急性白血病患者血浆sHLA-G水平变化及其临床意义

潘登，王卫国，王伟伟，黄传荣

(1 阜阳市第六人民医院，安徽阜阳236001；2阜阳市人民医院)

急性白血病(AL)是发生于血液系统的恶性肿瘤，按肿瘤细胞类别不同，一般分为急性髓系细胞白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)。AL的发生与酪氨酸激酶的持续激活、造血调控相关转录因子的突变和肿瘤免疫逃逸等有关[1～3]。人类白细胞抗原G(HLA-G)属于HLA-Ⅰ类分子的一种，是机体的免疫耐受分子，膜型HLA-G主要分布于特定的豁免组织，可溶性HLA-G(sHLA-G)可在外周血检测到，以多种方式影响免疫效应细胞的应答反应[4]。AL发病的免疫学机制是当前研究的热点，而sHLA-G作为一种诱导免疫耐受的分子，在AL患者中水平如何变化、与参与天然免疫的效应细胞数量是否具有相关性，相关文献报道较少，本研究进行了相关探讨。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2013年4月～2015年9月在阜阳市人民医院诊断的AL患者54例，均符合沈悌主编《血液病诊断及疗效标准(第4版)》[5]中的诊断标准。男27例、女27例，年龄17～83岁、平均50岁，外周血白细胞(WBC)(2.1～52.5)×109/L、中位数17.1×109/L，C反应蛋白(CRP)12.01～60.21 mg/L、中位数29.24 mg/L，患者均为初诊，未接受白血病相关的治疗及输血处理。其中AML患者33例(AML组)、ALL患者21例(ALL组)。所有患者未接受化疗，无自身免疫性疾病，乙肝表面抗原、丙肝抗体和人类免疫缺陷病毒抗体阴性，无肾病、内分泌疾病、遗传性疾病等。另择体检中心的体检健康者29例作为对照组，男15例、女14例，年龄17～82岁、平均49岁。

1.2 血浆sHLA-G、CRP水平的检测 采取空腹静脉血3 mL，3 000 g离心后留取血浆，-80 ℃冻存。采用ELISA法检测血浆sHLA-G，sHLA-G试剂盒购自BioVendor公司。采用免疫比浊法检测血浆CRP。

1.3 外周血淋巴细胞亚群检测 抽取外周血2 mL，EDTA抗凝，每管分别加入相应量的抗体和外周血，避光室温染色，溶血10 min，离心弃上清，每管加入鞘液300 μL，立即于BD calibur流式细胞仪检测。CD45强阳性、低侧向散射光为成熟淋巴细胞群，CD3+TCRαβ+、CD3+TCRγδ+分别为αβT和γδT细胞，CD3-CD16+CD56+为NK细胞，CD3+CD16+CD56+为NKT细胞，收集淋巴细胞群细胞5 000～10 000个，Cell quest软件分析各细胞群在淋巴细胞中的比例，细胞比例用百分数(%)表示。

2 结果

2.1 三组血浆sHLA-G水平比较 AML组、ALL组、对照组血浆sHLA-G水平分别为(124.51± 49.12)、(125.99±58.79)、(41.55±15.19)μg/L，AML、ALL组高于对照组(P均<0.01)。

2.2 三组外周血淋巴细胞比例比较 AML、ALL组外周血γδT和NK细胞比例低于对照组(P<0.01或<0.05)，三组外周血αβT和NKT细胞比例比较，P均>0.05。见表1。

表1 三组外周血淋巴细胞比例比较

2.3 相关性分析 AL患者血浆sHLA-G水平与外周血NK细胞比例呈负相关(r=-0.47，P<0.05)，与血浆CRP水平呈正相关(r=0.46，P<0.05)，与外周血WBC、αβT、γδT及NKT细胞比例无相关关系(r分别为-0.09、0.05、0.10、0.02，P均>0.05)。

3 讨论

免疫系统耐受的形成是肿瘤逃逸的原因之一，AL患者存在T细胞数量异常、CD4+CD25+调节性T细胞比例增高、抑制性细胞因子IL-10和IL-35升高等[5～8]，证明患者存在免疫缺陷导致的肿瘤逃逸。

HLA-G是一种非经典的HLA Ⅰ类分子，作为一种免疫检查点分子具有强大的免疫调节功能，是免疫系统最重要的抑制性调节因子，能抑制多种免疫细胞发挥生物学效应，在许多肿瘤细胞中可检测到HLA-G的过表达[4,8,9]。由于AL细胞并不表达膜HLA-G[10]，故本试验仅检测了sHLA-G，发现AML和ALL患者sHLA-G水平较对照组均升高。高水平的sHLA-G能影响不同免疫细胞群的功能[11，12]：抑制T细胞的扩增和细胞毒作用，并可诱导T细胞凋亡，但可促使CD4+T细胞向具有免疫抑制功能的CD4+CD25+调节性T细胞分化；抑制外周血NK细胞增殖和杀伤功能，并诱导血液和子宫中的NK细胞释放促血管新生因子；通过下调趋化因子受体的表达而抑制T、B和NK细胞的趋化作用；抑制中性粒细胞吞噬功能，并下调活性氧的产生等。这些作用可导致机体免疫应答能力降低，造成患者免疫抑制状态，从而使AL细胞避免不同免疫效应细胞的识别和杀伤，使肿瘤细胞得以免疫逃逸。

本研究发现，AL患者外周血γδT和NK细胞比例降低，而αβT和NKT细胞比例变化不明显。αβT和NKT细胞包括多种细胞亚群，在病理状态下各细胞亚群变化并不一致，虽然临床上习惯于将CD3+CD16+CD56+的淋巴细胞定义为NKT细胞[13]，但这种标记并不严谨，故三组外周血αβT细胞和NKT细胞比例差异无统计学意义。天然免疫在机体防御中起着重要作用，广泛参与特异性免疫应答的启动和调节，γδT和NK细胞是机体内两种非常重要的参与天然免疫效应细胞。γδT细胞大多是CD4-CD8-细胞，识别抗原广泛并且无MHC分子的限制性，兼具NK细胞和细胞毒性T细胞的功能特点，在抗感染和抗肿瘤免疫中起着重要作用[14]。NK细胞是主要的抗肿瘤非特异性效应细胞，可以识别MHC Ⅰ类分子低表达、不表达或突变的肿瘤细胞，能抑制造血肿瘤细胞的生长，并且分泌的细胞因子能调节机体的免疫功能，增强机体抗感染和免疫监视的能力[15]。由于AL细胞MHC Ⅰ类分子低表达或不表达，使得AL细胞向细胞毒性T细胞抗原提呈方面存在重要缺陷，故γδT和NK细胞在抗AL的细胞免疫中起着更为重要的作用。本研究发现，AL患者γδT和NK细胞比例降低，提示AL患者存在天然免疫效应细胞缺陷。AL患者sHLA-G水平与NK细胞比例呈负相关、与CRP呈正相关，提示高水平的sHLA-G与NK细胞抗肿瘤能力降低有关，因为高水平sHLA-G能抑制NK细胞的增殖和活性。AL患者外周血sHLA-G与CRP水平呈正相关关系，提示高水平sHLA-G能抑制T细胞、吞噬细胞和中性粒细胞抗感染的功能。

综上所述，AL患者存在sHLA-G过表达，其可抑制机体的免疫应答功能，导致白血病细胞的免疫逃逸和机体抗感染能力下降；降低sHLA-G水平，恢复机体正常的免疫功能，也许是治疗AL的一种可选择方式。