肠腺癌组织中CK7、CK20、CEA、Ki—67表达水平的临床病理意义

潘运迎　杨得志　覃兴善　陈柳红

【摘要】 目的：探討肠腺癌肿瘤组织中CK7、CK20、CEA、Ki-67表达水平与其临床病理特征的关系。方法：选取2015年1月-2017年3月于本院确诊并进行治疗的肠癌患者139例，均采用免疫组织化学染色Envision法检测其肠腺癌组织中CK7、CK20、CEA、Ki-67表达水平。结果：患者CK7、CK20、CEA表达阳性率分别为10.79%（15/139）、90.65%（126/139）、90.65%（126/139），Ki-67的增殖指数为（61±22）%；CK7的表达在不同部位及淋巴结转移间比较差异均有统计学意义（P<0.05）；CK20的表达在不同部位、肿瘤大小、组织学类型及临床分期之间比较差异均有统计学意义（P<0.05）；CEA的表达在不同组织学类型及淋巴结转移间比较差异均有统计学意义（P<0.05）；Ki-67的表达在组织学类型、临床分期之间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：CK7、CK20表达情况有助于腺癌来源部位的判断；CK7、CEA阳性表达者，其淋巴结转移能力更强；CK20可能促进腺癌细胞分化，CEA则可能阻碍细胞分化；Ki-67的增殖活性与肿瘤的低分化程度及高临床分期相关。

【关键词】 肠腺癌； CK7； CK20； CEA； Ki-67

Clinicopathological Significance of the Expression of CK7，CK20，CEA，Ki-67 in Intestinal Adenocarcinoma/PAN Yunying，YANG Dezhi，QIN Xingshan，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（17）：-148

【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between the expression level of CK7，CK20，CEA，Ki-67 in intestinal adenocarcinoma and its clinicopathological features.Method：A total of 139 patients with colorectal cancer diagnosed and treated in our hospital from January 2015 to March 2017 were selected.The expression levels of CK7，CK20，CEA and Ki-67 in intestinal adenocarcinoma were detected by immunohistochemical staining and Envision.Result：The positive rates of CK7，CK20 and CEA were 10.79%（15/139），90.65%（126/139） and 90.65%（126/139） respectively，and the proliferation index of Ki-67 was（61±22）%.The expression of CK7 in different locations and lymph node metastases were compared，the differences were statistically significant（P<0.05）.The expression of CK20 in different locations，tumor size，histological type and clinical stage were compared，the differences were statistically significant（P<0.05）.The expression of CEA in different histological types and lymph node metastasis were compared，the differences were statistically significant（P<0.05）.The expression of Ki-67 in histological type and clinical stage were compared，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：The expression of CK7 and CK20 are helpful to the prediction of the origin of adenocarcinoma，and the positive expression of CK7 and CEA has stronger lymph node metastasis.CK20 may promote differentiation of adenocarcinoma cells，while CEA may block cell differentiation，and the proliferation activity of Ki-67 is related to the low degree of tumor differentiation and high clinical stage.

【Key words】 Intestinal adenocarcinoma； CK7； CK20； CEA； Ki-67

First-authors address：Hospital of Traditional Chinese Medicine of Liuzhou，Liuzhou 545000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.17.038

肠癌是一种全球范围内发病率和致死率均较高的消化道恶性肿瘤，全世界每年新发病例约有120万，死于该疾病者约60万。分别居男性和女性恶性肿瘤的发病率中第三和第二位。随着我国人民饮食结构及生活方式的改变，肠癌的发病率呈明显上升趋势。中国国家癌症中心2015年的统计数据显示我国结直肠癌发病率、死亡率在全部恶性肿瘤中均位居前5位[1]。大肠癌的好发部位为直肠和乙状结肠，病理类型以腺癌为主，高发年龄>60岁[2]。大多数患者确诊时已到中晚期，生存率<30%[3]。目前，对于肠癌的临床病理特征、分子分型、治疗手段等领域的研究均取得了长足进展[4-6]，但其诊疗效果仍有待于进一步提高。本研究中分子标记CK7、CK20、CEA、Ki-67在肠腺癌的诊断、鉴别诊断、预后判断及临床筛查中有重要价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年1月-2017年3月于本院確诊并进行治疗的肠癌患者139例。纳入标准：按照2010版WHO标准经病理检查确诊为原发性肠癌；术前未进行放化疗；行肠癌根治术。排除标准：活检标本；免疫组化的资料不完整者。其中男79例，女60例；年龄29～88岁，平均年龄64.4岁；直肠癌56例，结肠癌79例中右半结肠（盲肠+升结肠）33例、横结肠9例、降结肠9例、乙状结肠28例，十二指肠癌4例；有淋巴结转移者57例（其中有卫星结节者9例），无淋巴结转移者82例；组织学类型：原位腺癌1例，普通型腺癌130例（高分化腺癌25例，中分化腺癌87例，低分化腺癌18例），黏液腺癌（所含黏液区占肿瘤组织的50%以上）8例；肿瘤大小：≤2 cm者9例，2.1～4.9 cm者61例，≥5 cm者69例；TNM临床分期：0期1例，Ⅰ期20例，Ⅱ期59例（Ⅱa期57例，Ⅱc期2例），Ⅲ期53例（Ⅲa期2例，Ⅲb期45例，Ⅲc期6例），Ⅳ期6例。该研究已经伦理学委员会批准，患者知情同意。

1.2 方法 送检组织经4%中性甲醛液固定，常规脱水，石蜡包埋，3 μm厚度切片，HE染色，光镜观察。选取肿瘤与正常组织同时存在的蜡块，4 μm厚度切片行免疫组化，采用Envision法，一抗为CK7、CK20、CEA、Ki-67，抗体及所用免疫组化试剂均购于福州迈新生物技术开发有限公司，操作步骤按照试剂说明书进行。同时进行阳性及阴性对照实验。

1.3 结果判定 阳性结果明确，阳性信号的位置正确且染色特征正确[7]。（1）在阳性对照（+）且阴性对照（-）的情况下，对照HE染色切片，确定要观测的肿瘤细胞，分析阳性染色的部位，阳性结果为相应部位显示棕黄色颗粒。（2）CK7、CK20、CEA阳性信号>5%判定为阳性；对Ki-67进行定量分析：选取阳性信号最多部位（计数500～2 000个细胞），计算肿瘤细胞中Ki-67增殖指数，即Ki-67阳性的百分比[8]，<10%为阴性（-），10%～50%为低表达（+）；>50%为高表达（++）[9]。所有结果均由3名有经验的病理医师阅片获得。

1.4 统计学处理 使用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肠癌患者肿瘤组织中CK7、CK20、CEA、Ki-67表达水平 CK7、CK20阳性信号定位于胞浆，呈细丝状；CEA阳性信号呈细胞膜及细胞质中均匀着色；Ki-67阳性信号定位于细胞核。患者CK7、CK20、CEA表达阳性率分别为10.79%（15/139）、90.65%（126/139）、90.65%（126/139），Ki-67增殖指数为（61±22）%（最低值3%，最高值90%）。

2.2 肠癌患者CK7、CK20、CEA、Ki-67表达与临床病理特征的关系 CK7的表达在不同部位及淋巴结转移间比较差异均有统计学意义（P<0.05），其中CK7表达阳性率在十二指肠腺癌组为100%（4/4）高于结直肠癌组，淋巴结转移≥4个组高于淋巴结转移≤3个组（无转移组+转移数1～3个组）；在不同性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、临床分期之间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。CK20的表达在不同部位、肿瘤大小、组织学类型及临床分期之间比较差异均有统计学意义（P<0.05）；在不同性别、年龄、淋巴结转移间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。CEA的表达在不同组织学类型及淋巴结转移间比较差异均有统计学意义（P<0.05）；而在不同性别、年龄、部位、肿瘤大小、临床分期之间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。Ki-67的表达在组织学类型、临床分期之间比较差异均有统计学意义（P<0.05），而在不同性别、年龄、部位、肿瘤大小、淋巴结转移间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3 讨论

肠癌是肠黏膜及腺体发生的恶性肿瘤。目前以外科手术为主，结合放疗、化疗、分子靶向治疗及多学科治疗，使结直肠癌的规范治疗取得长足进展，但因诊断时常为中晚期以及复发、转移等问题，术后5年生存率较低。随着免疫组织化学技术在临床病理诊断中的广泛应用，免疫组化标记在肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断，患者的预后判断、指导临床制定合理的诊疗计划等方面均发挥着重要的作用[10]。本文对免疫组化标记物CK7、CK20、CEA、Ki-67在肠癌肿瘤组织中的表达情况与患者临床病理特征之间的关系进行研究，从而为肠癌患者的临床诊断及预后判断提供一定依据。

3.1 CK7在肠癌组织中的表达及意义 CK7是细胞角蛋白亚型之一，主要表达于腺上皮细胞，如：乳腺、肺、胃、胰腺、胆管上皮、卵巢等处。有研究报道CK7在结直肠癌组织中阳性表达率为10%～27%[11]。目前已证明有三条分子通路涉及肠癌的发生：即染色体不稳定，微卫星不稳定和锯齿状通路。锯齿状通路以异常甲基化为特征，伴有不同基因突变[12-13]。余力等[14]报道，在68例结、直肠癌中CK7表达阳性率为39.7%，CK7的表达很可能是循增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌变途径发生结直肠癌的标志物之一。廖谦和等[15]报道CK7在胃腺癌、癌旁异型增生组织及肠化组织中均高表达，阳性率大于80%。CK7阳性细胞可能代表一种分化程度较低的细胞。表达强度随组织分化程度降低而增强。郭春红等[16]报道，在结直肠癌卵巢转移组织中CK7（-）、CK20（+）、CDX-2（+）、CEA可能（+）。CK7表达阳性的肠癌细胞是否具有更强的转移能力，有待于进一步研究。本研究结果显示，CK7总体表达阳性率为10.79%，CK7的表达在不同部位及淋巴结转移间比较差异均有统计学意义（P<0.05），其中在十二指肠中表达阳性率为100%（4/4），在结直肠癌中表达阳性率为8.15%（11/135），CK7在淋巴结转移≥4个组的阳性率为30.77%（4/13），显著高于淋巴结转移≤3个组8.73%（11/126）；而在不同性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、临床分期之间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。

3.2 CK20在肠癌组织中的表达及意义 CK20是一种选择性表达于胃肠道腺上皮细胞的中间纤维蛋白，在结直肠癌中的表达稳定，且阳性率>90%[17]。CK20具有维持细胞形态、调节细胞分化等功能。分化差的细胞可出现CK20的表达缺失。本研究结果显示，CK20表达阳性率为90.65%，CK20的表达在不同部位、肿瘤大小、组织学类型及临床分期之间比较差异均有统计学意义（P<0.05），在不同性别、年龄、淋巴结转移间比较差异均无统计学意义（P>0.05），与上述研究结果一致。其中在十二指肠腺癌中的表达率25.00%（1/4）显著低于结直肠癌组，肿瘤最大径≤2 cm组CK20表达率66.67%（6/9）顯著低于肿瘤最大径>2 cm组（2.1～4.9 cm组和≥5 cm组），低分化腺癌中CK20表达率77%显著低于高、中分化腺癌。CK20在原位腺癌中呈阴性表达。但因病例数过少，仅1例，其意义尚不明确。结直肠腺癌组织中CK20（+）、CK7（-），但因CK20在肠癌表达的特异性较低[10]，实际病理诊断工作中常结合其他免疫组化标记物，如：villin、CDX-2等共同协助肠腺癌的诊断及转移灶中腺癌来源的判断。此外，本研究提示：CK20可能促进细胞的增殖；且CK20阳性可能与癌细胞分化相关，分化程度越高，CK20阳性表达率越高。

3.3 CEA在肠癌组织中的表达及意义 CEA是一种在胎儿肠道产生的癌胚抗原，在胃肠道腺癌、肺腺癌和甲状腺髓样癌中高表达，在成人结肠正常黏膜上皮中也有表达。但CEA在癌组织中及正常黏膜中的表达模式不同，在腺癌组织中，CEA阳性信号均匀分布在细胞表面，而在正常黏膜中则呈极性分布，主要分布于腺腔表面细胞膜和细胞顶部细胞质[18]。夏翠锋等[19]研究显示，CEA在大肠癌组织中显著高表达，临床分期越高，合并肝转移，CEA阳性率越高。本研究中CEA的表达在不同组织学类型及淋巴结转移间比较差异均有统计学意义（P<0.05）；而在不同性别、年龄、部位、肿瘤大小、临床分期之间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。其中CEA在高分化腺癌组的阳性表达率为76%（19/25），显著低于其他组织学类型；无淋巴结转移组中CEA阳性表达率为85.37%（70/82）显著低于有淋巴结转移组。表明肠腺癌中CEA高表达可能与抑制肿瘤细胞分化及促进淋巴结转移相关。

3.4 Ki-67在肠癌组织中的表达及意义 Ki-67是临床病理诊断工作中常用的反映细胞增殖活性的标记物。Ki-67主要位于细胞核内，其抗原表达与细胞周期高度相关，其表达始于G1后期，在S、G2期逐渐上升于M期达到高峰，有丝分裂结束后迅速降解并消失，静止期（G0期）细胞不表达[20]。有研究报道Ki-67与肠癌淋巴结转移及预后不良相关[21]。也有研究认为Ki-67增殖指数只与肿瘤浸润肠壁的深度有关（P<0.05），与其他因素并无统计学关系[13]。本研究中显示Ki-67总体增殖指数为（61±22）%，Ki-67的表达在组织学类型、临床分期之间比较差异均有统计学意义（P<0.05），而在不同性别、年龄、部位、肿瘤大小、淋巴结转移间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。其在原位腺癌中不表达，黏液腺癌中以低表达为主75.00%（6/8），普通型腺癌中随分化程度降低，Ki-67高表达的比例提高，从52.00%（13/25）增加至72.22%（13/18）；在临床分期中，0期为原位癌，Ki-67不表达，在0～Ⅱ期中Ki-67高表达的比例为55.00%（44/80）低于Ⅲ～Ⅳ期的68.80%（40/59）。表明肿瘤细胞的增殖活性与肿瘤的低分化程度及高临床分期相关，推测Ki-67高表达可能与预后不良相关。

综上所述，CK7、CK20在肠癌的临床病理诊断中有重要参考价值，且CEA、Ki-67与组织学类型、淋巴结转移、肿瘤大小及肿瘤分期等临床病理特征有一定的关系，从而为患者的预后判断提供一定的参考依据。但因本研究病例数较少，且病例来源仅限于本院就诊者，不具有广泛的代表性，因此本研究有一定的局限性。有待于更多的相关研究，对本研究结果加以验证或进行补充。

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（收稿日期：2018-04-23） （本文编辑：董悦）