宁夏回族自治区汉族与回族Rh阴性表型分布调查

邵峰，步晓筠，杨洁，刘建成

(宁夏血液中心，宁夏 银川 750000)

Rh血型系统是人类红细胞血型系统中最为重要的基于蛋白的血型系统，在已知血型系统中，它表达的抗原数量最多，分子机制也最复杂，现在已发现51种抗原，其中常见涉及临床问题的Rh血型抗原主要是D，C，c，E，e这 5种。Rh阴性分布在人种间存在显著差异，我国Rh阴性分布少数民族与汉族间也存在民族间差异，[1-4]此前针对回族的研究较少。研究者对宁夏回族自治区初筛确认为Rh阴性的献血者的血清学表型与不规则抗体进行了回顾性分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014年1月1日至2016年12月31日宁夏血液中心的初次无偿献血者共135159例。

1.2 仪器与试剂 Hemotype全自动血型分析仪（意大利GSM公司），KA-2200型离心机（日本Kubota公司）；单克隆IgM和IgG抗-D混合剂（英国Millipore公司、加拿大Dominion Biologicals limited公司），IgG抗-D试剂、直接抗人球蛋白试剂、抗C、抗c、抗 E、抗e、抗-A、抗-B标准血清、筛选细胞、谱细胞试剂(上海血液生物医药公司)。

1.3 方法

1.3.1 Rh阴性初筛试验 使用英国Millipore单克隆IgM和IgG抗-D混合剂进行盐水微板初筛。

1.3.2 Rh阴性确认试验 使用英国Millipore公司和加拿大Dominion Biologicals limited公司的单克隆IgM和IgG抗-D混合剂以及上海血液生物医药公司IgG抗-D试剂3种不同抗-D试剂，对初筛阴性者的受检红细胞进行间接抗人球蛋白试验(IAT)，同时做阴阳对照。观察结果如果均阴性就确认判定为Rh阴性。

1.3.3 Rh血清学表型鉴定 分别用抗C，抗c，抗E和抗e试剂对Rh阴性标本进行生理盐水试管法血清学分型。

1.3.4 抗体筛查与鉴定 受检血清用筛选细胞(3个筛选细胞)与自身细胞作为一组，通过盐水法进行不规则抗体检测，抗体筛选阳性时再用谱细胞与自身细胞为一组进一步鉴定其特异性。

1.3.5 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件进行分析，基因频率计算方法采用陆琼[5]推导的公式计算进行Hardy-Weinberg吻合度检验，通过基因单体型计算出各个表现型的理论值，进行χ2检验。P＞0.05为期望值与观察值差异无统计学意义。

2 结果

2.1 Rh阴性检出比例 135159例标本中共初筛511例，检出D变异型54例(0.04%)，确认Rh阴性457例(0.34%)，宁夏汉族标本108835份中确认为Rh阴性316例（0.29%），宁夏回族标本22511例中确认为Rh阴性122例（0.54%）。

2.2 Rh阴性献血者中回族及汉族Rh阴性表型分布 宁夏汉族与宁夏回族Rh阴性各表型分布进行统计学卡方检验，均无显著性差异（P＞0.05）。汉族阴性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度检验结果，观察值与理论值经 χ2检验，P＜0.05，证明调查数据不符合Hardy-Weinberg平衡。回族阴性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度检验结果，观察值与理论值经χ2检验，P＞0.05，证明调查数据符合Hardy-Weinberg平衡，见表1及表2。

2.3 单倍型基因频率分布情况 宁夏汉族单倍型基因频率分布情况与国内其他地区类似，宁夏回族单倍型基因频率dce高于汉族，介于汉族与白种人之间。

2.4 血清不规则抗体筛查结果 457例Rh阴性献血者血清中检出含有不规则抗体的7例(1.5%)，其中5例为IgG类抗D抗体，1例为IgG类抗D抗体合并抗C抗体，1例特异性不明确；检出不规则抗体的Rh阴性献血者其中4例为dccee血清学表型，2例为dCcee血清学表型，1例为dccEe血清学表型。对检出不规则抗体的献血者随访调查，均为女性且均有妊娠史，其中3例合并输血史。

3 讨论

Rh阴性率及表型分布在人种间存在显著差异，我国Rh阴性分布少数民族与汉族间也存在民族间差异。汉族标本108835例中确认为Rh阴性316例（0.29%），符合汉族Rh阴性分布范围。回族标本22511例中确认为Rh阴性122例 （0.54%），宁夏回族献血者Rh阴性率高于汉族。

宁夏汉族人群的Rh阴性表现型dccee(58.86%)＞dCcee(28.80%)＞dccEe(4.43%)＞dCcEe(3.16%)＞dCCee(4.11%)，以 dccee 和 dCcee 为主，宁夏汉族Rh阴性表型分布与上海、深圳、石家庄地区RhD阴性人群的表型分布相似[6-8]。宁夏回族人群 RhD阴性血清学表型 dccee(66.39%)＞dCcee(23.77%)＞dccEe(4.92%)＞dCcEe(2.46%)＞dCCee(2.46%)，与宁夏汉族Rh阴性表型分布无显著性差异，但回族Rh阴性人群dccee(66.39%)检出频率略高于汉族(58.86%)，体现出宁夏回族Rh阴性血型的分布特点。

表1显示宁夏汉族Rh阴性单倍型频率特点：dce(0.767203)＞dCe(0.199006)＞dcE(0.028874)＞dCE(0.006944)，宁夏汉族Rh阴性献血人群中的单倍型基因频率与上海、山东潍坊、南昌、洛阳等地区Rh阴性献血者单倍型基因频率相比较无差异[5，9-11]，体现出我国汉族人群Rh阴性血型分布特点，为进一步探讨Rh阴性血型在汉族人群遗传学意义提供了一定的数据参考。本研究中宁夏汉族Rh阴性无偿献血人群中期望值与观察值差异均有统计学意义，Hardy-Weinberg吻合度不佳，考虑原因可能为宁夏汉族外来人口流入，外来基因掺入，改变原有宁夏汉族群体的基因频率。表2中显示宁夏回族献血者调查数据符合Hardy-Weinberg平衡，宁夏回族献血者的基因频率分布符合宁夏回族基因频率分布特点。回族Rh阴性单倍型频率特点：dce(0.814801)＞dCe(0.155818)＞dcE (0.030191)＞dCE(0.000000)，与文献报道的上海、南昌、青岛、德国和高加索人的RhD阴性单倍型基因频率分布情况比较，可以看出：宁夏汉族人群与上海、南昌、青岛汉族人群相似，宁夏回族单倍型分布介于汉族与哈萨克族、德国、高加索白种人之间[5，10]。

表1 宁夏汉族Rh阴性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度检验结果

表2 宁夏回族Rh阴性表型分布及Hardy-Weinberg吻合度检验结果

表3 各地区Rh阴性单倍型基因频率分布情况

Rh血型系统抗原有很强的免疫原性，在缺少相应抗原的个体中因输血或妊娠等免疫刺激可产生相对应的Rh血型抗体。本研究发现的不规则抗体7例均为女性，均有妊娠史，其中3例合并输血史。随着输血医学的发展，因Rh阴性患者无D抗原，对这类患者临床上只输Rh阴性血液，接触E、C、c、e抗原刺激几率增高，继而产生抗体的几率高，而输血引起产生抗D者会逐渐少见。但Rh阴性患者因妊娠刺激产生抗D抗体几率高于其他抗原，因而有多次输血史和妊娠史的患者配血时应把这些抗原作为常规检测，为患者提供Rh系统相合的血液，减少输血反应的发生。

宁夏回族献血者Rh阴性率高于汉族，宁夏回族献血者Rh阴性表型分布与汉族献血者间未见显著性差异，但单倍型基因频率呈现本民族特点。由于本研究检测Rh确认未进行吸收放散实验，因而不能排除Del的存在导致观察值数据偏高的问题。通过对宁夏Rh阴性表型及基因频率的调查和分析，为今后稀有血型供者库积累数据，便于科学合理用血指导。目前尚缺乏在国内不同地区间不同民族间Rh阴性人群分型分布的大规模调查数据，不同地区不同民族间的分型分布差异情况，有待于进一步研究。