H5N1亚型禽流感灭活疫苗对黄羽肉鸡的免疫效果研究

陈永忠 ，蒲常廷 ，孟茹

（1.西宁市畜牧兽医站，青海 西宁 810003；2.湟中常绿养殖合作社，青海 湟中 811607）

近年来,高致病性禽流感在世界上许多国家暴发流行 ,给养禽业造成了巨大的经济损失。同时由于禽流感病毒有感染人的能力 ,也给人类的身体健康造成巨大的威胁[1]。疫苗免疫是预防禽流感暴发流行的重要途径之一，为探讨H5N1亚型禽流感灭活疫苗对黄羽肉鸡的免疫效果 ,本研究采用不同剂量不同免疫途径免疫黄羽肉鸡，监测抗体的消长规律 ,以制定合理的免疫程序。

1 材料和方法

1.1 试验动物 1周龄黄羽肉鸡，购自宁夏肉鸡场。

1.2 疫苗及试剂 禽流感病毒H5N1亚型灭活疫苗，批号为2014038，哈药集团生物疫苗有限公司生产。禽流感病毒H5亚型HI试验抗原，批号为20150702，青岛易邦生物工程有限公司生产。标准阳性血清，批号为20151004，青岛易邦生物工程有限公司生产。0.1M PBS(pH7.2)阿氏液，1%的鸡红细胞悬液（现用现配）。

1.3 仪器 一次性V型血凝板，微量移液器，微量振荡器，离心机。

1.4 分组和免疫操作 将新购进的1周龄黄羽肉鸡随机分成6组，每组20只。待鸡禽流感母源抗体衰减到2log2以下时，第一、二、三组均用禽流感疫苗免疫接种，胸部肌肉注射，剂量分别为第一组 0.3ml/头、第二组 0.4ml/头、第三组 0.5ml/头、第四组用禽流感苗饮水免疫，剂量为1ml/只，第五组对照。免疫后每2周翅静脉采血（1ml/只）并分离血清。

1.5 抗体测定 按照“禽流感病毒H5N1亚型灭活疫苗制造及检验试行规程”中血凝抑制（HI）试验操作技术进行。

2 结果

禽流感疫苗可有效刺激鸡产生HI抗体。免疫后2周，抗体平均效价分别达到:第一组4.2log2，第二组4.1log2，第三组 4.4log2，第四组 2.9log2。第4周免疫注射组HI抗体效价达到最高，均值分别为第一组9.7log2、第二组9.8log2、第三组 9.5log2、第四组4.6log2，各组抗体效价从第6周开始下降，第8周以后下降相对较缓慢。18周内能够维持较高的抗体水平，20周以后抗体效价均值降低到4log2以下。各免疫组抗体合格率在4～10周内维持较高水平，第10周以后缓慢下降，18周内维持在70%以上，之后下降到70%以下。饮水免疫组第8周以后抗体均值在4.0log2以下。饮水免疫组抗体水平自始至终不合格。不同滴度、不同免疫途径的禽流感疫苗免疫鸡只后的抗体滴度和合格率见表1。

表1 禽流感疫苗不同剂量、不同免疫途径的抗体滴度和合格率统计表

3 分析和讨论

3.1 禽流感疫苗免疫后2周后可产生抗体，第4周抗体效价最高，各组抗体效价从第6周开始下降，第8周以后下降相对较缓慢。18周内能够维持较高的抗体水平，20周以后抗体效价均值降低到4log2以下；各免疫组抗体合格率18周内维持在70%以上，之后下降到70%以下。此时不足以抵御外界病毒侵袭，由于肉鸡4个月可出栏，建议普通肉鸡免疫一次即可，蛋鸡每4个月免疫1次，剂量以0.3ml为宜。

3.2 注射免疫第三组，有2只肉鸡死亡，这是由于疫苗注射剂量过大，发生应激反应死亡，这和于桂阳等[2]研究结果相符合。

3.3 禽流感疫苗注射免疫效果较好，饮水免疫不但浪费大量疫苗，而且免疫效果较差，同时养殖场(户)无法及时监测免疫效果，有疫病发生的风险，因此，建议养殖户在对鸡只进行禽流感疫苗免疫时不要用饮水免疫，注意在日常免疫操作中应避免大剂量使用疫苗和随意改变免疫途径的做法。