忍冬叶绿原酸含量测定

黄兴龙等

【摘要】目的：研究忍冬叶的化学成分，为忍冬叶药材标准的制定提供实验数据和科学依据。方法：采用高效液相色谱法测定了绿原酸的含量。结果：绿原酸含量不得少于0.83%。结论：为忍冬叶药材的准确鉴定和质量标准的制定提供了科学依据和资料，也为忍冬叶的开发应用研究奠定了基础。

【关键词】忍冬叶；质量标准；高效液相

1实验方法

1.1色譜条件

色谱柱：Damonsil C18 柱（250x4.6mm，5μm）：流动相：乙睛：0.4%磷酸（14：86），临用前以0.45gm微孔滤膜过滤并经超声脱气处理；检测波长：327mm：柱温：35℃；流速：0.8mL/min：进样量20μl。

1.2对照品溶液的制备

精密称取绿原酸标准品4.33mg，置25mL棕色容量瓶中，精密加入水，定容至刻度，摇匀，备用。

1.3供试品溶液的制备

取药材粉末（过四号筛）0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，称定重量，水浴回流45min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过。弃初滤液，精密吸取续滤液5ml置25ml棕色容量瓶中，加水至刻度，摇匀，再用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

1.4工作曲线的绘制

分别精密吸取绿原酸对照品溶液各0.5、1、1.5、2、2.5、3mL，置10ml的容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤；按上述色谱条件进行测定，设定进样体积为20μL，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，绿原酸进样量为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=29.99X+2.8893，r=0.9999，（n=6）。表明绿原酸在0.1732gg/ml～1.0392gg/ml范围内呈良好的线性关系，结果见表1、图1。

1.4.1精密度考察

将4号供试品溶液按上述色谱条件进行测定，连续进样6次，每次进样量20μL，测定峰面积，结果见表，RSD=1.62%（n=6），表明精密度良好。如表2所示。

1.4.2重现性考察

精密称取6份同一样品（4号），各约0.25g，按上述供试品溶液的制备方法平行制备6份供试品溶液，再上述色谱条件测定，进样体积为20μL，得出绿原酸峰面积的RSD=2.10%（n=6），表明重现性良好，结果见表3。

1.4.3稳定性考察

精密称取4号供试品溶液，按上述色谱条件测定，设定进样体积为20μl，

每隔2h进样1次，共进6次，测定峰面积，结果见表，RSD=2.82%（n=6），表明样品溶液在lOh内稳定。如表4所示。2加样回收实验

取6份干燥至恒重的己知含量的忍冬叶粉末（4号）约0.25g，精密称定后，分别加入绿原酸对照品约2mg，按上述条件进行供试品溶液的制备；按上述色谱条件测定进行测定含量，按公式回收率一（测得量一样品中的含量）/（加入对照品的量）×100%计算，结果表明平均回收率为98.48%，RSD=2.65%（见表5）。

2.1样品含量测定

按上述色谱条件进行测定，进样量为20μl，测定不同样品忍冬叶中绿原酸的百分含量。

2.2数据统计与分析

将测得数据采用SAS统计分析软件进行显著性分析。

3结果与分析

本次实验选用了15批忍冬叶样品，每个样品测得了6个含量，不同样品忍冬叶中绿原酸的平均含量（以干燥品计算）以及经统计学处理的结果见表6。

研究结果显示，15个样品中绿原酸含量为0.65～2.56%，样品间表现出较大的差异。10号样品叶中绿原酸的含量最高，为2.51±0.048%，并与其它样品存在显著性差异；样品6、2、14、1、5、9、3中绿原酸含量为1.48～2.30%，属于含量较高的样品，己经达到了《中国药典》规定的金银花中绿原酸的含量，且与其它样品存在显著性差异；样品13、7、8、12、15、4叶中绿原酸含量为0.83～1.38%，属含量较低的样品，并与其它样品比较具有显著性差=异；样品11号叶中绿原酸含量最低，仅为0.67+0.018%，亦与其他样品存在显著性差异。

（通讯作者：张丽艳）