6 868例新生儿疾病筛查滤纸片洗脱不全结果分析及原因探讨

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(四川省妇幼保健院，四川 成都 610045)

新生儿疾病筛查是指对某些危害严重的先天性遗传性代谢疾病采用快速、敏感、简单的检验方法在新生儿期进行筛查，其目的是在临床症状未表现之前，做到早发现、早诊断、早治疗，避免因患儿脏器发生不可逆的损害所导致的生长发育、智力发育障碍甚至死亡[1]。血片采集是新生儿遗传代谢病筛查技术流程中首个重要环节，标本合格与否，直接影响实验室检测结果。洗脱不全在不合格标本中，占了极大的比重[2]。本文对四川省妇幼保健院2008 年至2016年6 868例洗脱不全的标本检测结果进行分析，找出其与正常样本检测结果的差异、发生的原因，并提出解决对策，减少不合格标本发生率，确保筛查结果的准确性与可靠性。

1资料与方法

1.1资料来源

将2008年1月至2016年12月在四川省新筛中心筛查血片中6 868例未洗脱样本，与2015年至2016年在四川省新生儿疾病筛查中心进行检测的550 664例合格样本的检测结果进行分析。

1.2标本采集和递送

按照《2010年卫生部新生儿疾病筛查技术规范》的要求，于新生儿出生72h后，于其足跟的内、外侧采血，滴于903特殊滤纸片上，待血斑自然晾干装入塑料封口袋中密封，置于2℃～8℃ 冰箱保存，每周快递到四川省新生儿疾病筛查中心实验室检测。

1.3仪器和试剂

试剂使用广州丰华有限公司提供的TSH检测试剂盒；仪器由芬兰WALLAC公司提供Vitor2-1420型多标记分析仪，汇松PW-960全自动洗板机，1296-003DELFLA振荡器。

1.4实验方法和质控

实验方法为时间分辨免疫荧光分析法(DELFIA)；每批试剂盒均带有低、中两个水平的质控样品，质控结果均符合要求。每年参加卫生部临床检验中心干血片TSH 室间质量评价，成绩合格。

1.5统计学方法

采用SPSS 22.0软件对检测数据进行分析，计数资料采取卡方检验进行统计推断，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1检测结果分析

6 868例洗脱不全样本的检测结果与550 664例正常样本，频数分布有统计学意义(χ2= 2 665.026，P<0.05)，其中0～1.9，2.0～3.9这两个数据段尤为明显，见表1；正常样本的初筛阳性率为1.40%，洗脱不全样本的初筛阳性率为0.32%，前者的初筛阳性率明显高于后者，两者比较差异有统计学意义(χ2=57.821，P<0.05)。

表1 6 868例洗脱不全和550 664例新生儿足跟滤纸干血片TSH测定值频数分布情况(n)

注：本中心的阳性切值为8mIU/L。

2.2两组数据的统计性指标分析

6 868例洗脱不全样本检测结果与550 664例正常洗脱样本进行统计学分析，各项指标见表2，两组数值除最小值，其他各指标均是正常洗脱样本高于洗脱不全的样本，这也充分证明了是否正常洗脱直接影响了测定结果。

2.3洗脱不全与季节的关系

随着气温的逐渐升高，洗脱不全的血片个数逐渐增加，见表3，其中7、8月由于是酷暑季节，洗脱不全例数为全年最高，这两个月的例数占了全年的39.6%。

2.4洗脱不全样本的罕见情况

洗脱不全样本的频数分布中可见6 868例洗脱不全的样本，其中有22例结果是阳性，见表1，这在洗脱不全的样本中是极其少见的。按照实验原理来讲，洗脱不全的样本，其检测值应该很低，因为需要测定的成分几乎没有萃取，这在表2的统计数据中也有充分显示，但是这22例阳性病例的存在，说明了并不是所有洗脱不全的样本，其检测值都低于正常值。

表2 TSH水平的统计学指标(mIU/L)

Table 2 Statistical indicators of TSH concentration (mIU/L)

统计学指标洗脱不全样本正常洗脱样本均值1.252.32中位数11.8最大值26.2604最小值00P751.52.8P902.24.1P952.95.3P995.58.8

表3 6 868例洗脱不全血斑与季节的关系

3讨论

3.1洗脱不全的定义

洗脱不全，是指在实验过程中，加入试剂后，试剂不变色，血斑不脱色，试剂未将血液从滤纸片上洗脱下来(TSH测定过程中能够肉眼识别)，从而导致实验测定的结果不准确，无法出具可靠的实验报告[3-4]。传统的观念认为，洗脱不全的样本检测结果的数值都很低，但是根据本文表1数据的分析，洗脱不全的样本也有阳性结果，虽然所占比例不高，但仍然是有阳性结果的。本实验室对阳性的22例病人，重新采集血片召回复查，筛查结果均为阴性；随后分别在3个月、半年对这些患者进行电话随访，尚未发现一例确诊甲低。但是究竟是什么原因导致这些洗脱不全样本，测定结果为假阳性，尚未找到可靠的依据。

3.2洗脱不全样本和正常样本测定结果的比较

从表1、表2的结果分析可见，洗脱不全的样本测定值是明显低于正常样本的，99%的可信限值仅为5.5。阳性率也低于正常样本，见表1(洗脱不全样本的阳性率为0.32%，正常样本的阳性率为1.40%)。因此，对于这部分病人，应该当作可疑阳性病人去管理，及时通知采血单位，加强追踪，力争在最短时间内召回，避免因为洗脱不全导致TSH结果的偏低而产生假阴性，从而导致漏诊。

3.3洗脱不全样本与季节的关系

从表3中可以看出，随着气温的升高，洗脱不全的样本逐渐增多，5至9月洗脱不全的样本占整体的79.6%，其中7、8月尤为突出，10月至次年4月仅占20.4%，这表明洗脱不全的现象大多发生于高热酷暑季节[5]。在高温情况下，采血员仍将干燥的血片放在室温保存，使血片水分被抽干或者过度干燥，造成血斑固化，成为夏季洗脱不全的主要原因；另外递送过程过长，血片未置于低温环境，且气温高于其他季节，也会导致血液无法从血片中洗脱下来。所以在高温的季节，血片自然晾干后，应立即放入密封的袋子中冷藏保管，血片尽早递送，递送过程中，血片最好能存放在低温容器中[6]。如果没有低温容器，也建议采用快递的方式，将血片尽快邮寄到新筛实验室，切忌使用平邮，拖延递送过程，导致洗脱不全。

3.4洗脱不全的其他因素

从表3中可以看出，在最冷的几个季节，也仍然有洗脱不全的血片，这就说明，洗脱不全的原因不是仅仅和气温有关，还存在着其他因素[7]。本中心每年均安排了2～3次到采血机构，对新生儿疾病筛查工作进行质量检查。通过现场检查、询问的方式，综合目前了解的情况，分析洗脱不全的原因如下：①过度干燥(血斑固化)，涉及太阳暴晒、暖气烘干、空调吹干；②蛋白质变性失活，涉及紫外线、消毒物品、化学试剂、装修或新家具挥发出的甲醛等[5]；③其他污染，如被血清、尿、消毒剂、胶水、浆糊或其他液体污染；④蚊虫叮咬或有虫卵污染血片；⑤空白滤纸片保存不当，也会引起洗脱不全的现象，所以空白滤纸片安放应和血斑一样重视，妥善保管，保存在干燥通风的地方，同时防止各种污染；⑥最近发现，有单位将被水弄湿的血片，干燥后又寄到本中心，这样的血片当然是不合格的，同时实验结果显示，也确实洗脱不下。

3.5质量控制

血片洗脱不全是实验中常见的问题，由于它不同于普通的不合格血片，光看血片无法辨别，只有在实验过程中才能被发现，试剂已用，成本已投入，得到的结果却不可信，也没办法出报告，需重新召回新血片，重新做实验。而且如果没解决基本问题，会连续性的出现，几倍的成本，可能都得不到一次可信的结果。所以这种情况一旦发生，我们应该第一时间与采血单位联系，询问是否有导致洗脱不全的因素，如果有，应告知其改进方式；如果暂时未发现任何问题，在告知其所有注意事项后，观察下一批血片是否仍然有相同情况出现，如果仍有，马上安排现场检查的方式，直到找到问题的根源，解决这种现象为止。同时对采血单位，要再次强调，被任何液体弄湿了的血片，应该当作不合格血片处理，要求召回重新采血；而不是等其自然晾干后，再寄往新筛中心，应严格杜绝这种自欺欺人的现象出现。

新生儿疾病筛查是一个多环节的系统工程，血片采集为筛查的第一步，从事筛查工作的每个人员，都必须强化质量意识，增加责任心，严格按照规范进行采血及标本保存递送，加强各筛查环节的质量控制，以促进新筛工作有序开展。