蒲地蓝消炎口服液黄芩苷与菊苣酸含量测定方法的优化

苏万福 杨学芳 王琨

【摘 要】 目的：建立可以同时检测蒲地蓝消炎口服液中黄芩苷与菊苣酸含量的分析方法，降低分析时间、提高检测效率。方法：采用Agilent Zorbax SB-Pheny1（75 mm×4.6 mm，3.5μm）色谱柱，流动相为水-乙腈-甲醇-磷酸（75∶15∶10∶0.2），柱温为40℃，检测波长为326nm，流速梯度洗脱。结果：黄芩苷与菊苣酸分离度良好，单次分析时间为23min，两组分分别在90.58～1449.3μg、5.475～54.75μg范围内线性关系良好（黄芩苷r=0.9999、菊苣酸r=0.9998）；黄芩苷与菊苣酸的平均回收率（n=6）分别为99.72%、99.38%。结论：该方法快速、准确，适用于蒲地蓝消炎口服液中黄芩苷与菊苣酸的检测。

【关键词】 蒲地蓝消炎口服液；黄芩苷；菊苣酸

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）07-0014-03

Abstract：Objective To establisha method for determinating the content of baicalin and cichoric acid simultaneously in Pudilan Xiaoyan oral liquid， thus reducing the detection time and improving the detection efficiency.Methods The analysis was carried out on Agilent Zorbax SB-Pheny1 （75mm×4.6mm， 3.5μm） with water-acetonitrile-methanol-phosphoric acid （75∶15∶10∶0.2） as the mobile phase at the column temperature of 40℃，and the detection wavelength was 326nm， The flow rate wasgradient elution.Results Good separation for baicalin and cichoric acid were achieved， and single analysis time was 23min. The linear calibration was found for baicalin within the range of 90.58μg to 1449.3μg（r=0.9999）and cichoric acid within the range of 5.475μg to 54.75μg （r=0.9998）.The average recovery of baicalin and cichoric acid were 99.72% and 99.38% （n=6）， respectively.Conclusion The developed method is rapid and accurate，and suitable for the content determination of baicalin and cichoric acid in Pudilan Xiaoyan oral liquid.

Keywords：Pudilan Xiaoyan Oral Liquid； Baicalin； Cichoric Acid

蒲地藍消炎口服液由蒲公英、苦地丁、板蓝根、黄芩等四味中药按相应比例配伍，经过现代提取工艺提取并配制而成的纯中药口服制剂，具有清热解毒，消肿利咽的功效，主要用于疖肿、腮腺炎、咽炎、扁桃体炎的治疗[1-2]。研究表明，蒲地蓝消炎口服液对小儿手足口病[3-4]、上呼吸道感染[5-6]也具有良好的临床治疗效果，有“天然抗生素”的美称。

黄芩苷为黄芩中的主要有效成分，具有抗菌、抗病毒、清除氧自由基、解热、镇静、调节免疫等作用[7-8]；菊苣酸为方中君药蒲公英中的一种酚酸类化合物，具有抗菌、抗病毒、提高免疫力、抗炎、抗氧化等作用[9-11]。2015年版《中国药典》中分别采用两种方法对产品中的黄芩苷、菊苣酸的含量进行了测定，该方法由于检测耗时较长，不利于生产过程中对产品进行质量控制，研究欲建立一种同时测定黄芩苷和菊苣酸含量的测定方法，以缩短中间体检测时间，提高检测效率。

1 仪器与材料

1.1 仪器 20AT型液相色谱仪（日本岛津）；XS205型电子分析天平（Mettler）。

1.2 材料 黄芩苷对照品（批号：110715-201016，含量以94%计）、菊苣酸对照品（批号：111752-200902，含量以99.9%计）均购于中国食品药品检定研究院；蒲地蓝消炎口服液（济川药业集团有限公司）；乙腈、甲醇均为色谱纯，磷酸为分析纯，均购于国药集团化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品48.18mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为黄芩苷储配液；精密量取黄芩苷储配液8mL、4mL、2mL、1mL、0.5mL，分别置10mL量瓶中，用甲醇依次稀释成不同浓度的黄芩苷系列溶液，备用。精密称取菊苣酸对照品13.7mg，置100mL量瓶中，加乙腈-水（20∶80）至刻度，摇匀，作为菊苣酸储配液；精密量取菊苣酸储配液10mL、7.5mL、4mL、2mL、1mL，分别置25mL量瓶中，用乙腈-水（20∶80）依次稀释成不同浓度的菊苣酸系列溶液，备用。

2.1.2 供试品溶液的制备 精密量取蒲地蓝消炎口服液5mL，置50mL量瓶中，加乙腈-水（20∶80）稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 色谱条件 色谱柱：Agilent SB-Pheny1（75mm×4.6mm，3.5μm）；流动相：水-乙腈-甲醇-磷酸（75∶15∶10∶0.2）；柱温：40℃；检测波长：326nm；进样量：10μL；流速为梯度洗脱见表1。

2.3 分离度试验 精密量取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。菊苣酸、黄芩苷出峰时间及菊苣酸峰、黄芩苷峰与附近峰的分离度，典型色谱图如图1所示。菊苣酸出峰时间为4.468min，与附近峰分离度为2.23；黄芩苷出峰时间为8.241min，与附近峰分离度为1.94。

2.4 线性关系考察 分别精密吸取“2.1.1”项下黄芩苷、菊苣酸不同浓度的系列溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图。以浓度对峰面积作图，黄芩苷、菊苣酸回归方程分别为：Y黄芩苷=17463X+22877（r=0.9999），Y菊苣酸=39724X+15518（r=0.9998），黄芩苷在90.58～1449.3μg范围内，菊苣酸在5.475～54.75μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 取同一批样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项色谱条件连续进样6次，记录峰面积，结果黄芩苷、菊苣酸峰面积的RSD分别为0.15%、0.14%，表明仪器精密度良好。

2.6 溶液稳定性试验 取同一批样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别于0、1.5、3、6、9、12、18、24h按“2.2”项色谱条件测定，记录峰面积。结果黄芩苷、菊苣酸峰面积的RSD分别为0.94%、0.84%。表明供试品溶液在24h内较稳定。

2.7 重复性试验 取同一批样品，按“2.1.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别按“2.2”项色谱条件进行测定。结果黄芩苷、菊苣酸的平均含量分别为10.68mg·mL-1、0.269mg·mL-1，以含量结果计算RSD（n=6）分别为0.96%和1.1%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密量取已知含量的蒲地蓝消炎口服液2.5mL，共6份，置50mL量瓶中，分别加入黄芩苷对照品约26.7mg、菊苣酸对照品储备液（0.137mg/mL）5mL，按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进行分析，计算回收率。结果黄芩苷、菊苣酸的平均回收率分别为99.72%、99.38%，RSD（n=6）分别为0.92%、0.99%。

2.9 方法对比 分别按照2015版《中国药典》蒲地蓝消炎口服液中蒲公英（菊苣酸）、黄芩（黄芩苷）检测方法、以及“2.1、2.2”项下分析方法对6批蒲地蓝消炎口服液中蒲公英（菊苣酸）、黄芩（黄芩苷）含量进行检测，结果见表2。

3 讨论

分别采用紫外-可见分光光度计及二极管阵列检测器在210～400nm分析對照品和供试品溶液，发现在326nm处菊苣酸有最大吸收，而黄芩苷的两个最大吸收峰分别为278nm和315nm，由于黄芩苷在样品中含量较高，而菊苣酸在样品中含量偏低，参考相关文献[12-13]，为提高菊苣酸的检测灵敏度，选择了326nm波长处同时测定两种成分的含量。实验结果表明，在326nm处测定黄芩苷与原方法选定的280nm测定结果基本一致。

2015版《中国药典》对于蒲地蓝消炎口服液除了维持原有黄芩（黄芩苷）含量检测指标不变的基础上，增加了蒲地蓝消炎口服液中蒲公英（菊苣酸）含量测定，但菊苣酸药典方法的单针进样分析时间长达65min。在蒲地蓝消炎口服液尤其是中间体（配制液）检测过程中，不计对照品，单批次4针检测时间为260min，耗时较长，在一定程度上增加了产品的产出周期，而文中研究方法不仅将检测时间大大缩短，也实现了一种方法同时分析黄芩苷、菊苣酸含量的效果。运用本方法检测蒲地蓝消炎口服液中间体，不仅利于生产安排、消除生产瓶颈、降低分析成本、减少排污，同时也降低了配制液在等待检测过程中的污染风险，提高了产品过程中的控制力度。

综上，研究建立的HPLC法同时测定黄芩苷及菊苣酸的含量，方法可行，适用于蒲地蓝消炎口服液生产过程中的质量控制。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1641-1642.

[2]蒋磊，孟祥松，李军，等.蒲地蓝消炎口服液质量控制方法的研究[J]. 齐鲁药事，2012，31（2）：77-83.

[3]华颖，张申.蒲地蓝消炎口服液治疗手足口病临床观察[J].现代中西医结合杂志，2009，18（32）：3965.

[4]赵慧娅，郝建华， 郭雯.蒲地蓝消炎口服液联合利巴韦林颗粒治疗手足口病[J].河南大学学报，2015，34（2）：139-141.

[5]张小琴，李华， 陈万杰.蒲地蓝消炎口服液治疗急性上呼吸道感染114例[J].工企医刊，2013，26（6）：464-465.

[6]许春香，阎一凡. 蒲地蓝消炎口服液治疗呼吸道感染疗效分析[J].中国基层医药，2014，21（1）：114-115.

[7]雷芳.黄芩苷药理作用研究进展[J].中国药业，2010，19（15）：87-90.

[8]辛文妤，宋俊科，何国荣，等.黄芩素和黄芩苷的药理作用及机制研究进展[J].中国新药杂志，2013，22（6）：647-659.

[9]Robinson W. L-chicoric acid， an inhibitor of HIV integrase， improves on the in vitro anti-HIV effect of zidovudine and a protease inhibitor （AGI350） [J]. Antiviral Res， 1998， 9（2）： 101-106.

[10]闫晓慧，谈锋. 3种松果菊属植物的鉴别、活性成分及生物技术研究进展[J].中草药， 2006， 37（2）： 300-304.

[11]King P J， Robinson W E. Resistance to the anti-human immunodeficiency virus typel （HIV-1） compound， L-chicoric acid results from a single mutation at amimo acid 140 of integrase [J]. J Virol， 1998（72）： 8420-8426.

[12]张冬梅，桑媛，刘冰. HPLC法同时测定双黄连注射液中绿原酸及黄芩苷含量[J]. 药物分析杂志，2005，25（10） ：1279-1280.

[13]刘刚，王海涛，赵淼，等. HPLC法测定双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷的含量[J]. 解放军药学学报，2007，23（4） ：299-301.

（收稿日期：2018-02-22 编辑：程鹏飞）