AE灭活疫苗ELISA抗体与攻毒保护效果试验

2018-08-27罗文仁李忠晓李富金

家禽科学 2018年8期

罗文仁，李忠晓，李富金

(1.北京市华都峪口禽业有限责任公司，北京 101206；2.山东鲁丰集团有限公司，山东安丘 262100；3.齐鲁动物保健品有限公司，山东济南 250100)

禽脑脊髓炎（AE）是一种主要侵害幼鸡的病毒病，以运动失调和头颈部震颤为特征，产蛋鸡可出现一时性产蛋急剧下降，种蛋孵化率降低,死雏、弱雏增多等[1]。国内1980年开始有疑似病例报道，1983年确诊该病存在，此后国内多个省份都有该疫病流行的报道[2]，国内对该病的相关研究也比较多，并研制了有效疫苗用于该病防控，通过疫苗免疫该病得到了有效控制。近几年发病又开始增多，呈区域流行趋势。禽脑脊髓炎病毒感染无抗体雏鸡有明显临床症状，但青年鸡、产蛋鸡无明显临床症状，也无特征性肉眼病理变化，给该病临床诊断带来一定困难，常通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代分离病原、人工感染试验、PCR、琼脂扩散试验 (AGP)、ELISA检测血清中抗体等进行鉴定、诊断和控制该疫病，其中ELISA检测方法是一种快速的检测系统，可以准确、及时了解鸡群抗体阳性率及数值高低[3]，但抗体值与攻毒保护之间的相关性资料介绍很少，本实验目的就是找到两者之间的关系。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试验用鸡 28日龄SPF鸡15只，购自济南斯帕法斯公司。

1.1.2 试剂盒 ELISA试剂盒，IDEXX公司生产。

1.1.3 疫苗及强毒禽脑脊髓炎灭活疫苗，齐鲁动物保健品有限公司生产（批号：1612006）；禽脑脊髓炎强毒，山东省农业科学院家禽研究所提供。

1.1.4 试验器具及设备负压隔离器、酶标仪、离心机、一次性注射器、离心管等。

1.2 方法

1.2.1 试验分组选取体况相同的28日龄SPF鸡15只，随机分为试验组和对照组2组，其中试验组10只，每只肌肉注射禽脑脊髓炎灭活疫苗0.5ml；对照组5只，每只注射生理盐水0.5ml。

1.2.2 试验方法试验鸡与对照组鸡都进行编号，饲养在同一个负压隔离器内，为了容易辨认，对照鸡头部染为绿色。试验组免疫疫苗后21d，全部鸡只采血，1ml/只，分离血清，ELISA抗体效价检测，采血后全部试验鸡采用脑内接种方式攻毒(按照禽脑脊髓炎灭活疫苗效力检测规程操作)，每日观察攻毒鸡发病情况，攻毒鸡出现临床症状时和攻毒后21d试验结束，采集存活鸡血，分离血清，检测抗体，统计攻毒鸡发病情况，与检测抗体进行对比。

1.2.3 血清抗体检测方法 ELISA抗体检测按照酶联免疫吸附试验规程进行。

2 试验结果

2.1 临床观察结果

2.1.1 免疫副反应试验组与对照组鸡只临床表现均未见异常，采食、精神与免疫前无差异。

2.1.2 发病鸡临床症状攻毒后11d，试验组鸡只出现明显临床症状，严重的表现为精神不振、腹泻及瘫痪（见图 1）、头颈震颤等，最后衰竭死亡（见图2）；轻微的出现精神不振、不愿意运动、驱赶行走瘸腿等。试验鸡均未发现有视力问题及眼观病变。

图1 发病鸡精神不振、瘫痪

图2 瘫痪鸡衰竭死亡

2.1.3 发病及存活结果攻毒后21d，试验组有1只发病（发病率10%），10只存活（存活率 100%）；对照组5只全部发病（发病率100%），有1只存活（存活率 20%）。

2.2 抗体结果结果显示：免疫后21d，试验组抗体阳性率为80%，均值为1042.17；对照组抗体阳性率为0，均值为 28.68；攻毒后11d，发病鸡表现明显临床症状，试验组抗体阳性率90%，均值为2789.36；对照组抗体阳性率为 0，均值为84.44；攻毒后21d，试验结束，试验组抗体阳性率100%，均值为2254.15；对照组抗体阳性率为20%，均值为570.85。试验组、对照组抗体值及攻毒结果见小表1。

3 小结与分析

3.1 禽脑脊髓炎灭活疫苗免疫效果良好，免疫后21d，攻毒保护效果高达90%。攻毒前后的抗体阳性率结果见图3。

图3 攻毒前后抗体阳性率、发病率及成活率结果

3.2 对比攻毒前ELISA抗体结果与攻毒后发病结果，可以看出试验鸡免疫抗体阳性（≥396）鸡攻毒后100%未发病；对照组ELISA抗体均为阴性，100%发病，可见ELISA抗体值阳性与攻毒保护是正相关的，因此，临床上可以通过抽检免疫鸡群的ELISA抗体阳性率，来了解鸡群对该病的保护效果，抗体阳性率越高、值越高，保护效果越好。