商丘市无偿献血人群中HLA抗体分布状况调查研究

贾一宾，祖卫东

(商丘市中心血站，商丘 476100)

随着医学技术的发展，输血已经在出血性疾病、手术、创伤及纠正慢性贫血等的治疗中都发挥着不可替代的作用，是挽救患者生命的重要治疗手段。目前，输血安全管理受到广大医务工作者的重视，通过交叉配血、免疫合血以及信息比对等措施，溶血性输血反应已经大幅度降低[1，2]。但值得注意的是，非溶血性输血反应仍然是临床导致患者输血反应甚至致死的主要原因之一。有研究报道[3，4]，非溶血性输血反应和供血者血液中人类白细胞抗原(HLA)抗体密切相关，且对有生育史的妇女，体内产生HLA的几率较高，其血液不可直接用于临床输血。近期，我们对商丘市无偿献血人群中HLA抗体分布进行了调查，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取商丘市2016年无偿献血者200例为研究对象。其中有男性献血者60例，年龄18～55 岁，平均年龄（25.5±4.0）岁；有女性无偿献血者140例，其中未生育女性64例，年龄18～30岁，平均年龄（24.6±2.7）岁；已生育女性 76 例，年龄25～55 岁，平均年龄（25.8±4.3 岁）。

1.2 试剂和仪器 本研究所采用的HLA试剂盒购买自美国One Lambda公司抗体筛选试剂(LSM12，LABScreen Mixed，Lot021)，该试剂盒能够同时检测HLA-Ⅰ类、Ⅱ类抗体。

1.3 检测方法 抽取所有入选的体检者静脉血3～5ml，置于EDTA抗凝管中，3000r/min离心10min，分离出血浆，-20℃待用。试验原理为试剂盒中磁珠包被有HLA-Ⅰ类、Ⅱ型号糖蛋白，于血浆孵育后可以结合血浆中的HLA抗体，然后和藻红蛋白节后抗人IgG抗体，通过仪器比对，判断结果。具体操作如下：96 孔板中加入 2μl磁珠，14μl PBS，7μl血浆样本，充分混匀后在室温条件下避光孵育30min。然后加入180μl的洗液，充分混匀后在水平离心机上离以3500r/min离心5min。待磁珠沉在96孔板孔底部，则弃去上清液。连续2次后，加入50μl二抗，充分混匀，室温条件下避光孵育30min，弃上清液，用洗液清晰3次。最后加入PBS 50μl并充分混匀，在酶标仪上读板。

1.4 观察指标 观察比较三类献血者(男性、未育女性和已育女性)的HLA分布情况和特异性。

1.5 统计学分析 所有数据均采用SPSS 17.0统计学软件处理，计量资料均以平均值±标准差（±s），计数资料采用χ2检验，如有理论T值＜5则使用校正χ2检验，计量资料采用t检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三类无偿献血者HLA抗体分布情况比较 在全部200例献血者中，HLA抗体阳性主要分布在已育女性人群中。已育女性HLA抗体阳性率显著高于未育女性和男性，且以HLA-Ⅰ类抗体为主，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

2.2 HLA-Ⅰ类抗体特异性分析 由表1可知，本研究中共有HLA-Ⅰ类抗体阳性者22例 (包含HLA-Ⅰ/Ⅱ同时阳性者)，一般均以多种HLA-Ⅰ类抗混合存在为主。HLA-Ⅰ类抗体出现频率较高的是 A*11、23、02、04，B*07、27、40、81、15 以 及Cw*07。见表2。

2.3 HLA-II类抗体特异性分析 由表1可知，本研究中共有HLA-II类抗体阳性者9例 (包含HLA-Ⅰ/Ⅱ同时阳性者)，一般均以多种HLA-II类抗混合存在为主。HLA-II类抗体出现频率较高的是DRB1*04、02、03、01，DQB1*06、02、01 和 DPB1*04、03。 见表3。

3 讨论

在医疗界高度重视用血安全的现在，非溶血性输血反应已经成为临床安全用血的重大隐患，造成输血不良反应，严重者可导致相关急性肺损伤等并发症，直接威胁患者生命安全。HLA抗体是引起输血相关急性肺损伤的主要原因之一，研究证实65～90%的HLA抗体阳性献血者血液可引起受血者相关急性肺损伤的发生[5]。HLA是目前所知人体最复杂的多态系统，是具有高度多态性的同种异体抗原，其化学本质为一类糖蛋白，按其分布和功能分为Ⅰ类抗原和Ⅱ类抗原。有研究证实[6，7]，已育女性献血者HLA抗体出现的频率较高，会增加临床用血的HLA同种免疫的风险，应对HLA抗体阳性者的血液进行去血浆和去血小板处理。Triulzi等人[8]也认为妊娠、生育过程就是一次免疫刺激，会导致孕妇体内有高含量的HLA抗体，且抗体浓度和患者妊娠次数呈正相关，此类抗体进入受血这体内后会导致HLA同种免疫，诱发非溶血性输血反应。

表1 三类无偿献血者HLA抗体分布情况比较

表2 24例HLA-Ⅰ类抗体阳性献血者HLA-Ⅰ类抗体特异性分析

表3 HLA-II类抗体特异性分析

临床用血不仅要加强交叉配血等常规检查，也要加强HLA抗体检测。本研究选取2016年的200例献血人群，并进行了HLA抗体筛查，结果表明已育女性HLA抗体阳性率显著高于未育女性和男性，且以HLA-Ⅰ类抗体为主，且差异有统计学意义。据报道[9]，欧美发达国家已经制定了相关规章制定，要求医疗机构在进行输血治疗时有限使用女性献血者血液，我国尚无相关规定。在本研究中，未育女性和男性献血者中也有个别HLA抗体阳性者，这可能和环境中HLA抗原和机体HLA抗原表位具有一定相似度，从而导致的交叉反应刺激，导致HLA抗体产生，但这种现象是少见的，发生率较低[10]。根据HLA抗体产生的原因可知，多次输血者体内也会产生HLA抗体，但本研究未选取有输血史患者，有待进一步研究。HLA抗原和种族、遗传等因素有关，因此不同区域HLA的特异性也有所不同[11]，而高发的HLA抗原可诱发高发抗体。我们根据本地区献血者血小板HLA基因库，将基因频率在0.02以上的认为是常见基因。我们发现本地区 HLA-I类抗体以 A*11、23、02、04，B*07、27、40、81、15 以及 Cw*07 多见；HLA-II类抗体以DRB1*04、02、03、01，DQB1*06、02、01 和 DPB1*04、03常见。

综上所述，本地区已育女性献血者HLA抗体频率较高，要加强对已育女性献血者血液筛选，排除其血浆和血小板成分，加强临床用血安全。