弥漫性毒性甲状腺肿患儿血清IL-12、IL-10水平变化及临床意义

吴琼,陈凤仪,王薇

(宜昌市第一人民医院,湖北宜昌443000)

弥漫性毒性甲状腺肿(GD)是儿科临床常见的自身免疫性疾病，其发病机理主要包括遗传因素和主要组织相容性复合体有关的刺激性T细胞功能缺陷等免疫功能紊乱现象，临床症状主要表现为甲状腺功能亢进,甲状腺组织破坏特征不显著[1,2]。随着生活环境的变化，GD的发病率逐年升高，高达1%，甚至在某些地区更高，因此寻找GD的具体发病机制对于改善患者的生活质量具有重要意义[3]。近年研究发现,细胞因子在自身免疫性疾病的发生及发展过程中发挥重要作用，细胞因子作为免疫细胞生成的具有生物活性的肽类物质，通过与靶细胞表面相应的抗体结合而发挥不同的生物学效应[2]。甲状腺细胞可以表达细胞因子受体，而且可合成多种细胞因子，进而影响甲状腺细胞免疫相关因子的表达而调节GD的病理过程[4]。本研究通过探讨GD患儿血清白细胞介素(IL)-12和IL-10水平变化及其临床意义，旨在为临床阐明GD的具体发病机制提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2015年1月～2017年9月宜昌市第一人民医院儿科收治的GD患儿60例(研究组)，均符合诸福棠实用儿科学第8版中的相关规定[5]：具有甲状腺功能亢进症状，弥漫性甲状腺肿及相关甲状腺激素滴度下降。纳入标准：①患儿年龄≤14岁；②所有患儿的临床资料完整，且依从性高；③经患儿家长同意，并签署知情同意书。排除标准：①合并患有心、肝、肾等重大脏器病变；②合并患有其他自身免疫性疾病；③炎性疾病；④有甲状腺病史及遗传史；⑤入组前半个月使用免疫抑制剂。入组患儿中男17例、女43例，年龄8～13(10.87±1.23)岁，病程1～8(5.12±0.63)个月，体质量指数16.0～18.4(17.18±0.65)kg/m2。按照发病及治疗的不同阶段[5]分为新发病组(n=19)、未缓解组(n=25)和缓解组(n=16)。新发病组：临床表现为典型的甲状腺功能亢进症状，如多汗、食欲增加、大便次数增加等，血清中游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)水平升高或促甲状腺激素(TSH)降低，同时甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺微粒体抗体(TMAb)及促甲状腺素受体抗体(TRAb)阳性。未缓解组：采用抗甲状腺药治疗1～4个月，临床症状缓解，甲状腺功能发生好转，但是并未恢复至正常。缓解组：采用抗甲状腺药治疗1～6个月，临床症状消失，甲状腺功能恢复正常。另外选择于我院进行体检的健康儿童32例作为对照组，男10例、女22例，年龄9～13(10.62±1.35)岁，体质量指数16.4～18.7(17.21±0.71)kg/m2。各研究组基本资料差异无统计学意义(P均>0.05)。对照组与研究组性别、年龄及体质量指数有可比性。

1.2 治疗方法 患儿均采用抗甲状腺药物治疗，给予甲硫咪唑15～60 mg/d，口服，3次/d，根据患儿的病情调整给药量，将其剂量减少至5～30 mg/d，维持治疗3个月。

1.3 血清IL-12和IL-10水平的检测 受试儿童均于清晨空腹抽取外周静脉血3 mL，置于不含肝素钠的采血管中，室温下静置20 min，以3 000 r/min离心10 min，离心半径为3 cm，分离上清液，即得血清。采用酶联免疫吸附法检测血清中IL-12和IL-10水平，试剂盒购自南京建成生物工程研究所，严格按照试剂盒的说明书进行操作。

1.4 甲状腺功能相关指标检测 取部分血清检测两组受试儿童游离甲状腺功能指标(FT3、FT4和TSH)和甲状腺自身抗体(TMAb、TGAb和TRAb)。采用化学发光法测定FT3、FT4和TSH水平，试剂盒购自德国拜尔公司；采用放射免疫分析法测定TMAb和TGAb水平，试剂盒购自中国原子高科核技术应用股份有限公司；采用酶联免疫吸附法检测TRAb水平，试剂盒购自天津医科大学药厂。严格按照试剂盒的说明书进行操作。

2 结果

2.1 两组血清IL-12、IL-10水平及甲状腺功能相关指标比较 与对照组比较，研究组血清IL-12、IL-10、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均升高，而血清TSH水平降低(P均<0.05)。见表1。

表1 两组血清IL-12、IL-10水平及甲状腺功能相关指标比较

2.2 不同病情GD患儿血清IL-12、IL-10水平及甲状腺功能相关指标比较 新发病组患儿血清IL-12、IL-10、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于未缓解组和缓解组，而血清TSH水平低于未缓解组和缓解组；未缓解组血清IL-12、IL-10、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于缓解组，而血清TSH水平低于缓解组(P<0.05)。见表2。

表2 不同病情GD患儿血清IL-12、IL-10水平及甲状腺功能相关指标比较

注：与缓解组相比，*P<0.05；与未缓解组相比，#P<0.05。

2.3 GD患儿血清IL-12、IL-10水平与甲状腺功能相关指标的相关性 GD患儿血清IL-12水平与TSH呈负相关(r=-0.709，P<0.05)，而与FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb无相关性(r分别为0.157、0.229、0.102、0.139、0.169，P均>0.05)；GD患儿血清IL-10水平与FT3、FT4呈正相关(r分别为0.714、0.721，P均<0.05)，而与TSH、TMAb、TGAb和TRAb无相关性(r分别为-0.173、0.228、0.117、0.192，P均>0.05)。

3 讨论

GD发病症状不明显，发展缓慢，患儿最初是情绪不稳定、多动、注意力不集中等轻微症状，随后出现食欲增加、体质量下降、多尿、心悸、行为异常及学习成绩下降等，患儿甲状腺肿大，接近一半患儿伴随出现非浸润性突眼[2]。75%的儿童甲状腺功能亢进病因是由GD诱发，儿童GD的发病率低于成年人，发病率随着年龄的增加而升高，多数患儿均出现在青春期，女性的发病率约是男性的5倍，同时随着加碘盐的使用，发病率逐年升高[6]。研究发现，GD患儿的甲状腺功能亢进症状与机体Th2细胞及其分泌细胞因子水平密切相关，其发病机制主要与自身免疫功能紊乱有关[2,4]。细胞因子种类众多，通过与特定受体结合而发挥不同的生物学效应，同时可以衔接神经系统、内分泌系统和免疫系统；其可通过影响T淋巴细胞、B淋巴细胞的生长和分化而直接影响甲状腺滤泡细胞，上调组织相容性复合物-Ⅱ分子和黏附分子的释放；另外，其能够改变甲状腺滤泡细胞的功能[2]。因此，细胞因子网络异常可影响GD的发生及发展。

IL-12主要由Th1细胞产生，可增强自然杀伤细胞的毒性，从而激发迟发性超敏反应，主要介导细胞免疫应答；而IL-10主要由Th2细胞产生，促进多种免疫球蛋白的产生，主要介导体液免疫应答[7]。Th1和Th2细胞因子诱导的免疫反应相互影响，IL-12促进Th0分化为Th1细胞，而IL-10促进Th0转化为Th2细胞，抑制Th1细胞分泌细胞因子，因此Th1和Th2细胞分泌的细胞因子维持Th1/Th2的平衡，激活免疫反应[7]。IL-12细胞因子家族由IL-12、IL-23、IL-27和IL-35组成，其中IL-12的特征为异质二聚体结构与其他成员的结构共享，由α和β两个亚基组成，两个亚基分别与IL-6和IL-6受体结构相似[8]，是调节免疫系统反应最重要的细胞因子。IL-12作为多活性的细胞因子，可平衡Th1/Th2的比例，进一步增强Th1的作用，并促进IL-2等细胞因子的产生[9]；同时诱导STAT4的磷酸化，增加干扰素-γ的产生量，并触发T-bet的表达而上调Th1反应强度和干扰素-γ分泌量[8,10]；诱导自然杀伤细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞产生大量的肿瘤坏死因子-α，并增加靶细胞Fas分子的表达，从而通过Fas-FasL途径杀伤靶细胞[11]。对比GD患儿与健康儿童血清IL-12和甲状腺功能指标水平变化情况，结果发现研究组血清IL-12水平均高于对照组，同时研究组血清FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于对照组，而血清TSH水平低于对照组，不同病情GD患儿血清IL-12和甲状腺功能指标之间的差异具有统计学意义。新发病组患儿血清IL-12、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于未缓解组和缓解组，而血清TSH水平低于未缓解组和缓解组；同时未缓解组血清IL-12、FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb水平均高于缓解组，而血清TSH水平低于缓解组；另外相关性分析结果发现GD患儿血清IL-12与TSH呈负相关，提示IL-12与GD的发生、发展及治疗后的转归有关。GD患儿体内IL-12水平升高是由于高浓度甲状腺激素长期刺激导致的[12]。

IL-10是分子量为35 000～40 000的酸敏感蛋白，作为抑制性淋巴细胞，主要由Th2细胞分泌，其基因定位于1号染色体上，并且由单核细胞、淋巴细胞、巨噬细胞产生，生物学活性多种多样，是细胞免疫的负性调节因子[2]。IL-10影响自身免疫功能主要通过以下几种方式发挥作用[3,8～13]：①抑制IL-12类淋巴因子的合成及活性；②降低相应抗原的递呈能力；③通过减少干扰素-γ的产生而抑制自然杀伤细胞的活性；④抑制Th0转化为Th1，抑制炎症细胞的转移；⑤通过刺激B淋巴细胞调节体液免疫；⑥与树突细胞诱导Th2反应，促进Th0细胞转化为Th2细胞，进而使得B淋巴细胞增殖、分化为浆细胞，增强机体的体液免疫。研究组血清IL-10水平均高于对照组，同时不同病情GD患儿血清IL-10的差异具有统计学意义；新发病组血清IL-10水平均高于未缓解组和缓解组，同时患儿未缓解组血清IL-10水平均高于缓解组，说明IL-10水平与GD患儿的病情有关。另外GD患儿血清IL-10水平与FT3、FT4呈正相关，提示IL-10水平升高参与GD病情的发展。其原因是IL-10诱导甲状腺上皮细胞主要组织相容性复合体-Ⅱ类抗原表达异常，通过旁分泌和自分泌方式影响免疫功能，激活自身的T淋巴细胞和B淋巴细胞，加重刺激T细胞的损伤。另外，本研究中GD患儿血清IL-12水平与FT3、FT4、TMAb、TGAb和TRAb无相关性；血清IL-10水平与TSH、TMAb、TGAb和TRAb无相关性，可能与选择的病例数量过少及地域性有关。

综上所述，GD患儿血清中IL-12和IL-10水平异常升高，并且与甲状腺功能异常密切相关，能够反映病情。