冠心病患者血浆DKK-1水平与冠状动脉病变程度的相关性分析

张绪光，鹿庆华

(山东大学第二医院，济南250000)

近年来，冠心病发病率显著升高，是目前世界上最常见的死亡原因之一，严重威胁公众健康。冠心病的发病机制目前并不完全明确，炎症反应在其发生发展过程中起着重要作用[1]。研究表明，Wnt信号传导通路与多种炎症性疾病有关，其可通过多种途径参与炎症的调节，而该传导系统受到多个分泌型抑制剂的影响，主要有可溶性卷曲蛋白相关受体以及Dickkopf家族，后者中研究最多的是Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)[2]。Ueland等[3]研究发现，动脉粥样硬化斑块中DKK-1基因的表达增强，在动脉粥样硬化斑块中DKK-1能影响血管内皮细胞和血小板间的炎症反应，能发挥促动脉粥样硬化的作用。本研究通过检测冠心病患者血浆DKK-1水平变化，分析其与冠状动脉病变程度的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年1～8月在我院心血管内科住院并行冠状动脉造影的患者299例，其中明确诊断为CHD患者182例为CHD组，其中男102例、女80例，年龄(50.12±14.42)岁。以冠状动脉造影正常的受试者117例为对照组，其中男65例、女52例，年龄(49.35±13.68)岁。排除标准：严重的心脏瓣膜病变或心肌病变；合并心功能Ⅲ级以上的心力衰竭；严重的心律失常；严重的肝肾功能异常；恶性肿瘤；血液病；各种急慢性感染；自身免疫病。本研究获医院医学伦理委员会批准，所有受试者均签署临床研究知情同意书。

1.2 外周血炎症指标检测 清晨抽取空腹血，检测外周血超敏C反应蛋白(hs-CRP)、IL-6水平。在山东大学第二医院免疫实验室完成检测。

1.3 血浆DKK-1水平检测 EDTA抗凝管抽取空腹外周血5 mL，4 ℃下1 500 r/min离心15 min分离血浆，-80 ℃保存，采用ELISA试剂盒(Mouse DKK-1 ELISA Kit，购自武汉博士德生物公司)检测血浆DKK-1水平。

1.4 冠状动脉造影及冠状动脉病变程度评价 两组均应用GE Discovery IGS 730 DSA行冠状动脉造影。患者取平卧位，常规消毒穿刺部位皮肤后铺无菌洞巾，利多卡因麻醉穿刺部位后，采用Seldinger′s技术穿刺动脉，肝素化后应用5F多功能造影管分别送至左右冠状动脉开口处行多角度造影。根据造影结果对CHD患者冠状动脉病变进行分析及计算Gensini评分。由两名以上医师共同阅片，狭窄程度用定量冠状动脉造影分析法分析。以管腔狭窄程度达到25%、50%、75%、90%、99%、100%分别计1、2、4、8、16、32分。冠状动脉不同分段所占分值：左主干为5分；前降支近段、中段、远段分别为2.5、1.5、1分；第一、第二对角支分别为1、0.5分；回旋支近段、远段分别为2.5、1分，钝缘支为1分；右冠状动脉近段、中段、远段、左室后支、后降支各1分。将各段的狭窄程度的分值与相应位置的系数相乘，然后将各狭窄段总分相加即为该患者的Gensini冠状动脉评分[4]。

2 结果

2.1 两组外周血炎症指标比较 CHD组外周血hs-CRP、IL-6水平均高于对照组(P<0.05或0.01)。见表1。

2.2 两组血浆DKK-1水平比较 CHD组血浆DKK-1水平高于对照组(P<0.01)。见表1。

表1 两组外周血炎症指标、血浆DKK-1水平比较

2.3 CHD组血浆DKK-1水平与炎症指标的相关性 CHD组血浆DKK-1水平与hs-CRP(r=0.431，P=0.033)、IL-6(r=0.369，P=0.037)均呈正相关。

2.4 CHD组血浆DKK-1水平与Gensini评分的关系 Pearson相关分析结果显示，血浆DKK-1水平与Gensini冠状动脉评分呈正相关(r=0.541，P<0.01)。

3 讨论

冠状动脉病变的发生发展与多种因素有关，其确切机制尚不完全明确。近年来，关于其发病机理提出了新的观点，即内皮损伤反应学说。该学说认为各种危险因素最终都损伤动脉内膜，而粥样硬化的形成是对动脉内膜损伤做出的炎症反应的结果[5]。炎症反应在冠心病的发生、发展到斑块破裂、血栓形成的多个阶段均发挥了作用[6]。既往有很多流行病学研究已经证实了炎症反应在冠状动脉斑块发生发展中的作用，病理学研究也发现动脉粥样硬化斑块中有大量炎性因子和炎性细胞的存在，其活跃程度与斑块的易损性密切联系。这个过程与多种循环免疫标志物之间有密切关系，hs-CRP、IL-6是研究比较多的两个炎症指标[7,8]。

Wnt传导通路在心血管系统中的作用也越来越被重视，其在血管新生、血管钙化、心肌缺血预适应和心肌梗死后恢复中发挥着关键的作用。Wnt信号通路是一条非常保守的信号转导通路，人Wnt基因定位于12q13，该通路参与了细胞分化、细胞迁移、细胞轴分化、神经分布、器官形成等胚胎发育过程中的重要方面。异常的Wnt信号传导通路与多种人类疾病有关，包括多种肿瘤和退化性疾病等。研究发现，在某种常染色体显性遗传的早发冠状动脉疾病中已经鉴定出存在有缺陷的Wnt信号通路。Wnt通路在炎症和免疫中亦有重要作用[9]。它可能发生在某些炎症因子引发的信号传导通路下游，例如TNF-α和IL-6。

多个家族的分泌性抑制剂共同参与调节Wnt通路，其中研究最多的就是DKK-1。DKK-1是由DKK-1基因编码的一种糖蛋白，是Wnt通路中的重要调节因子。它是一种分泌蛋白，含有两个富含半胱氨酸的区域，通过抑制Wnt信号通路参与胚胎发育。它是Wnt信号通路的拮抗抑制剂，通过隔离LRP6共受体发挥作用，因此它能对Wnt信号通路产生抑制作用[10]。DKK1还能减少β-连环蛋白的表达，同时增加OCT4基因的表达，从而拮抗Wnt/β-catenin信号通路[11]。研究发现，血浆DKK-1水平与动脉粥样硬化性疾病有密切关系，Wnt-1低表达而DKK-1高表达与早期心肌梗死有关[12]。有学者研究了DKK-1与脑血管病的关系，结果证实，急性缺血性脑卒中患者血DKK-1水平与临床病情稳定的脑血管病患者相比是显著升高的，而临床病情稳定的脑血管病患者血DKK-1水平显著高于健康人群，该差异与卒中患者的发病原因无关，亦与就诊时的症状严重程度及预后无关[13]。研究表明，DKK-1在颈动脉斑块中的过表达促进了血小板与血管内皮细胞之间的炎症反应，从而驱动了后续的炎症循环[3]。巨噬细胞和血管内皮细胞中也发现了过表达的DKK-1，同时对斑块破裂处的血栓组织进行免疫染色也发现了很强的血小板聚集反应。与hs-CRP相似，DKK-1可能也是一个经典的炎性因子，其与动脉粥样硬化斑块的形成、发展、甚至不稳定、破裂均有关系。Ueland等[3]曾报道，在活化的粥样硬化斑块中DKK-1表达增加。本研究发现，CHD组外周血hs-CRP、IL-6水平均高于对照组，CHD组血浆DKK-1水平高于对照组，且CHD组血浆DKK-1水平与hs-CRP、IL-6均呈正相关，提示冠心病患者血浆DKK-1水平高于正常人，且其水平与hs-CRP、IL-6呈正相关；血浆DKK-1水平与Gensini冠状动脉评分呈正相关，提示DKK-1水平与冠状动脉粥样硬化呈正相关，即冠状动脉病变越严重、斑块负荷越重的患者，其血浆DKK-1水平越高，可能与继发的炎症反应有关。因此，血浆DKK-1的水平或可作为预测冠状动脉病变严重程度的一个潜在指标。

目前，冠状动脉造影是诊断冠心病的金标准，但仍存在有创、费用高、存在一定风险等弊端，限制了其在临床的应用，对于无法行冠状动脉造影的患者，需要一种简单易行、无创、费用较低的检查手段。本研究证实了冠心病患者血浆DKK-1水平与患者冠状动脉Gensini评分呈正相关，提示DKK-1可作为冠心病的诊断及病情评估的一个潜在指标，值得更进一步的深入研究。

综上所述，冠心病患者血浆DKK-1水平增高，且其水平与冠状动脉病变程度呈正相关，可作为预测冠状动脉病变严重程度的一个潜在指标。