某猪场不同生长期猪源大肠杆菌耐药性分析
2018-09-08隆茂俊姚晓慧夏利宁新疆农业大学动物医学学院830052
隆茂俊 姚晓慧 夏利宁（新疆农业大学动物医学学院 830052）
大肠埃希氏菌是一种典型的革兰氏阴性无芽胞直杆菌，大肠杆菌病养殖场中是危害严重的常见病和多发病，其发病率和死亡率位于仔猪疫病之首[1]，给猪场和养殖户带来巨大的经济损失。一些猪场在预防和治疗疾病的过程中盲目用药、超剂量用药，使细菌的耐药率不断攀升，耐药谱不断扩大，尤其是饲料中各种抗生素的添加，耐药性大肠杆菌急剧增加，多重耐药问题更加严重，给大肠杆菌的治疗带来困难，在增加治疗成本的同时也给人类食品安全留下安全隐患。本研究对猪场不同生长期粪源大肠杆菌分离鉴定，分析其耐药性，为该地区猪场大肠杆菌的综合治疗提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
通过肛拭子在健康仔猪直肠采集粪样 （40日龄：100份；60日龄：179份）和妊娠母猪 （100份）；共379份。大肠杆菌标准质控菌为ATCC25922，购自杭州天和微生物试剂有限公司。麦康凯培养基、普通肉汤和Mueller-Hinton（MH）培养基均购自北京奥博星生物技术有限公司。阿莫西林、氨苄西林、头孢噻呋、氟苯尼考、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、庆大霉素、安普霉素、阿米卡星药品均为标准品，购自中国兽药监察所。
1.2 试验方法
参考美国临床实验室标准化委员会 （Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推荐的操作程序，采用琼脂稀释法检测大肠杆菌对上述10种抗菌药物的最小抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC）值测定，以大肠杆菌ATCC25922作为质控菌株，根据CLSI标准进行结果判定。
2 结果与分析
2.1 不同生长期猪源大肠杆菌分离结果
不同生长期猪粪源的大肠杆菌分离情况见表1。
表1 不同生长期猪粪源的大肠杆菌分离情况
2.2 不同生长期猪粪源大肠杆菌耐药结果
猪粪源大肠杆菌对10种临床常用抗菌药物的耐药结果见表2。
表2 猪粪源大肠杆菌的耐药率 （单位：%）
由表2可知，40d仔猪对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星6种药物耐药率较高，均在90%以上，庆大霉素和安普霉素次之，也分别为73.5%和45.8%，对头孢噻呋和阿米卡星耐药率较低，分别为12%和8.4%；60d仔猪对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星5种药物耐药率较高，在63～83%，对头孢噻呋和阿米卡星耐药率较低，分别为18%和0%；妊娠母猪对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、诺氟沙星、恩诺沙星、庆大霉素6种药物耐药率较高，在26.5～66.3%，对头孢噻呋、安普霉素、阿米卡星3种药物耐药率最低，分别为0%、6.1%、0%。
2.3 不同生长期猪粪源大肠杆菌多药耐药结果
猪粪源大肠杆菌的多药耐药率见表3。
由表3可知，40日龄仔猪多药耐药主要以5耐、6耐和7耐为主，分别为19.3%、27.7%、42.2%，占89.2%；60日龄仔猪多药耐药主要以4耐、6耐和7耐为主，分别为18%、17%、18%，占53%；妊娠母猪多药耐药主要以2耐、3耐和4耐为主，分别为20.4%、22.4%、20.4%，占63.2%。
3 结论与讨论
3.1 不同生长期猪粪源大肠杆菌耐药比较分析
从耐药结果看来，不同生长期猪源耐药结果存在明显差异，40日龄仔猪对10种药物耐药率主要集中在91.6～97.6%，60日龄仔猪对10种药物耐药率主要集中在63～83%，妊娠母猪明显较低，耐药率主要26.5～66.3%。仔猪耐药率明显大于妊娠母猪，其中40日龄仔猪耐药率又明显大于60日龄仔猪，仔猪的多药耐药程度也明显大于妊娠母猪，这可能与仔猪随着日龄增大断奶，母源抗体逐渐降低，对疾病的抵抗力下降，生产中大量使用药物，导致仔猪耐药问题比妊娠母猪严重；分离的350份猪粪源大肠杆菌均对阿米卡星和头孢噻呋较为敏感，呈一定的相似性，对其他8种药物耐药率相对都较高。整体来看，不同生长期猪粪源大肠杆菌对被检测的大部分药物均有较高的耐药率，并且多药耐药现象严重。
3.2 与其他地区耐药情况的差异
邓均华等[2]2008年对武汉规模化养殖场分离鉴定出的73株大肠杆菌药物敏感试验研究表明，猪源性大肠杆菌仅对阿米卡星和大部分头孢类抗菌药物的耐药率较低，对多数抗菌药物均表现为较高的耐药率，并呈现出严重的多重耐药现象。李小成[3]对辽宁朝阳地区某猪场不同生长阶段猪源大肠杆菌耐药性调查结果显示，各类猪群采集到的大肠杆菌对环丙沙星高度敏感，氧氟沙星对妊娠母猪和肥育猪分离到的大肠杆菌为高度敏感，对保育猪中度敏感，对哺乳仔猪不敏感，不同类别猪群猪源大肠杆菌对抗生素存在一定的耐药性问题，尤其是哺乳仔猪对抗生素的耐药种类上更为突出一些。这一结果与本试验结果相一致。多药耐药结果显示，仔猪粪源大肠杆菌以6～7耐为主，多药耐药水平与夏利宁[4]等报道相近。这种耐药性的相似，与大肠杆菌疾病在临床上普遍采用抗生素治疗有关，在药物使用过程中，把抗生素作为饲料添加剂，大剂量长期单独使用一种药物，使细菌的耐药问题集聚发展，由不耐药、单一耐药逐渐发展到多重耐药。
表3 猪粪源大肠杆菌的多药耐药情况
该县主要的规模化养殖场猪源多药耐药现象较严重，建议以后治疗大肠杆菌病时，科学合理使用抗生素，选取敏感性高的药物，比如阿米卡星和头孢噻呋等，以便提高治疗效果。同时选出其他治疗方案，如联合用药，疫苗防疫，血清的应用，微生态制剂的使用，以及提升圈舍的环境卫生，加强饲养管理措施等。
