HPV癌基因E6/E7 mRNA在宫颈癌筛查中的临床意义

罗佩宜

宫颈癌是继乳腺癌的全球第二大癌症, 其发病率位居发展中国家女性妇科肿瘤的首位, 严重威胁着我国女性的生命健康［1］。研究显示, 宫颈癌的发生与 HPV感染密切相关［2］。事实上, HPV感染宫颈上皮细胞后将产生E6和E7两种癌蛋白, 癌蛋白通过钝化宿主细胞的抑癌蛋白如 p53、PRb等而导致细胞周期控制失常, 最终引发癌变［3］。因此, 在宫颈癌初步筛查中检测HPV癌基因 E6/E7 mRNA是否更具有诊断价值是目前临床研究的热点。在本项研究中, 作者就HPV癌基因E6/E7 mRNA在宫颈癌筛查中的检测价值进行了探讨,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1～12月于广东省东莞市清溪医院进行宫颈病变筛查的400例受试者作为研究对象, 纳入标准：①就诊症状主要表现为阴道分泌物增、异味、异常出血,宫颈炎；②均已婚或有性生活史；③对研究知情同意且经过医院伦理委员会的批准；④排除存在子宫切除手术史或宫颈手术史和盆腔放射治疗史的受试者；⑤在检查前未接受治疗。本研究受试者年龄23～65岁, 平均年龄(46.8±6.6)岁。

1.2 检测方法 均接受宫颈TCT检查及高危型HPV-DNA检测, 并对结果为阳性者进一步进行阴道镜下宫颈活检和HPV癌基因E6/E7 mRNA检测。采集标本前24 h内禁止性生活、阴道检查、阴道灌洗及用药。HPV癌基因E6/E7mRNA检测流程：①填写送检单必要信息。②专用采样器采集送检：样本类型分为：a.宫颈脱落细胞：将采样器的中央刷毛部分轻轻插入子宫颈管, 以便较短的刷毛能够完全接触到子宫颈口, 之后柔和的向前抵住采样器, 并按同一个时针方向转动采样器5整周, 切勿来回转动, 将采样器按入保存液小瓶底, 迫使刷毛全部散开, 共10次, 然后在溶液中快速摆动采样器以进一步的将细胞样本漂洗下来, 取下采样器,拧紧瓶盖送检。标本液需＞5 ml, 专用细胞保存液保存2周。拒检说明：在HPV-DNA保存液中保存的样本；与TCT标本共用时, 检测量＜3 ml。b.蜡块组织, 3个以上玻片。结果用光子数表示, 经Diaearta计算机软件转换为拷贝数。

1.3 分型标准 活检结果根据世界卫生组织(WHO)分类和诊断标准分为：正常/炎症、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级以及SCC。所有宫颈活检结果均采用双盲法由2名有多年临床工作经验的病理科医生共同确定, 若诊断不一致, 则由2名病理医师在双头镜下达成共识。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。p＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 TCT、HPV与宫颈活检结果 TCT检测显示阳性139例、阴性261例, HPV-DNA检测显示阳性175例、阴性225例。两种检测结果阳性者为264例。见表1。宫颈活检结果显示正常/炎症、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级以及SCC例数分别为178例、48例、21例、11例以及6例。见表2。

表1 400例受试者TCT及HPV-DNA检测结果［n(%)］

表2 264例受试者宫颈活检结果［n(%)］

2.2 不同宫颈活检分级的HPV癌基因E6/E7 mRNA表达阳性率和拷贝数比较 HPV癌基因E6/E7 mRNA表达阳性率及拷贝数随着病变级别的递增而增加, 且各CIN分级以及SCC患者HPV癌基因E6/E7 mRNA表达阳性率均明显高于正常/炎症者, 同时各级宫颈活检分级者HPV癌基因E6/E7 mRNA拷贝数两两比较差异具有统计学意义(p＜0.05)。见表3。

表3 不同宫颈活检分级的HPV癌基因E6/E7 mRNA表达阳性率和拷贝数比较［n(%),］

表3 不同宫颈活检分级的HPV癌基因E6/E7 mRNA表达阳性率和拷贝数比较［n(%),］

注：与正常/炎症比较, ap＜0.05；与CINⅠ级比较, bp＜0.05；与CINⅡ级比较, cp＜0.05；与CINⅢ级比较, dp＜0.05

宫颈活检分级 例数 HPV癌基因E6/E7 mRNA表达阳性 HPV癌基因E6/E7 mRNA拷贝数(copies/ml)正常/炎症 178 86(48.31) 176.26±43.05 CIN Ⅰ级 48 41(85.42)a 1168.58±248.05a CIN Ⅱ级 21 21(100.00)a 2975.30±479.44ab CIN Ⅲ级 11 11(100.00)a 4238.35±836.20abc SCC 6 6(100.00)a 7493.16±1654.82abcd

3 讨论

研究显示, 99.7%的宫颈癌患者存在HPV 感染, 而高危型HPV的持续感染可逐步引起CIN 与宫颈癌［4］。TCT检测和HPV-DNA是目前常用于宫颈癌的筛查手段［5-9］, 前者子宫颈检测结果与组织病理 CINⅠ～Ⅲ级的诊断符合率较低, 且存在较高的漏诊率；后者则存在检测特异性和阳性预测值低等不足。近年来, HPV癌基因E6/E7 mRNA检测成为宫颈癌筛查的研究热点, HPV的 E6、E7为HPV的两条癌基因片段,其中E6 蛋白与抑癌蛋白p53 结合, 通过阻断异常基因细胞的凋亡, 导致细胞永生化和宫颈病变的发生；E7 蛋白通过特异性结合pRb蛋白而抑制细胞周期的进展, HPV E6/E7 mRNA过度表达可使细胞生长抑制剂失活, 加速异常细胞的过度增殖, 导致宫颈癌的发生发展［10］。本项研究结果发现TCT检测显示阳性139例、阴性261例, HPV-DNA检测显示阳性175例、阴性225例。宫颈活检结果显示正常/炎症、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级以及SCC例数分别为178例、48例、21例、11例以及6例。HPV癌基因E6/E7 mRNA表达阳性率及拷贝数随着病变级别的递增而增加, 且各CIN分级以及SCC患者HPV癌基因E6/E7 mRNA表达阳性率均明显高于正常/炎症者, 同时各级宫颈活检分级者HPV癌基因E6/E7 mRNA拷贝数两两比较差异具有统计学意义(p＜0.05)。提示HPV癌基因E6/E7 mRNA 表达量与宫颈癌的发生发展有关联。

综上所述, HPV癌基因E6 /E7 mRNA拷贝数与宫颈病变程度相关, HPV癌基因E6/E7 mRNA可作为本地区宫颈癌的筛查手段之一, 对于预测宫颈病变的发生发展具有重要意义。