葛明胶囊总黄酮含量测定※

2018-10-09潘东明黄亦琦戚欢阳郭诗妮马雪云刘晓娟

中国中医药现代远程教育 2018年18期

潘东明黄亦琦戚欢阳郭诗妮马雪云刘晓娟

（1 福建中医药大学药学院，福建福州 350122；2 厦门市医药研究所厦门市天然药物研究与开发重点实验室，福建厦门 361008）

葛明胶囊由葛根、山楂、决明子、丹参等中药制成，具有利湿化浊、活血通络、润肠通便等功效[1]，除用于高血压症外，还可用于防治脂肪肝、肥胖症[2-3]。方中葛根、山楂等药物的降脂主要活性成分为黄酮类化合物[4-5]。本文拟将葛明胶囊中总黄酮含量作为其质量控制指标，采用单因素实验方法对提取条件进行优化后，以葛根素为对照品，利用紫外分光光度法对葛明胶囊中的总黄酮进行含量测定，为该复方中药制剂的质量控制提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 XS205电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司，d=0.01 mg）；KQ-500VDB型三频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器公司）；SpectraMar M3酶标仪（美国MoLecμLar Devices公司）；明澈TM-D24ΜV超纯水系统（德国Merck MiLLipore公司）。

1.2 试药与试剂甲醇（批号20160902），无水乙醇（批号20160222），均为分析纯（西陇化工股份公司）。实验用水均为超纯水系统自制双蒸水。

标准品：葛根素（批号110752-201313，纯度95.5%，中国食品药品检定研究院）。

饮片：丹参（批号161215），山楂（批号161219）购自厦门燕来福制药公司；决明子（批号1608270122），葛根（批号1611010072）购自亳州市沪谯药业公司。经厦门市医药研究所鉴定，丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎、山楂为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida var.major N.E.Brown的干燥成熟果实、决明子为豆科决明属植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明 C.tora L.的干燥成熟种子、葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.)Ohwi的干燥根。

样品的制备：按照葛明胶囊配伍比例混匀各饮片粉末备用。

2 方法与结果

2.1 葛明胶囊最佳提取条件的优化

2.1.1 提取溶剂的考察精密称取6份样品333.33 mg于10 mL容量瓶中，分别用甲醇、无水乙醇、70%乙醇、水定容，先浸泡30 min，再进行超声处理（80 Hz，100%）30 min，过0.45 μm微孔滤膜；分别取不同溶剂提取的续滤液1 mL于50 mL容量瓶中，分别用甲醇、无水乙醇、70%乙醇、水定容；在250 nm处测其吸光度A0；取甲醇、无水乙醇、70%乙醇、水在250 nm处测其吸光度A。以△A（△A=A0-A）与不同浓度乙醇溶液的关系作图，如图1所示。不同提取溶剂在70%乙醇时出现拐点，选取70%乙醇为最佳提取溶剂。

图1 不同提取溶剂的选择

2.1.2 料液比的考察精密称取5份样品0.5 g，分别加入5 mL、10 mL、15 mL、20 mL、25 mL70%乙醇，先浸泡30 min，再进行超声处理（80 Hz，100%） 30 min，过0.45 μm微孔滤膜；分别按不同料液比顺序取续滤液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL于50 mL量瓶中，加入70%乙醇进行定容；在250 nm处测其吸光度A0；取70%乙醇在250 nm处测其吸光度A。以△A（△A=A0-A）与不同料液比提取的关系作图，如图2所示。不同料液比在1∶30时出现拐点，选取1∶30为最佳料液比。

图2 不同料液比的选择

2.1.3 超声时间的考察精密称取5份样品333.33 mg于10 mL量瓶中，加入70%乙醇定容，先浸泡30 min，再进行超声处理（80 Hz，100%），时间分别为10 min，20 min，30 min，40 min，50 min，后过0.45 μm微孔滤膜；分别取不同超声时间提取的续滤液1 mL于100 mL容量瓶中，分别用70%乙醇定容；在250 nm处测其吸光度A0；取70%乙醇在250 nm处测其吸光度A。以△A（△A=A0-A）与不同超声时间提取的关系作图，如图3所示。不同超声时间在40 min时出现拐点，选取40 min为最佳超声时间。

图3 超声时间的选择

2.1.4 超声频率的考察精密称取3份样品333.33 mg于10 mL量瓶中，加入70%乙醇定容，先浸泡30 min，再进行超声处理（100%）40 min，频率分别为45 Hz、80 Hz、100 Hz，过0.45 μm微孔滤膜；分别取不同超声频率提取的续滤液1 mL于100 mL量瓶中，分别用70%乙醇定容；在250 nm处测其吸光度A0；取70%乙醇在250 nm处测其吸光度A。以△A（△A=A0-A）与不同超声频率提取的关系作图，如图4所示。不同超声频率在45 Hz的△A为最高，选取45 Hz为最佳超声频率。

图4 超声频率的选择

2.2 葛明胶囊总黄酮含量的测定

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品1.00 mg，置5 mL量瓶中，用70%乙醇溶液定容，摇匀。

2.2.2 供试品溶液的制备精密称取样品333.33 mg于10 mL量瓶中，加入70%乙醇定容，先浸泡30 min，再进行超声处理（45 Hz，100%） 40 min，过0.45 μm微孔滤膜；取续滤液1 mL于100 mL量瓶中，用70%乙醇定容。

2.2.3 线性关系考察精密吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL葛根素对照品溶液分别置于5个干燥的10 mL量瓶中，用70%乙醇溶液定容，摇匀，在250 nm处测定吸光值，计算得回归方程A=0.0946C-0.0069，R2=0.9998，结果表明在2～10 μg·mL-1线性关系良好。

2.2.4 精密度试验称取样品1份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，重复6次，测定其吸光度值，RSD为0.07%。

2.2.5 稳定性试验称取样品1份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于0、1、2、3、4、5 h测定，结果放置5 h时总黄酮质量分数均未发生明显变化，RSD为0.75%。

2.2.6 重现性试验称取样品6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进行分析测定，RSD为1.48%。

2.2.7 加样回收率试验称取样品9份，分别加入一定量的葛根素对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试液，进样测定，计算回收率，结果见表1。总黄酮的平均回收率为103.03%，RSD为2.45%，表明本方法准确性良好。