《中国药典》2015年版一部“砂仁”项下规定[9]，乙酸龙脑酯含量不得少于0.90%。香砂六君丸中砂仁为原粉入药，根据处方量，香砂六君丸中乙酸龙脑酯理论含量应不低于0.8mg/g。考虑挥发性成分不稳定和大生产等因素，乙酸龙脑酯的转移率按不低于50%计算，拟定香砂六君丸中乙酸龙脑酯含量不得少于0.4mg/g。通过对不同企业样品的测定，结果23批样品中有20批未检出乙酸龙脑酯或低于定量限，占总批数的87.0%，而能检出乙酸龙脑酯的样品含量低且差异大。分析其原因可能与药材的来源与企业生产工艺差异较大引起。因此，有必要在香砂六君丸的质量标准中制定砂仁的含量测定项，从而对砂仁的质量及药品的有效性进行评价。本研究所建立的砂仁含量测定方法可操作性、可控性较强，为香砂六君丸中砂仁的质量控制提供参考。

表1 回收率和重复性考察结果

表2 样品测定结果