高效液相色谱-质谱测定豆芽中4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤残留

◎ 李玥颖

（谱尼测试科技（天津）有限公司，天津 300392）

目前，市场上销售的豆芽的下胚轴多粗壮、白嫩，增加了豆芽的美观，但是这种豆芽的危害比较大。其中，豆芽中的4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤是导致“毒豆芽”事件的主要成分，而且4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤的残留量没有国家标准，只有地方标准，在豆芽中的残留量不能超过0.001 mg/kg。本研究以市场上购买的绿豆芽为样品，对豆芽中的4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤残留进行测定。

1 材料与方法

1.1 试验样品

绿豆芽，20 kg，购自北京市菜市场中5个不同的商家。

1.2 仪器和试剂

超高效液相色谱-串联质谱仪，美国Waters公司，Waters BEH-C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）。

4-氯苯氧乙酸钠（纯度为99%）和6-苄基腺嘌呤（纯度为99%），Sigma（美国）公司；甲醇，市售分析纯和色谱纯；乙醚、盐酸、氯化钠、冰醋酸、氢氧化钠（NaoH），市售分析纯；水，应符合GB/T6682规定的二级水。

4-氯苯氧乙酸钠标准工作液，用甲醇逐级稀释10 μg/mL 4-氯苯氧乙酸钠标准中间液，得到10、20、50、100、200 μg/L等适宜浓度的标准工作液。

6-苄基腺嘌呤标准工作液，用甲醇逐级稀释10 μg/mL 6-苄基腺嘌呤标准中间液，得到5、10、25、50、100 ng/mL等适宜浓度的标准工作液。固相萃取柱：ODS-C18（500 mg/6 mL），预先用5 mL甲醇洗脱活化，再用5 mL水洗去残留甲醇，保持萃取柱润湿状态待用[1]。

1.3 样品中的4-氯苯氧乙酸钠提取及净化方法

称取粉碎后的样品10 g，用0.01 mol/L NaOH超声提取，离心取上清液，再次用NaOH超声提取，离心取上清液用NaOH定容，加入盐酸、乙醚萃取酸，用氯化钠酸性溶液洗涤，弃水层，乙醚层旋转蒸干，甲醇定容，HPLC-MS测定。

1.4 样品中的6-苄基腺嘌呤提取及净化方法

称取粉碎后的样品10 g，采用100 mL甲醇+水的浓度体积（50/50）酸化甲醇水超声提取，离心取上清液，再次酸化甲醇超声提取，离心取上清液悬蒸水相剩余约10 mL，水相经C18净化活化（5 mL甲醇、5 mL水），淋洗，洗脱，洗脱液用N2吹干，甲醇定容，HPLC-MS 测定[2]。

1.5 HPLC-MS条件

1.5.1 4-氯苯氧乙酸钠的色谱条件

色谱柱，Waters BEH-C18，2.1 mm×50 mm，1.7 μm；流动相，A 100%甲醇，B 0.1%甲酸水溶液；梯度洗脱，洗脱程序见表1。流速，0.25 mL/min；柱温，30 ℃；进样量，10 μl。

表1 流动相洗脱程序表

1.5.2 4-氯苯氧乙酸钠的质谱条件

离子源，ESI；监测方式，MRM多反应监测；离子源温度，110 ℃；去溶剂温度，350 ℃；离子对、锥孔电压、碰撞能量。具体见表2。

表2 离子对、锥孔电压、碰撞能量表

1.5.3 6-苄基腺嘌呤的色谱条件

色谱柱：Waters BEH-C18，2.1 mm×50 mm，1.7 μm。

流动相，A 100%甲醇，B 0.1%甲酸水溶液；梯度洗脱，洗脱程序见表3。流速，0.25 mL/min；柱温，30 ℃；进样量，10 μL。

表3 流动相洗脱程序表

离子源，ESI；监测方式，MRM多反应监测；离子源温度，110 ℃；去溶剂温度，350 ℃；离子对、锥孔电压、碰撞能量，具体见表4。

表4 离子对、锥孔电压、碰撞能量表

2 结果与讨论

2.1 线性回归方程、线性范围和检出限

由表5可知，在线性范围之内，各种4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的峰面积与含量之间有良好的线性关系。此外，从最低检出限的数据也可以看出，这种方法具有较高的灵敏度，可对样品中的4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤进行定量分析。

表5 4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的回归方程、线性范围和最低检测限表

2.2 4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的精密度

重复吸取4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤溶液各10 μL（n=5），按4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤测定方法进行进样分析，根据峰面积计算各种4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤检测结果的相对标准偏差（RSD），结果分别为0.42%和0.47%，说明方法的精密度良好。

2.3 加标回收率

称取3份样品，按4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的测定方法进行操作，统计计算3份样品中4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的含量。另取同样重量的3份样品加入100 μL的4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤标液，按同样方法测定加标后的4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的含量。分别统计计算平均加标回收率，结果见表6。4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的平均加标回收率为99.8%和102.4%，说明方法具有良好的准确性[3]。

表6 4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的加标回收率表

2.4 5个样品中的4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的结果与讨论

本研究采用HPLC-MS方法对5个绿豆芽样品中的4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤进行测定，具体见表7。这5个商家的绿豆芽均存在4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤残留，残留量从0.05～0.14 mg/kg。

表7 5个样品中4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的残留量表（mg/kg）

3 结论

4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤检测方法最低检出限分别为0.02、0.04 ng，线性相关系数分别为0.999 8、0.999 9，回收率为99.8%、102.4%。采集的5个样品中均存在4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤残留，残留量未0.05～0.14 mg/kg。4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的测定适合豆芽的色谱质谱条件，HPLC-MS的灵敏性和准确性比较高，可以用于豆芽中的4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤残留量的测定。