山绿茶3种不同炮制品醇提物对正常小鼠糖耐量的影响*

山绿茶(Ilex hainanensis Merr)属冬青科冬青属植物，多用其干燥叶，具有清热解毒，平肝潜阳，活血化瘀的功效［1］，用于降血压、降血脂、降胆固醇及冠心病、脑血管意外所致的偏瘫以及风热感冒、肺热咳嗽、咽喉水肿、扁桃体炎、痢疾等病症［2］。其主要化学成分包含黄酮类、三萜酸类、绿原酸及山绿茶苷等，而经过不同方法炮制后的山绿茶中化学成分含量也各不相同。近年对糖尿病小鼠、高脂鹌鹑以及麻醉猫进行降血糖、降血脂、降血压的研究，结果显示山绿茶醇提物具有降糖，降脂，降压作用，且降血糖作用机制可能与胰岛素分泌增加有关［3-4］。本课题早期研究发现不同炮制方法的醇提物总黄酮含量不同，以清炒炮制含量最高，本研究以此为基础，对山绿茶3种不同炮制品的醇提物对正常小鼠糖耐量可能产生的影响进行研究。

1 材料与方法

1.1动物SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量18～22 g，广西医科大学实验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK桂2014-001，饲养环境：恒温恒湿。

1.2仪器与试剂TU-1901双光束紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；配套放免专用冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；LG16-W型离心机(北京医用离心机厂)；AE100型1/10000电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；葡萄糖(Glu，石家庄市华营联合Glu厂，批号：023974)；盐酸肾上腺素注射液(Adr，天津金耀氨基酸有限公司，批号：021121，规格：l mg/mL)；Glu试剂盒(四川省迈克科技有限责任公司，批号：0941365)。

1.3醇提物本药材经广西中医药大学陈勇教授鉴定，符合广西中药材标准(1990年版)山绿茶项下药材品种，鉴定为冬青科冬青属植物海南冬青的干燥叶。清炒炮制法：将山绿茶鲜叶置于炒锅中，用中火或武火加热，炒至药材表面呈焦黄或焦褐色，内部颜色加深，有焦香气味时即可取出，后用70%乙醇回流提取2次，分别为10倍乙醇10小时和8倍乙醇1.5小时，合并滤液，回收乙醇浓缩后备用；传统炮制法：将山绿茶的鲜叶用热锅(260～280℃)翻炒 5分钟，杀青，后用手揉搓，其次复炒2～3次，至叶色呈暗绿色，略有光泽为宜，取出，放凉，醇提方法同前；阴干炮制法：将山绿茶鲜药材放在阴凉处晾干即可，醇提方法同前。后以绿原酸和芦丁为标准采用高效液相色谱法测其黄酮类成分含量，见表1。

表1 山绿茶3种不同炮制品中芦丁和绿原酸含量 mg/g

1.4实验方法［5］

1.4.1 对口服葡萄糖致瞬时高血糖(Glu性)小鼠糖耐量的影响 正常小鼠120只，随机分为12组，灌胃给药含生药 20、15、10 g/kg药物，其中15 g/kg为早期预实验结果提示的山绿茶对小鼠血糖的有效浓度，在此基础上，增加和减小相应浓度观察各炮制品药效学。给药14天后禁食12小时，然后各组小鼠给药0.5小时后，眼眶取血测空腹0小时(即时)血糖。0.5小时后除空白组小鼠腹腔注射(ig)等量生理盐水外，其余小鼠均ig Glu溶液2.5g/kg，眼眶取血测定给予Glu后0.5、1、2小时的血糖值。按Glu试剂盒GOD-POD法测空腹血糖值。并以空腹血糖值作为零时，计算不同时间血糖值的变化。

1.4.2 对腹腔注射肾上腺素致瞬时高血糖(Adr性)小鼠糖耐量的影响 正常小鼠120只，随机分为12组，分组、给药及给药剂量同“1.4.1”项下方法，给药14天后禁食12小时，然后各组小鼠给药0.5小时，取血测空腹0小时(即时)血糖。0.5小时后除空白组小鼠ig等量生理盐水外，其余小鼠均 ig Adr 240 mg/kg，测定给予 Adr 后 0.5、1、2 小时的血糖值。按Glu试剂盒GOD-POD法测空腹血糖值，并以空腹血糖值作为零时，计算不同时间血糖值的变化。

1.5统计学方法采用SPSS 13.0软件分析数据，计量资料以(±s)表示，采用t检验，方差不齐采用t检验校正公式，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1山绿茶3种不同炮制品醇提物对G l u性小鼠糖耐量的影响模型组较空白组血糖升高(P＜0.01)，给药前各给药组间血糖比较差异无统计学意义(P＞0.05)，说明葡萄糖负荷成功；与模型组比较，灌胃Glu后0.5小时，传统品(20、15g/kg)组以及清炒品和阴干品各剂量组对Glu引起高血糖小鼠血糖升高均有抑制作用(P＜0.01)。给药后1，2 小时时传统品(20、15g/kg)组、清炒品(20g/kg)组、阴干品(20、15 g/kg)组仍有抑制血糖升高的作用(P＜0.05)，提示山绿茶3种不同炮制品醇提物对Glu性高血糖小鼠均有治疗作用，见表2。

表2 山绿茶3种不同炮制品对G l u性高血糖小鼠血糖的影响

2.2山绿茶3种不同炮制品醇提物对A dr性小鼠糖耐量的影响模型组较空白组血糖升高(P＜0.01)，且给药前各给药组间比较无明显差异(P＞0.05)，说明造模成功；与模型组比较，ig Adr后0.5、1 小时传统品(20、15 g/kg)剂量组、清炒品(20、15 g/kg)组和阴干品(20 g/kg)组对Adr引起高血糖小鼠血糖升高均有抑制作用(P＜0.01)。ig Adr后1小时3个炮制品低剂量(10 g/kg)组对高血糖小鼠血糖升高无降低作用(P＞0.05)。提示山绿茶3种不同炮制品醇提物对Adr性高血糖小鼠均有治疗作用，见表3。

表3 山绿茶3种不同炮制品对A dr性小鼠血糖的影响

3 讨论

糖耐量减低是糖尿病发展过程中的一个中间阶段，若干年后这些人群大多数可能会发展为糖尿病［6］，而且糖耐量减低人群大血管病变的发生率较普通人群高。因此，防止由糖耐量减低发展为糖尿病，甚至使之恢复到正常糖耐量是防治糖尿病的一项重要措施，也是评价糖尿病防治药物的一个重要指标［7］。在血糖浓度调节中，肝脏是一重要器官，其工作受神经和激素控制，其中包括胰岛素、胰高血糖素、Adr等。本研究探讨山绿茶3种不同炮制品的醇提物对正常小鼠糖耐量的干预作用，结果表明山绿茶3种不同炮制品醇提物可抵抗Adr性糖尿病小鼠血糖上升，并且抑制外源性Glu引起的血糖升高，结合山绿茶富含黄酮类、三萜及其皂苷类、咖啡酰奎宁酸类和半萜苷类等化学成分［8-9］，提示其降糖作用与山绿茶3种不同炮制品中总黄酮有关［10-11］。在已发现黄酮类中，芦丁和绿原酸的作用是清除细胞活性氧自由基，而芦丁与绿原酸已成为山绿茶质量标准应用较多的对照品［12］。本研究结果表明清炒组的绿原酸和芦丁的含量最高，但其具体耐糖机理并不十分清楚。本研究后期发现山绿茶降糖机制可能与增加正常小鼠肝糖元的贮存，减少肝糖元分解，促进糖的有氧氧化而加速糖元合成等因素有关。这一发现为山绿茶进一步开发成为防治糖尿病的药物提供了一定理论依据。