基于HPLC指纹图谱的蒲地蓝消炎口服液质量控制研究

2018-09-17刘小莉蒋金来

卫生职业教育 2018年17期

刘小莉，蒋金来

（重庆市医药学校，重庆 401228）

蒲地蓝消炎口服液由蒲公英、苦地丁、板蓝根和黄芩四味道地药材经现代工艺提取有效成分精制而成，具有清热解毒、抗炎消肿的功效，集抗炎、抗菌、抗病毒、解热和促免疫五大药理作用于一体，常用于治疗疖肿、腮腺炎、扁桃体炎等各类炎症。方中有效成分众多，其中含量较高的活性成分为黄芩苷[1]，也是主要质控指标成分。本文采用指纹图谱结合多种化学计量学数据处理方法[2]，对蒲地蓝消炎口服液进行质量评价与控制[3-6]。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Waters 2695高效液相色谱仪（Waters e2695分离单元，Waters 2489 UV，Waters 2998 PDA）；色谱柱 Waters Xbridge C18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）；XS-205型电子分析天平（梅特勒—托利多公司）。

1.2 材料

黄芩苷对照品（批号：110715-201016，中国药品生物制品检定所，纯度：94.0%）；乙腈（色谱纯，HPLC merck，批号：17289-30409）；磷酸（分析纯，国药集团化学试剂公司）；水（杭州娃哈哈公司）；蒲地蓝消炎口服液。

2 方法与结果

2.1 供试品的制备

精密量取本品1 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取5 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，备用。

2.2 标准品溶液的制备

精密称取12.49 mg黄芩苷，至20 ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，得储备液。再取1 ml储备液，置10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得黄芩苷对照品溶液，浓度为58.40 mg/L标准品溶液。

2.3 HPLC指纹图谱方法学考察

2.3.1 色谱条件色谱柱：Waters Xbridge C18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）；流动相：A相为乙腈，B相为0.2%磷酸水溶液；梯度洗脱程序：0～14 min，A相 10%～20%；14～40 min，A相 20%；40～60 min，A相 20%～30%；60～70 min，A 相 30%～40%；70～85 min，A相 40%～70%；85～86 min，A 相 70%～10%；86～100 min，A 相 10%[7-8]；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl；柱温：30℃；检测波长270 nm，参比波长360 nm。

2.3.2 精密度试验取黄芩苷对照品溶液，连续进样6次，各色谱峰相对保留时间和相对峰面积的RSD＜3.0%，表明仪器精密度良好。

重复性试验：精密量取同一样品6份，分别按供试品溶液制备方法制备供试品并测定，计算其共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD，＜3.0%表明该方法重复性良好。

稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在 0、2、4、6、8、10、12、24 h进样，测得各共有峰的相对保留时间和面积RSD均＜3.0%，表明供试品溶液24 h内性质稳定。

2.4 指纹图谱的建立[9-10]

2.4.1 指纹图谱的制备分别精密称取对照品溶液与口服液供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪测定，记录100 min色谱图，即得。

2.4.2 内参比峰的确定测定12批口服液供试品溶液，比较其色谱图，以3号峰黄芩苷峰为参比峰（S），计算8个共有指纹峰的相对保留时间及相对峰面积比值。典型色谱图见图1～3。

由图1～3可以看出，不同批次的口服液化学成分色谱图无明显差异，故对其进行相似度分析和聚类分析。

2.5 结果

2.5.1 不同批次口服液样品的指纹图谱使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）对每个批次样品的指纹图谱进行分析[11-13]，得到对照图谱，如图 1～3。

图1 对照品指纹图谱

图2 体征指纹图谱

图3 1～12号供试液指纹图谱

分别计算每个批次口服液样品与对照图谱的相似度（见表1），相似度值均＞0.990，说明不同批次口服液样品相似度较高且相近。

表1 不同批次口服液样品的相似度比较

2.5.2 指纹图谱的聚类分析本研究采用平均距离关联法作为聚类模式识别方法，取12批蒲地蓝消炎口服液样品的色谱峰面积RA值，计算样品之间的欧氏距离，进行聚类分析，结果见图4。从图4可以看出聚类趋势，阈值最底层12批样品被分为5类，相似度最高，能够较好地各自聚在一起。随着阈值的增大，欧氏距离系数在5～10时，除第三批样品为孤立样品外，其他所有样品聚为一类。聚类趋势与相似度计算结果一致，两种方法的结果得到了相互验证。