生化试剂交叉污染对血清镁测定结果的影响

李广权， 周卫东， 钟培英

（三六三医院检验科，四川 成都 610041）

全自动生化分析仪随着使用年限的延长，由于清洗结构老化引起的携带污染也随之增加。我们在最近的工作中发现本实验室的东芝TBA120全自动生化分析仪（简称东芝TBA120）检测镁离子（magnesian ion，Mg2+）的室内质控在控，但部分常规样本检测结果降低，单独复测又恢复正常。这种检测结果的随机性一般由仪器的交叉污染导致[1-2]。由于很多生化试剂，如葡萄糖（glucose，Glu）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、甘油三酯（triglyceride，TG）、二氧化碳（carbon dioxide，CO2）、总胆汁酸（total bile acid，TBA）等成分中均含有Mg2+，如何解决引起Mg2+结果假性增高已有报道[3]，但未见由交叉污染导致Mg2+结果假性降低的报道。因此，本研究评估了不同实验方案筛查Mg2+负干扰的效果差异。

1 材料和方法

1.1 样本

取加样顺序位于Mg2+项目前的各项目试剂1及试剂2各1 mL备用。取当天检测完毕的10份（每份约1 mL）无明显黄疸、脂血、溶血的血清样本充分混合，制成新鲜混合血清。

1.2 仪器与试剂

仪器为东芝TBA120（日本东芝公司）及日立7600-010全自动生化分析仪（简称日立7600，日本日立公司）。丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT；速率法）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST；速率法）、γ-谷氨酰基转移酶（gammaglutamyltransferase，GGT；L-γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺底物法）、总胆红素（total bilirubin，TB；钒酸盐氧化法）、直接胆红素（direct bilirubin，DBil；钒酸盐氧化法）试剂购自日本和光株式会社，Mg2+试剂（二甲苯胺蓝法）购自瑞士罗氏公司，总蛋白（total protein，TP）试剂（双缩脲法）购自北京九强公司，白蛋白（albumin，Alb）试剂（溴甲酚绿法）购自四川迈克公司。生化质控血清（批号897UN、697UE）购自英国朗道公司。

1.3 方法

1.3.1 试剂中Mg2+的检测 在保证所有项目质控在控，2台仪器检测项目加样顺序相同的条件下，将加样顺序位于Mg2+项目前的各项目（ALT、AST、GGT、TP、Alb、TB、DBil）试剂1及试剂2分别作为样本在2台仪器上检测Mg2+，每份样本检测10次，筛查可能对Mg2+检测造成干扰的试剂[4]。

1.3.2 新鲜混合血清Mg2+检测 分别在2台仪器上单独测定10次新鲜混合血清的Mg2+水平，以此作为对照。再将混合血清平均分成7份，将加样顺序位于Mg2+项目前的各项目（ALT、AST、GGT、TP、Alb、TB、DBil）逐一与Mg2+项目组合，每个组合测定1份混合血清，先测定疑似干扰项目，再测Mg2+，每份混合血清在2台仪器上各重复测定10次，记录Mg2+结果，筛查可能对Mg2+检测造成干扰的试剂。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料采用表示，组间比较采用t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 疑似干扰项目试剂Mg2+结果

除TP试剂中检出Mg2+外，其他项目（ALT、AST、GGT、Alb、TB、DBil）试剂中未检出Mg2+。东芝TBA120和日立7600检测TP试剂中的Mg2+结果分别为（3.79±0.16）、（3.85±0.16）mmol/L，二者差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 混合血清单独检测Mg2+与先检测疑似干扰项目再测定Mg2+的结果比较

东芝TBA120检测混合血清Mg2+水平与日立7600比较差异无统计学意义（P＞0.05）。先测TP、TB、DBil，再测Mg2+，东芝TBA120的Mg2+结果与对照及日立7600比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。日立7600先测疑似干扰项目（ALT、AST、GGT、TP、Alb、TB、DBil），再测Mg2+，其检测结果与对照差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 东芝TBA120和日立7600单独检测Mg2+与先检测疑似干扰项目再测定Mg2+的结果比较（mmol/L，）

表1 东芝TBA120和日立7600单独检测Mg2+与先检测疑似干扰项目再测定Mg2+的结果比较（mmol/L，）

注：与对照比较，*P＜0.01；与日立7600比较，#P＜0.01

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3 讨论

本研究采用2个不同的检测系统排查Mg2+的干扰源，在确保加样顺序一致的情况下，一方面可以避免单个检测系统可能存在的随机误差，保证筛查出的交叉污染源准确可靠；另一方面还可发现不同检测系统抗交叉污染性能的差异。本研究将混合血清分成多份来筛查干扰项目，首先排除了样本针携带污染[5-6]。本研究结果显示，当怀疑Mg2+项目存在试剂间交叉污染时，将疑似干扰项目试剂作为样本检测Mg2+的筛查方法，适合发现试剂中含有Mg2+的项目，但无法排查对Mg2+检测有负干扰的项目。本研究结果表明TP试剂对Mg2+检测有正干扰，可能与TP试剂中含有Mg2+有关[7]。采用联合疑似干扰项目检测混合血清Mg2+的筛查方法，可同时发现对Mg2+有正干扰和负干扰的项目，即待测样本中含有一定量的Mg2+更利于筛查对Mg2+有负干扰的项目。本研究结果显示TB与DBil均对Mg2+存在负干扰，主要原因可能是采用钒酸盐氧化法的TB及DBil的试剂2中均含有乙二胺四乙酸二钠（ethylenediaminetetraacetic acid-Na2，EDTA-Na2）。 EDTA-Na2是一种常见的络合剂，易与钙、镁形成螯合物。当先检测TB或DBil项目再检测Mg2+项目时，由于仪器试剂针的清洗能力下降，残留在试剂2试剂针上的EDTA-Na2由试剂针携带进入Mg2+项目的检测反应中，与样本中的部分Mg2+生成螯合物，使Mg2+的测定结果降低[8]。

综上所述，通过检测疑似干扰项目试剂Mg2+的筛查方法，可发现对Mg2+的正干扰源，采用2个检测系统测定Mg2+结合先测定疑似干扰项目再测定混合血清Mg2+的实验方案可快速、准确地筛查出对Mg2+的正、负干扰源及发现不同检测系统抗交叉污染性能的差异。