消栓通络饮对深静脉血栓模型大鼠凝血指标及血栓干湿质量的影响

张 波 穆世民

（河南省洛阳正骨医院，河南省骨科医院，河南 洛阳 471000）

深静脉血栓 （DVT）是血液在深静脉腔内异常凝结，阻塞静脉腔隙，引起静脉回流受阻，属静脉回流障碍性疾病。DVT是临床较为常见的一种血管疾患，常见于下肢骨科手术的围手术期。研究显示，择期骨科手术深静脉血栓的发生率为52%，人工全髋关节、全膝关节置换术为50%~60%［1］，脊髓损伤引起瘫痪者为75%~80%［2-3］。本病起病隐匿，发病急骤，有 20%～25%的患者两年内演变成为深静脉血栓后综合征，少数患者可因栓塞脱落引起肺栓塞，是骨科患者围手术期死亡的主要原因之一［4-7］。目前DVT主要以中西医结合治疗为主，尽管中医药治疗DVT不良反应少、安全性高［6］，但是中医药治疗本病的相关机制仍需进一步研究。消栓通络饮是本院预防和治疗DVT的临床经验方。本研究采用消栓通络饮干预DVT模型大鼠，探讨其对多项凝血指标及血栓干湿质量的影响。以期为消栓通络饮防治下肢DVT提供实验基础和理论依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 60只SPF级SD大鼠，体质量（250±10）g，雌雄不限，购自河南省实验动物研究中心，许可证号：SCXK（豫）2017-0001。按清洁标准分笼饲养，湿度50%~70%，温度24~26℃，保持鼠笼通风，保持光照适宜，按时清理打扫鼠笼，自由进食水。适应性喂养1周后，再进行分组。本实验对动物的处理方法符合《关于善待实验动物的指导性意见》［8］。

1.2 试剂与仪器 台式离心机 （上海安亭科学仪器厂，型号 TGL-16c），酶标仪（美国 Bio-rad），凝血仪（美国库尔特公司），大鼠D-二聚体（D-dimer）定量测定ELISA试剂盒（上海逸峰生物科技有限公司），ES-C600型精密电子天平秤（日本SHIMADZU公司），无水石膏绷带、显微手术器械、EDTA管等均由河南省洛阳正骨医院（河南省骨科医院）提供。消栓通络饮，组成：黄芪30 g，当归 20 g，丹参 20 g，川芎 12 g，赤芍 12 g，红花6 g，白芍 12 g，生地黄 12 g，续断 12 g，牛膝 12 g，威灵仙 9 g，茯苓 9 g，桂枝 6 g，白术 9 g，泽泻 9 g，猪苓 9 g，柴胡9 g，陈皮9 g，枳壳9 g，甘草6 g。统一由河南省洛阳正骨医院（河南省骨科医院）制剂室煎煮浓缩。低分子肝素钙（万脉舒，0.4 mL：4100AXaIU，河北常山生化药业股份有限公司，国药准字H20063910）。

1.3 分组与造模 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物对照组、消栓通络饮组各15只，除空白组15只大鼠外，其余3组共45只大鼠均参照文献复制下肢DVT动物模型。大鼠适应性喂养1周后，参照赵学凌［9］实验动物造模方法：1%戊巴比妥纳腹腔麻醉（1 mL/kg），麻醉生效后，大鼠取仰卧位，双下肢屈髋屈膝固定，采用髓内钉打拨器分别击打大鼠双侧近端外侧（大转子至大转子下1 cm），造成股骨骨折，行髋人字石膏固定，7 d后取标本进行检测。

1.4 给药方法 参照《药理实验方法学》［10］，给予大鼠等效剂量，消栓通络饮组每只按24.36 g/（kg·d）生药给药，按1 mL/100 g换算，每只2.5 mL灌胃（每毫升含生药2.436 g），每日2次；阳性药物对照组低分子肝素钙用量按 366.43 IU/（kg·d）换算，每只 91.61 IU/d 皮下注射；空白组、模型组均以生理盐水2.5 mL/d灌胃。各组治疗开始时间均为造模前7 d至造模后7 d，持续灌胃14 d。

1.5 标本采集与检测 大鼠空腹8 h后，抽取腹腔静脉血液1～2 mL，置于冷水浴冷却的肝素抗凝管中，混匀，4℃冷藏2 h，-20℃或更低温度保存，用于大鼠凝血指标检测；同时，取大鼠股静脉血栓，用于测量血栓干湿质量。大鼠静脉血采用凝血仪及原装配套试剂检测活化部分凝血活酶时间 （APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清D-dimer水平；血栓干湿质量均采用精密电子天平秤量取。

1.6 统计学处理 应用SPSS22.0统计软件。计量资料以（±s）表示，计量资料满足正态性及方差齐性，采用单因素方差分析，否则采用秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠一般情况比较 空白组大鼠精神状态佳，活动自如，饮食正常。其余3组大鼠造模前7 d给予相应治疗后，无明显异常，饮食及活动正常；造模后精神欠佳，下肢肿胀，患肢活动减少。造模过程中，模型组、阳性药物对照组各有1只大鼠麻醉后死亡，最终，模型组模型复制成功14只，阳性药物对照组12只，消栓通络饮组13只。造模后各组继续给予7 d干预，与模型组比较，阳性药物对照组、消栓通络饮组大鼠一般情况好转，食欲增加，患肢血运改善。说明低分子肝素钙及消栓通络饮能改善DVT大鼠模型的一般情况和患肢血循状态。

2.2 各组大鼠凝血指标比较 见表1。与空白组比较，模型组 APTT、PT、TT 均不同程度降低，FIB、D-dimer均显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.05），说明造模后大鼠体内抗凝与凝血系统平衡机制发生了改变，处于高凝状态，下肢创伤部位容易发生静脉血栓；与模型组比较，阳性药物对照组、消栓通络饮组APTT、PT、TT有所回升，FIB、D-dimer均降低，差异具有统计学意义（P＜0.05），说明低分子肝素钙及消栓通络饮均能起到抗凝的作用；与阳性药物对照组比较，消栓通络饮组FIB、D-dimer均低于阳性药物对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），而 APTT、PT、TT 等凝血指标无显著差别（P＞0.05），说明消栓通络饮对 FIB、D-Dimer的作用比低分子肝素钙显著。

表1 各组大鼠凝血指标比较（±s）

表1 各组大鼠凝血指标比较（±s）

与空白组比较，▲P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05；与阳性药物对照组比较，*P＜0.05。 下同

组 别 n APTT（s） PT（s） TT（s）FIB（g/L） D-dimer（μg/L）空白组 15模型组 14阳性药物对照组 12 23.29±0.74 9.71±0.53 19.78±0.71 18.61±0.38▲ 7.43±0.33▲ 15.13±0.41▲20.97±0.78▲△ 8.44±0.67▲△ 17.96±068▲△2.52±0.21 39.39±1.21 4.41±0.31▲ 120.12±1.34▲3.31±0.27▲△ 64.32±3.46▲△消栓通络饮组 1321.24±0.81▲△ 8.19±0.52▲△ 18.25±0.61▲△2.79±0.32△*55.49±4.34▲△*

2.3 各组大鼠血栓质量比较 见表2。与模型组比较，阳性药物对照组、消栓通络饮组血栓干质量、湿质量显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05），说明低分子肝素钙及消栓通络饮均能预防深静脉血栓的形成；与阳性药物对照组比较，消栓通络饮组血栓干质量、湿质量差异无统计学意义（P＜0.05），说明低分子肝素钙及消栓通络饮在预防血栓形成方面无明显差别。

表2 各组大鼠静脉血栓干、湿质量比较（mg，±s）

表2 各组大鼠静脉血栓干、湿质量比较（mg，±s）

组 别 n 血栓湿质量 血栓干质量模型组 14 13.09±1.35 2.81±0.51阳性药物对照组 12 9.89±0.97△ 1.91±0.34△消栓通络饮组 13 10.01±1.04△ 1.95±0.42△

3 讨 论

DVT形成是血液在深静脉内不正常地凝结，属于静脉回流障碍性疾病，常见于骨科大手术之后，是肺栓塞栓子的主要来源。Virchow［11］认为深静脉血栓形成的因素主要包括3个方面：静脉血流滞缓、静脉壁损伤和血液高凝状态。脊柱骨盆损伤、下肢骨折、人工关节置换等骨科大手术易诱发静脉血栓形成［12］。DVT的防治措施包括手术、溶栓、介入、超声以及中医药干预等治疗方法。研究显示，手术治疗与药物溶栓疗效无显著差异［13］，故不建议将手术作为DVT的首选治疗方法。尽管药物溶栓、抗凝是治疗DVT的常用方法，但溶栓存在出血的风险，尤其是对于脑梗死等病史的患者，溶栓的风险很大。

中医学将DVT归属“股肿”“脉痹”等疾病范畴，主要由外伤、手术等致气血瘀阻脉络，静脉归心之血回流不畅，以致聚而为湿，流注下肢发为肿胀，气滞、湿滞日久，易于化热，故本病的病机特点为瘀血阻络，湿热相搏，瘀血为主要的病理产物［14］。此外，气能行血、生血，血能化气、载气，因此笔者认为，气血亏虚也是DVT形成和发展的重要内在因素。因此在治疗上，应以益气、活血、化瘀为主则，利湿消肿为辅。本研究采用消栓通络饮，方中重用黄芪、当归、丹参为君药，黄芪甘温益气，当归补血活血，丹参活血祛瘀，重用三者配伍，体现了益气、活血、化瘀的主要治则；川芎行气开郁，活血止痛，与当归配伍，加强其活血之功效，赤芍凉血散瘀止痛，红花活血散瘀止痛，三者配伍共同加强君药行气、活血之功效，为防止诸药辛散之太过，配伍白芍、生地黄益精敛阴，同时伍川牛膝、川续断补益肝肾以固本，牛膝尚能散瘀止痛，续断亦能活血续筋，以上药物共为臣药，增强君药活血化瘀之功效，同时益精敛阴，防止辛散太过。因本病病机除瘀血阻络外，尚有湿滞水肿，因此佐以威灵仙及五苓散，威灵仙散风祛湿、行气通络，五苓散利水渗湿，温阳化气，在利水祛湿的同时，增加了主方益气行气之功效，柴胡疏肝解郁，陈皮理气燥湿，枳壳破气消积，共奏行气理气之功，也增强了威灵仙及五苓散利湿的功效；甘草为使调和诸药。全方配伍严谨，共奏益气活血化瘀、利水消肿止痛之功效。

既往研究表明，临床诊断考虑DVT时，外源性凝血指标PT、内源性凝血指标APTT的测定值与正常值比较可缩短，FIB、D-dimer测定值可升高［15］，FIB 增高提示有血栓形成的风险，D-dimer升高提示体内高凝状态并纤溶亢进，其对血栓性疾病的早期诊断极具价值［16］。本研究实验结果表明，空白组与模型组比较，APTT、PT、TT 均不同程度降低，FIB、D-dimer均显著升高（P＜0.05），说明造模后大鼠体内抗凝与凝血系统处于高凝状态，容易发生静脉血栓；两个治疗组与模型组比较，APTT、PT、TT 均有所回升，FIB、D-dimer均降低 （P＜0.05），说明低分子肝素钙及消栓通络饮均能抗凝，对深静脉血栓起到预防的作用；但两个治疗组比较，消栓通络饮组FIB、D-dimer均低于阳性药物对照组 （P＜0.05）， 而 APTT、PT、TT等凝血指标无显著差别 （P＞0.05），说明消栓通络饮对FIB、D-dimer的作用比低分子肝素钙显著。血栓质量的比较，则直观地反映了两个治疗组对DVT的治疗作用，两组治疗后，血栓的质量均降低，但组间无显著差别（P＞0.05）。

通过本研究，我们发现消栓通络饮对DVT大鼠具有预防和治疗作用，其可能通过调节APTT、PT、TT、FIB、D-dimer等凝血指标起到抗凝作用，且其在降低FIB、D-dimer方面可能强于低分子肝素钙，这为其预防下肢术后DVT形成的作用奠定了实验和理论基础。