新生儿巨细胞病毒感染的临床检测研究

张美娜，赵 虎，李仁哲，唐敏英，吴 琳，詹世淮，王庆华，谭建明

(福州总医院泌尿外科，福州 350025)

巨细胞病毒 (CMV)是新生儿产后感染最常见的病原微生物之一，可导致新生儿出现黄疸、耳聋、智力障碍等症状，严重威胁新生儿的身心健康[1]。因CMV感染通常呈无症状的感染，隐密性较强，早期确诊CMV对新生儿的治疗显得尤为重要[2-4]。本研究选取本院收治的662例疑似感染CMV的新生儿作为研究对象，对其进行CMV核酸检测分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性研究2015年1 月至2016 年6 月来本院就诊疑似感染CMV的新生儿患者662例。年龄0～120 d，中位年龄76 d。根据新生儿的患病情况，收集其尿液或血液标本，进行后续的核酸定量检测。根据收集标本类型的不同分为尿液组(337例)、血液组(325例)。

1.2仪器与试剂 CMV DNA定量检测试剂为广州达安基因股份有限公司人CMV核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光法)，所用扩增仪器为ABI 7500实时荧光定量PCR仪(美国 Life Technologies)。

1.3方法 严格按照说明书操作和PCR实验条件具体要求。PCR扩增仪扩增，根据CMV不同拷贝数的标准品(1.0×104、1.0×105、1.0×106、1.0×107)、阴性质控品及待检样本的扩增曲线，观察得出结果。

2 结 果

2.1CMV DNA PCR扩增检测结果 4个标准品(1.0×104、1.0×105、1.0×106、1.0×107)、代表性阳性样品(DNA拷贝数5.2×105，黑箭头所指)以及阴性对照的扩增曲线如图1所示，证明CMV PCR扩增结果准确、可信。

图1 CMV DNA PCR扩增曲线图(箭头所指为阳性标本)

2.2新生儿不同标本CMV阳性检出率 以CMV DNA拷贝数≥1×103判读为阳性，结果发现，662例新生儿检出CMV 49例，阳性检出率为7.40%,其中尿液标本阳性检出率为8.9%(30/ 337),血液标本阳性检出率为5.85%(19/ 325)，见表1。

2.3新生儿CMV阳性感染标本的拷贝数分布 两组新生儿CMV阳性感染标本的拷贝数分布均呈右偏态分布，数据大多集中在103～105，尤以103～104段的人数最多。尿液组和血液组阳性标本CMV拷贝数的几何均数分别为3.19×104、4.75×103，两组间差异有统计学意义(P=0.024 6)，见图2。

表1 新生儿不同标本类型CMV感染阳性检出率的比较

图2 新生儿CMV阳性感染标本DNA拷贝数分布

3 讨 论

CMV是新生儿产后感染最常见的病原微生物之一，可在尿液、血液等广泛传播[5]。PCR扩增检测是诊断CMV 的标准方法之一[6]。然而在临床检测中CMV的检出率始终不高。本研究拟采集新生儿尿液、血液等不同来源标本，采用实时荧光定量PCR检测尿液、血液样本中CMV的DNA拷贝数，探索最佳的标本选择途径，从而提高新生儿CMV的正确检出率。

CMV最容易侵犯的部位是肾脏、肝胆系统的管道上皮细胞，在肾小管上皮细胞内大量复制后经尿液排出，因此尿液中CMV DNA拷贝数较高[7]。沈丹等[8]在确诊或高度怀疑为CMV性肝炎的儿童患者中，应用实时荧光定量PCR方法，检测患者血清、外周血单个核细胞及3次混合尿3种标本CMV DNA的水平，结果发现尿液标本的CMV检出率最高，定量检测结果最高。钟瑞芬等[9]采用实时荧光定量PCR和IgM抗体化学发光法两种方法分别检测新生儿尿液和血液中的CMV，结果发现尿液标本检测结果与上述结果类似。本研究采用新生儿尿液和血液标本，发现尿液CMV检出率较血液高，且拷贝数的几何均数为3.19×104，显著高于血液中CMV的拷贝数(4.75×103)一个数量级。由于新生儿的特殊性，尿液较血液更易于采集，有利于后续治疗连续采集、检测。因此，尿液是新生儿检测CMV DNA的最佳标本选择。

早期使用更昔洛韦对免疫能力较强的新生儿进行抗CMV病毒治疗，可在很大程度上减轻症状、降低病死率。前期研究结果显示，CMV在感染机体后通常呈潜伏期感染，90%以上的新生儿先天性感染无任何临床症状[10]。与此同时，CMV DNA检测是确诊新生儿感染CMV的最可靠方法。因此CMV DNA检测结果的假阴性会极大地延误新生儿患者的治疗时机。本研究发现，尿液标本中CMV的阳性检出率较血液标本高，且其平均拷贝数也较血液标本高出一个数量级，可在一定程度上降低CMV检出假阴性的发生，进而有效地对临床是否采取抗病毒治疗给予指导意见。

综上所述，新生儿CMV感染的阳性检出率与标本的采集途径存在一定的相关性，尿液是新生儿CMV DNA检测的最佳标本。采用尿液检测新生儿CMV的感染状况，对于临床指导CMV的抗病毒治疗，提高新生儿CMV感染的预后有很好的积极意义。