FA160型粪便自动分析仪检测粪便隐血的性能评价

张春莹， 黄 茜， 谢 恒， 熊 明， 粟 军

（四川大学华西医院实验医学科，四川 成都 610041）

粪便隐血试验（fecal occult blood test，FOBT）可检测出粪便中微量的血红蛋白，有助于消化道出血及消化道肿瘤的早期诊断[1]。目前，FOBT在实验室多采用手工加样，人工判读结果。虽然手工操作简单，但主观性强，难以实现检测的标准化和规范化。随着实验室自动化程度的不断提高，粪便检测从手工检测发展到仪器检测是必然趋势。粪便自动分析仪通过规范操作流程，对标本进行定量稀释，在相同的反应时间内自动判定隐血结果，尽量使整个操作过程标准化。本研究拟评价FA160型粪便自动分析仪（简称FA160）检测粪便潜血的效能。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

FA160（四川沃文特生物技术有限公司）及配套卡型便潜血检测试剂（胶体金法）（简称W试剂）。艾博生物医药（杭州）有限公司条形便潜血检测试剂（胶体金法）（简称A试剂）。

采用FA160及配套W试剂进行自动加样、自动判读结果称为仪器法。单独采用W试剂、A试剂分别进行手工取样、人工判读结果称为手工法。

1.2 标本

取新鲜健康人全血1份，用于制备已知浓度的血红蛋白（hemoglobin，Hb）母液，用样本稀释液将Hb母液稀释成20种理论浓度：3 200、2 000、1 600、800、400、200、100、51.2、25.6、12.8、6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0 μg/mL。

随机收集四川大学华西医院住院患者232份粪便标本，分别采用仪器法和手工法进行FOBT。

从实验室信息系统中统计分析2015年和2016年FOBT阳性检出率。

1.3 方法

1.3.1 仪器法与手工法的最低检测限和检测范围 采用仪器法和手工法分别检测已配制的粪混悬液。仪器法严格按仪器说明书进行操作。手工法严格按《全国临床检验操作规程》（第3版）的相关要求进行操作。

1.3.2 仪器法携带污染试验 将上述20种不同浓度的Hb稀释液与粪便混匀，制备成混悬液，采用FA160检测，在每个浓度混悬液检测后加入稀释液空白管进行平行检测，以判断是否有携带污染。

1.3.3 FOBT 分别采用手工法和仪器法检测232份临床粪便标本。（1）手工法：取新鲜粪便标本，手工采集火柴头大小粪便于稀释杯内，加0.5 mL稀释液混匀，分别采用A试剂和W试剂检测粪便潜血，10 min内根据比色卡人工判读结果；（2）仪器法：取同一份新鲜粪便标本，用采便勺采集一平勺大小粪便标本于采集管内，按仪器操作说明书进行操作，由FA160自动稀释、自动加样，4 min后仪器自动判读结果。对2种方法检测结果不一致的样本重新取样进行双试剂复检，10 min内根据比色卡人工观察结果。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计分析。对结果一致性进行Kappa检验，并用McNemar检验观察2种方法检测结果有无差异。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 仪器法与手工法的最低检测限和检测范围

仪器法检测Hb的最低检测限为0.1 μg/mL。当粪便标本中Hb≥0.1 μg/mL时，检测结果为弱阳性或阳性；当粪便标本中Hb＜0.1 μg/mL时，检测结果为阴性；当标本中Hb＞2 000 μg/mL时，由于Hb抗原过量造成后带效应，检测结果为假阴性。因此，仪器法的检测范围为0.1～2 000.0 μg/mL。手工法与仪器法的结果一致。见表1。

表1 仪器法和手工法Hb的最低检测限和检测范围

2.2 仪器法携带污染试验

采用FA160检测20种不同浓度的Hb粪便混悬液，在每个浓度混悬液后加入稀释液空白管并进行检测。结果显示稀释液空白管的隐血结果均为阴性，因此无携带污染。

2.3 手工法不同试剂FOBT结果的比较

同时采用W试剂和A试剂检测232份粪便标本。W试剂共检出41份FOBT阳性标本，阳性率为17.6%；A试剂共检出33份FOBT阳性标本，阳性率为14.2%。2种试剂检测不一致标本8份，W试剂为弱阳性，而A试剂为阴性，双试剂复检均呈弱阳性或阳性，W试剂阳性检出率稍高，2种试剂检测结果总符合率为96.55%。2种试剂阳性检出率一致性较好（Kappa=0.87），但W试剂阳性率高于A试剂（P=0.008）。见表2。

表2 手工法不同试剂FOBT结果的比较

2.4 仪器法与手工法FOBT结果的比较

同时采用仪器法与手工法检测232份粪便标本。仪器法共检测出48份FOBT阳性标本，阳性率为20.7%，稍高于手工法，总符合率为93.53%。仪器法与W试剂手工法的一致性较好（Kappa=0.85），2种方法FOBT的阳性检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。有2份标本虽然同样使用W试剂，但仪器法检测结果为阴性，手工法检测结果为弱阳性，推测可能原因是标本量较少，仪器采样稀释倍数较大，使得标本中的Hb浓度较低而未被检测出。仪器法与A试剂手工法的一致性较好（Kappa= 0.78），但2种方法FOBT的阳性检出率差异有统计学意义（P=0.000）。见表3。

表3 仪器法与手工法FOBT结果的比较

2.5 2015年和2016年临床标本FOBT结果分析

2015年采用手工法A试剂进行FOBT，2016年采用仪器法进行FOBT。2015年与2016年的FOBT阳性率差异无统计学意义（χ2=1.0，P＞0.05）。

表4 2015年和2016年FOBT结果的比较[例（%）]

3 讨论

消化道出血是消化道疾病常见和主要症状之一，FOBT是临床诊断消化道出血性疾病、筛查消化道肿瘤有效实用的手段之一。美国临床化学学会[2]和中华医学会检验分会[1]均推荐FOBT作为消化道出血和结直肠癌筛查指标。免疫法FOBT是目前我国结直肠癌筛查的最适合和有效的筛查手段[3]。免疫法FOBT具有简单、快速，以及较高的敏感性和特异性[4-5]，抗干扰能力强等特点。

目前，由于粪便标本的特殊性，FOBT仍沿用几十年来一直使用的手工法，生物安全性低，易交叉污染，主观判断误差大，检测速度慢，影响工作效率。仪器法的检测原理与手工法相同，但可使操作过程简单、试验过程和工作环境更洁净卫生，仪器自动判读结果，使检测结果具有可比性。

本研究结果显示，仪器法检测Hb的最低检测限为0.1 μg/mL，检测范围为0.1～2 000.0 μg/ mL，与手工法一致。携带污染试验显示仪器法无携带污染。在检测临床粪便标本时，仪器法阳性率高于手工法，原因可能是：手工采样量较小（火柴头大小，约10～50 mg），而仪器采集管取样量大（一平勺约0.3～0.5 g），因此采集到病变标本的可能性更大，阳性检出率高，降低了漏检风险。但仪器法也会受到采样制约，在本研究中，有2份标本虽然同样使用W试剂，但仪器法检测结果为阴性，而手工法为弱阳性，推测原因可能是仪器采样量少于要求量，稀释倍数相对较大，使得标本中的Hb浓度较低而未被检出。另一种常见的假阴性结果为患者消化道大出血时，粪便中Hb浓度过高，呈柏油样便，免疫胶体金法检测因后带现象易出现假阴性，解决办法是充分稀释便样后再检测[6-7]。本研究结果显示，2015年采用手工法，2016年采用仪器法，但2年之间FOBT的阳性检出率差异无统计学意义（P＞0.05），说明仪器法检测粪便隐血的效能与手工法基本一致，但仪器法检测更方便快速，符合生物安全性的要求。

综上所述，FA160检测粪便隐血的敏感性、特异性均较高，阳性检出率高于手工法，可降低漏检的风险，适宜在临床实验室推广使用。