蒲黄颗粒抗小鼠前列腺增生机制的实验研究*

朱成彬，秦兆江，张克辉，周 曙

(广东省佛山市中医院男科 528000)

良性前列腺增生(BPH)系男子老年性疾病，主要症状为夜尿频多、排尿困难，甚者尿潴留、肾功能损害。目前中国进入老龄化社会，且前列腺增生有年轻化趋势，其发病率逐年增加，BPH的发病机制除年龄、性激素等因素以外，近年来有学者发现，该病发生还与肥胖、糖尿病、高脂血症等代谢综合征密切相关[1-2]。中药蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲、东方香蒲的干燥花粉，广泛应用于BPH并取得良好的临床疗效，本研究观察蒲黄颗粒对小鼠前列腺组织Ki67、CD34抗原表达的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1材料 NIH雄性小鼠60只，SPF级，体质量16～21 g，平均(20±4)g，由本院骨伤科研究所动物中心提供。

1.2药物与试剂 蒲黄颗粒由本院中药颗粒药房提供；丙酸睾酮注射液由广州明兴制药公司提供；舍尼通(普适泰375 mg)由南京美瑞制药有限公司提供。免疫组织化学法所用试剂由美国Zymed公司生产。

1.3方法

1.3.1分组与造模 将60只小鼠分为正常组、造模组、舍尼通组、蒲黄组，各15只；除正常组外，连续21 d皮下注射丙酸睾丸素5 mg/kg制作BPH模型[3]。造模24 h后舍尼通组用舍尼通75 mg·kg-1·d-1灌胃3 d，蒲黄组以蒲黄颗粒30 mg·kg-1·d-1灌胃30 d。

1.3.2病理检查 取前列腺腹叶做常规石蜡切片固定于10%福尔马林液中,HE染色,观察前列腺组织间质炎症、水肿、充血和纤维组织增生等。

1.3.3免疫组织化学 先经脱蜡、水化、抗原修复后，其他步骤按EliVisionTMplus两步法提供的试剂盒进行。电子光镜观察染色结果。PBS替代一抗作为阴性对照，已知的阳性片作为阳性对照。

1.3.4Ki67阳性的判定 阳性标志为细胞核上有黄至棕色颗粒着色,使用Ki67标记指数法[4](Ki67 LI)。染色结果根据阳性细胞数分为Ki67 LI>5%、1%～5%、<1% 3个等级。

1.3.5CD34抗体染色和微血管密度(MVD)计数标准 CD34阳性定位于细胞质，呈黄至棕黄色。在血管致密区计算新生小血管数目，取5个高倍视野平均值为MVD值[5]。

2 结 果

2.1病理切片观察 正常组光镜下前列腺组织结构清楚,腺体排列整齐,腺体上皮呈单层排列,腺腔内充满了嗜伊红的分泌物。造模组镜下腺体增生活跃,小叶增生，排列紧密;细胞数量增加排列呈复层或假复层,多属腺体上皮细胞向腺腔内呈乳头状突起而细长，腺腔内嗜伊红的分泌物显著减少。蒲黄组与舍尼通组各种病理现象较造模组明显改善，上皮增生不明显,乳头状突起较少,细胞呈低柱状或扁平状,排列整齐,间质、血管充血较轻。

表1 各组小鼠前列腺组织Ki67 LI、CD34抗原表达水平

2.2小鼠前列腺组织Ki67、CD34的表达 正常组前列腺组织中Ki67无表达;造模组Ki67 LI水平显著高于正常组(P<0.05)；舍尼通组、蒲黄组Ki67 LI水平均显著低于造模组(P<0.05)，两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；正常组和造模组前列腺组织中均有CD34表达，舍尼通组、蒲黄组CD34表达均显著低于造模组(P<0.05)，组间比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

3 讨 论

前列腺湿质量为评价治疗BPH一个很重要的指标。本课题前期实验结果表明,舍尼通组及蒲黄组的小鼠前列腺的湿质量及血清睾酮水平，与造模组比较明显降低，表明蒲黄颗粒对丙酸睾酮所致的小鼠前列腺增生具有一定的抑制作用，提示蒲黄治疗前列腺增生具有较好疗效，并能降低血清睾酮水平，为临床更好的使用提供了证据[6]。

Ki67抗原作为增殖细胞中表达的一种核抗原是现今最好的细胞增生标志物[7]。研究发现，Ki67不在正常前列腺组织中表达，而在造模组中明显增高，舍尼通组及蒲黄组中又显著降低(P<0.05)，表明蒲黄颗粒能降低前列腺组织细胞的增生和增殖活性。

CD34作为目前较敏感的血管标记物，与微小血管形成密切相关，广泛表达血管内皮细胞、胚胎成纤维细胞和某些神经组织的细胞，其色泽清晰，便于血管密度的计数[8-9]。本实验发现造模组的CD34表达明显高于正常组，也高于舍尼通组及蒲黄组，提示蒲黄颗粒能够通过减少血管内皮细胞聚集、降低血管密度从而抗前列腺组织增生。蒲黄颗粒和舍尼通均可使Ki67、CD34表达降低，蒲黄颗粒的抗增生作用机制与舍尼通相似。

中医认为BPH属“癃闭、癥瘕”范畴，肾虚为本，瘀阻为标，肾虚膀胱气化无力，瘀血阻滞，为癃为闭。治宜虚实兼顾，标本同治。蒲黄味甘性平，主心腹膀胱寒热，利小便，止血，消瘀血，久服轻身益气力。《名医论》：“香蒲生于水中，色黄味甘，禀水土之专精，而调和其气血。主治心腹膀胱寒热，利小便者，禀土气之专精，通调水道，则心腹膀胱之寒热俱从小便出，而气机调和矣。止血、消瘀血者，禀水气之专精，生其肝木，则止新血，消瘀血，而血脉调和矣。久服则水气充足，土气有余，故轻身益气力，延年神仙”。《本草汇言》“蒲黄性凉而利洁膀胱之原,清小肠之气,故小便不通,前人所必用也。至于治血之方,血之上者可清,血之下者可利,血之滞者可行,血之行者可止。”蒲黄功兼活血与止血，又能利水且行血，为血水同病之要药。治疗BPH，切中病机，补虚不恋邪、祛瘀不伤正。

现代药理研究认为蒲黄具有镇痛、抗炎、抗低压低氧、抗微生物、促进血液循环、降低血脂、防止动脉硬化、增强免疫力等作用；老年BPH患者常伴心脑血管及代谢性疾病，临床应用蒲黄治

疗BPH更为适合[10]。同时工艺简单，价格低廉，使用安全方便。本研究初探蒲黄抗BPH作用机制，如能推广临床，具有显著的社会效益。