血液样本在不同处理条件下促肾上腺皮质激素测定的稳定性分析*

孔丽蕊，吴 风，黄亨建

(1.成都市郫都区中医医院检验科，成都 611730;2.四川大学华西医院实验医学科，成都 610041)

促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormore，ACTH)是垂体前叶分泌的一种由39个氨基酸残基组成的多肽化合物，是维持肾上腺正常形态和功能的激素，在下丘脑-垂体-肾上腺轴的功能调节中起重要的作用。ACTH在血浆中含量极低，半衰期短，降解快，对标本采集、运送、检测时间等都有特别要求。国际临床实验室标准化组织要求，采集ACTH标本应采用冰冻乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)管，采集后冰浴送检，低温离心机分离血浆和血细胞，然后立即用塑料或硅化玻璃分装冷冻保存或冰冻长期保存［1］。但检测前对血液的不同处理方式影响ACTH稳定性的分析鲜见报道，本研究评价标本采集后，血浆处理方式(离心血浆分离、离心血浆不分离和全血组)、保存温度(4℃和 22℃)及存放时间(0，2，4，12，24 h)对血浆中ACTH浓度的影响。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择本实验室自愿者2例，体检指标正常，年龄22～24岁。

1.2 研究方法 受检者于早晨8:00在无菌条件下真空负压采集静脉血2～3 ml于EDTA抗凝管，各采集六管。根据血浆不同处理方式将每位受检者血液分为三组，A组:低温离心分离血浆置于EP管;B组:低温离心后不分离血浆;C组:全血，只在测量时将其离心，检测完后混匀。每组共四管标本，其中两管标本4℃保存，另两管标本22℃保存。A，B，C 三组各四管标本分别于 0，2，4，12 和 24 h，Roche601全自动电化学发光仪检测ACTH两次，计算平均值。

1.3 统计学分析 测定血浆不同处理方式的每组不同时间点 ACTH 值，计算 2，4，12，24 h测定的ACTH结果与0 h测定ACTH结果的变化率，ACTH的质量规范TEA要求为19%(来自于CAP PT基于当前技术水平)，可接受的判断标准为＜1/2 TEA。

2 结果

2.1 各组在24h内各时间点的测定ACTH结果见表1。

表1 A，B，C组24 h内各时间点的ACTH结果(pg/ml)

2.2 A，B，C组ACTH结果变化率及趋势图 表2 和图1。

表2 24 h内A，B，C组ACTH值变化率(%)

图1 ACTH测定在不同处理条件下的稳定性

以0 h测定的ACTH结果为1(100%)，见表1，A组、B组两种血浆处理方式且4℃，22℃时2 h变化率＜5.0%，4 h变化率＞5.0%;12 h变化率约为10%。C组全血在4℃和22℃时2 h变化率＞10%。说明血浆的处理方式、温度及时间影响ACTH的稳定性。离心分离血浆和低温离心后不分离血浆在4℃和22℃时ACTH可稳定12 h，全血在4℃和22℃时ACTH稳定性不超过2 h。

3 讨论促肾上腺皮质激素(ACTH)是脊椎动物脑垂体分泌的一种多肽类激素，它能促进肾上腺皮质的组织增生以及皮质激素的生成和分泌，临床上常用其诊断或辅助诊断库欣病、垂体前叶功能减退等疾病［2］。但ACTH水平在体外随时间的延长有逐渐下降的趋势，主要是因为血液中细胞释放的蛋白水解酶降解ACTH［3］。ACTH稳定性与血浆处理方式、温度及放置时间有关。Evans等［4］在研究抗凝血浆于不同保存温度下检测激素类项目标本的稳定性时指出，标本在4℃保存时在18 h内的检测结果稳定，在30℃保存时结果仅可稳定8 h。林江［5］研究结果4℃时不同时间点的ACTH结果无趋势性变化，但室温放置的标本呈下降的趋势。本研究结果显示，离心血浆分离组将血浆离心分离后放置于EP管不与血细胞接触与离心血浆不分离组的ACTH稳定时间相当，两种血浆处理方式12 h变化率约为10%。全血组未经离心处置，由于血浆与血细胞充分混匀，血细胞中持续分泌的蛋白水解酶降解ACTH，使ACTH即使在4℃下保存降解也很快，2 h变化率约为10%。分析前质量控制贯穿于患者采样前准备、标本采集、保存、运送等多个过程。ACTH测定受采样时间、采集样品预处理方式等的影响，血浆ACTH极易被血液中肽酶水解成无免疫活性的代谢物。由此可见，分析前ACTH的测定稳定性主要取决于快速血浆分离和迅速冷却。根据离心血浆分离组与离心血浆不分离组的变化率可知，在12 h内温度对ACTH的稳定性影响并不大，超过12 h后温度的作用才体现出来。所以在急诊时不需冷却，只需快速离心分离出血浆即可，平诊时建议血液采集后快速离心分离血浆并低温保存［6］，以保证检测结果准确可靠。