影响TB-IGRA检测结果的因素分析及应对措施*

吴晓康，周维肖，冯 楠，张 毅，雷 珂，李丽华，刘泽世，许 楠，耿 燕

(西安交通大学第二附属医院检验科，西安 710004)

结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，简称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。据WHO估计，2016年全球结核病新发病例数为1040万例，170万人因该病死亡［1］。近年来，因免疫抑制剂的应用、艾滋病、吸毒和贫困等原因，发病率呈上升趋势。

目前，结核分枝杆菌的实验室诊断方法有涂片抗酸染色镜检法、结核杆菌血清抗体检测、结核杆菌蛋白芯片法、结核感染T淋巴细胞斑点试验(TSPOT)、结核杆菌核酸检测等。其中，以T-SPOT为代表的结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测方法在特异度、敏感度等方面优于其他方法，对结核分枝杆菌的诊断起到积极的作用，现已广泛运用于临床实验室。然而，实验前、中、后的一些因素会对结果和临床诊断产生重要影响，此方面研究报道较少。本文依据国产品牌万泰凯瑞的“结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测(TB-IGRA)试剂盒”及方法，分析其影响检测结果的各种因素，并提出应对措施以助于提高其检测的准确性和可靠性。

1 技术操作因素

1.1 溶血 标本溶血对本试验影响较大。笔者对同一患者溶血样本与重新抽血未发生溶血样本进行了比较，发现结果显著不同，以3份患者样本为例，见表1。

表1 溶血对样本检测的影响

标本溶血后，影响抗原刺激特异性淋巴细胞活化及分泌干扰素-γ(IFN-γ)减少，造成检测数值的假性降低;另外，血红细胞内含量较高的物质进入血清，可干扰测定中的反应过程及比色。溶血原因分为体外溶血和体内溶血，体外溶血常见:不规范的静脉采血［2］、过度摇晃或振荡力量过大、样本置于高温或者低温环境、不合适的离心速度和时间、样本分离前放置时间过久等。体内溶血常见:自身免疫性贫血、药物反应、重度感染、血管内播散性凝血、输液反应、心脏瓣膜和HELLP(溶血、肝酶升高和血小板减少)综合症等。应对措施:建议采用美国BD公司肝素抗凝真空采血管，规范的采血操作、混匀时动作轻柔、速度放慢。

1.2 样本量不足 本试验所需样本量在4 ml以上，临床科室采血量不足时，给后续上机检测造成检测量不足的影响。应对措施:首先和临床科室积极沟通，重新采集血样。但时常会遇见依从性不好的患者，这时拿原样本检测时，应尽量保证阴性对照管(N管)、检测管(T管)的所需量。

1.3 分装污染 采集静脉血后，需在2 h内分装到阴性对照管(N管)、检测管(T管)、阳性对照管(P管)中进行孵育培养，此步操作一般建议是按照N，T，P管顺序分装全血，其原因是不同培养管中试剂不同，此顺序减少分装过程中沾上培养管中试剂而污染下一管。同时，需要注意在分装前，最好将空置的培养管短时离心一下，将黏附在管盖上的试剂离心到底部，以减少开盖一瞬间管中液体溅出。

1.4 孵育的温度和时间 全血分装N，T，P三管后，需要及时放入37℃温箱培养22±2 h，此步是TB-IGRA检测最关键环节。本研究比较了孵育低温(＜25℃)和高温(＞39℃)对检测结果的影响，结果显示孵育温度过低或过高都会对检测结果产生显著影响，见表2。

表2 温度对样本检测的影响

分析其原因低温使得特异性抗原未能很好活化T淋巴细胞，从而影响γ-干扰素的产生;而温度过高，可以直接造成孵育过程中的溶血。

在检测管(T管)中，选用了致病性结核分枝杆菌特异性刺激抗原片段(卡介苗、其他分枝杆菌没有)与全血孵育，如果此患者感染过结核分枝杆菌，体内存在针对这些抗原的特异性T淋巴细胞，抗原即会被识别和递呈，刺激特异性T淋巴细胞增殖、释放细胞因子 γ-干扰素(IFN-γ)，通过检测 γ-干扰素来反映结核分枝杆菌是否感染。因而，此检测等同于体内一次免疫应答过程，因而对反应的温度要求较高，应保证37℃。

2 机体免疫因素本实验原理是依赖于特异性T淋巴细胞在结核抗原片段刺激下产生细胞因子(IFN-γ)的检测，患者的免疫状态如T淋巴细胞的数量和功能活性，就对结果产生重要影响。实验中为排除假阴性结果，设置阳性对照管，多数免疫功能正常的人群其阳性对照管(P管)值往往大于5000，若患者患有慢性疾病或免疫力低下，其阳性对照管(P管)检测数值往往偏低，可低至几十或者几百。应对措施:发现结果异常时，及时与临床沟通了解患者病情，待患者免疫功能恢复后复查，或者结合其他结核杆菌检测方法进行诊断［3］。笔者在检测中发现P管值低者，患者多为慢性髓系白血病、肺部肿瘤、老年慢性支气管炎等疾病，同期血细胞检测结果显示淋巴细胞或细胞因子数值降低。

3 药物等其他因素免疫抑制剂在临床上已经被广泛使用，如器官移植术后、血液性疾病、自身免疫性疾病等，此类患者并发结核分枝杆菌感染，检测结果会受到影响。多数抗肿瘤的化疗药物具有骨髓抑制或免疫抑制的作用，造成淋巴细胞基础水平降低，而影响TB-IGRA检测［4］。其他，影响到机体产生γ-干扰素分泌的因素，理论上都会影响到该检测，如服用糖皮质激素后引起γ-干扰素分泌增加，结果偏高。

综上所述，TB-IGRA检测基于特异性细胞免疫反应，具有高灵敏度，可用于潜伏感染的检测，有效提高早期感染检出的能力;采用结核分枝杆菌特异性抗原，排除卡介苗干扰，提高特异度，同时可鉴别非结核分枝杆菌肺部感染与肺结核，该方法具有明显的优势。因此，对影响检测结果各种因素的分析，有助于提高检测的准确性和可靠性，更好地为结核病诊断服务。