“三黄连”合剂稳定性试验研究

谷俐媛，梁万文 ，施 君，韦英益，胡庭俊

（1.广西大学动物科学技术学院，广西 南宁 530005；2.广西壮族自治区水产科学研究院，广西 南宁 530021）

“三黄连”合剂是一种中兽药复方新制剂，主要用于罗非鱼链球菌病的防治。其主要组分黄芩为唇形科黄芩属植物黄芩的干燥根，味苦、性寒，归肺、胆、脾、大肠和小肠经，具有清热燥湿、凉血、解毒、保胎、安胎等功效，是常用的传统中药材之一，用于治疗肺热咳嗽、发热烦渴、湿热黄疸、胎动不安、疮痈肿毒和泻痢热淋等症状。近年来随着对中药研究的不断深入，黄芩中的化学成分也被逐步探明和分离。黄芩的化学成分主要包括黄酮类化合物，如黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A等［1］。近代药理学研究发现黄芩的主要化学成分具有多种药理作用，包括抗菌、抗病毒、抗惊厥、抗肿瘤、解热、保胎、安胎、抗炎、免疫调节等，其作用机制也被逐渐揭示。“三黄连”合剂的另一组分连翘是木犀科连翘属植物连翘的果实，性微寒，味苦，入肺、心、胆经，有清热解毒、消痈散结的功效，具有“疮家圣药”之称。连翘常用于外感风热、咽喉肿痛、痈肿疮疖、瘰疬等症状。连翘的化学成分复杂，主要发现有木脂素类，如牛蒡苷元、马太树脂酚苷和连翘苷元等。现代药理学研究也证实连翘具有广泛的药理学作用，如抗菌、抗炎、镇痛、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等。

稳定性研究是药学研究中的重要组成部分，通常以质量标准中的项目对制剂进行稳定性评价，制剂中质控成分的含量变化及其趋势是稳定性研究的重点［2-3］。该研究在“三黄连”合剂质量标准基础上，通过光加速试验、加速试验考查在温度、湿度、光照的影响下制剂的理化性质变化规律，评价“三黄连”合剂的稳定性，以期为新兽药申报、生产、包装、贮存和运输条件提供必要的资料。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

“三黄连”合剂3批供试品 （批号分别为：130629、130702、130705， 广西大学动物科学技术学院药理实验室自制）；黄芩苷对照品 （批号：110715-201117，购于中国食品药品检定研究院）；连翘苷对照品（批号：110821-201112，购于中国食品药品检定研究院）；黄芩、连翘标准对照药材（购于中国兽医药品监察所）；乙腈（色谱纯，TEDIA）；超纯水。

1.2 仪器与设备

药品强光照射试验箱（型号：SHH-100GD，重庆永生实验仪器厂）；药品稳定性试验箱 （型号：SHH-250SD，重庆永生实验仪器厂）；pH值计（型号：PHS-3C，上海雷磁仪器厂）；通风柜（型号：FF-09056-16，科艺科技有限公司）；电热恒温干燥箱（型号：DHG-9071A，上海精宏）；三用紫外仪（型号：ZF-2，上海安亭电子仪器厂）；硅胶H板（100mm×100mm，青岛海洋化工厂分厂）；硅胶G板（100mm×100mm，青岛海洋化工厂分厂）；展开缸；毛细点样管；电子天平（型号：FA2004N，上海精密科学仪器有限公司）；Waters 2695分离单元、Waters 2998二极管阵列检测器 （美国Waters公司）；Empower色谱工作站。

1.3 光加速试验

参照农业部颁发的 “兽药稳定性试验技术规范（试行）”，取“三黄连”合剂3批分别装入无色透明容器内，置于药品强光照射试验箱，于照度（4500±500）lx条件下放置10 d，在第5天和第10天定时取样，按照口服液的稳定性重点考查项目进行检测，分别检测合剂的性状、主要有效成分含量、色泽、澄清度、pH值、密度等。pH值、密度等的测定方法参照《中华人民共和国兽药典》一部附录［4］操作要求进行。黄芩苷和连翘苷的定性检测采用薄层色谱法，定量检测采用高效液相色谱法。

1.4 加速试验

参照农业部颁发的 “兽药稳定性试验技术规范（试行）”，取“三黄连”合剂3批，按照市售包装，置于药品稳定性试验箱，在温度（40±2）℃、相对湿度 （75±5）%的条件下放置6个月，每个月取样1次，按照口服液的稳定性试验重点考查项目进行检测，分别检测合剂的性状、主要有效成分含量、色泽、澄清度、pH值、密度等。pH值、密度等的测定方法参照《中华人民共和国兽药典》一部附录［4］操作要求进行。黄芩苷和连翘苷的定性检测采用薄层色谱法，定量检测采用高效液相色谱法。

2 结果与分析

2.1 光加速试验

光加速试验结果见表1。由表1可知，“三黄连”合剂在照度（4 500±500）lx的条件下放置 10 d，其性状均为棕褐色澄明液体，味感均为苦味并略带甜味，TLC法鉴别黄芩和连翘均在相同位置显示与标准品同色的斑点，pH值、密度以及黄芩苷、连翘苷的含量均在质量标准范围内，说明 “三黄连”合剂对光稳定，贮存过程中对避光无要求，可用透明容器进行包装。

2.2 加速试验

3批“三黄连”合剂的加速试验结果见表2～表4。由表2～表4可知，“三黄连”合剂在温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%的条件下放置 6 个月，其性状均为棕褐色澄明液体，味感均为苦味并略带甜味，TLC法鉴别黄芩和连翘均在相同位置显示与标准品同色的斑点；第0～2个月无沉淀，第3个月及以后均出现了少量沉淀，但振荡后可溶解，其密度、pH值均在质量标准范围内；黄芩苷、连翘苷含量随观察时间延长整体呈下降趋势，但仍在质量标准范围内。

3 讨论

环境因素是影响药物稳定性的重要因素之一。部分药物在强光、高温、高湿作用下，可能会发生变质、成分分解等，进而使药效降低甚至产生毒性成分，因此，对药品稳定性的考查是非常重要的一个环节。稳定性试验的目的是为了考查药物在温度、湿度、光照的影响下随时间变化的规律，从而为药品包装、贮存和运输条件提供科学依据，同时也为产品有效期的制定提供依据。稳定性试验包括影响因素试验、加速试验和长期试验等，其中，影响因素试验适用于原料药稳定性的考查，加速试验与长期试验适用于药物制剂稳定性的考查。

薄层色谱法是对药物有效成分进行快速分离、定性分析的一项重要技术，其属于色谱技术，具有微量、快速、分离效率高、灵敏度高、设备简单、操作简便、结果直观、不易被污染等优点［4］。高效液相色谱法具有灵敏度高、选择性好、分离性能好、分析速度快、适用范围广、样品量少、容易回收等优点，在化学、医药、食品、环境监测等领域都有广泛的应用，是最常用的药物分离和检测方法［5-7］。该研究对“三黄连”合剂进行了光加速试验和加速试验，分别考查了该制剂的性状、pH值、密度和有效成分含量。在光加速试验中，3批“三黄连”合剂在强光照射试验箱中放置10 d，在第5天和第10天时取样检测，结果表明各项指标均符合质量标准规定，“三黄连”合剂对强光不敏感，市售包装可以采用透明玻璃瓶。光加速试验中，“三黄连”合剂的黄芩苷含量在第10天时略有增加，这可能是由于试验条件并不能保持完全一致造成的实验误差以及一些人为因素造成的操作误差，如高效液相色谱仪运行时间的差异、流动相配制时的误差等，这还需要进一步的探索和研究。

表1 “三黄连”合剂光加速试验结果

表2 批号为130629的“三黄连”合剂加速试验结果

表3 批号为130702的“三黄连”合剂加速试验结果

表4 批号为130705的“三黄连”合剂加速试验结果

在加速试验中，取“三黄连”合剂按照市售包装置于药品稳定性试验箱6个月，每个月取样检测。在3～6个月时，3批“三黄连”合剂均出现了沉淀，但振荡后可以溶解，仍然符合要求。其余各项指标，包括性状、密度、pH值和有效成分含量等均没有明显变化，符合“三黄连”合剂的质量标准。药品质量直接关系到广大养殖户的利益，对于兽药的质量必须严格把关，因此，还需要对该药进一步留样观察进行长期检测，对其沉淀的产生、有效成分的含量等继续检测，并进行多次重复试验，以确保其稳定性。

加速试验中检测到的黄芩苷、连翘苷含量在3批“三黄连”合剂中均呈下降趋势，可见在长期的贮存过程中，该药的有效成分含量有所下降，这可能会影响药品的药效。因此，在稳定性试验尤其是长期试验过程中要注意对药品有效成分含量的检测，同时，应该通过临床试验对供试品进行药效学考查，这样才能使有效期的制定更加科学。另外，长期的贮存中“三黄连”合剂也出现了沉淀，虽然振荡后可溶解，但在长期贮存过程中沉淀可能会进一步增加，这也可能会对药效和性状产生一定的影响。提示“三黄连”合剂的制备过程尚待优化，可以从调节合剂的 pH 值［8］、加入助溶剂［9-10］和稳定剂［11］等方向考虑，使“三黄连”合剂更加稳定，从而保证药效。

4 结论

该研究通过光加速试验、加速试验检测了“三黄连”合剂的稳定性，在规定的时间内“三黄连”合剂性状稳定，各项指标符合规定。“三黄连”合剂对光不敏感，在生产、贮存和运输过程中不必考虑避光，可以采用透明容器进行包装。