小鼠阿奇霉素雾化吸入后有效性和安全性评价

李金琴，童 瑾，秦娅蓝

(1.重庆医科大学附属第二医院 呼吸内科， 重庆 400010； 2.宜宾市第二人民医院 呼吸内科，四川 宜宾 644000)

阿奇霉素除抗菌活性以外，其免疫调节及抗炎作用亦被逐渐认可。在其临床运用日益广泛的同时，该药的不良反应亦备受关注，最严重者可发生QT间期延长并尖端扭转型室性心动过速[1]。雾化给药可直接作用于靶器官，降低全身不良反应，但国内外鲜有针对该药雾化治疗的报道。本研究旨在探讨其雾化用药的安全性和有效性，为其进一步临床应用提供实验室依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂：阿奇霉素针剂(东北制药厂)；阿奇霉素原料药(湖北黄石世星药业有限公司)；BCA蛋白分析试剂盒(江苏南京凯基生物公司)。

1.1.2 实验对象：SPF级BABL/c 8周龄雌鼠20～23 g，60只[重庆医科大学动物中心，合格证书：SYXK(渝)2012-0001]。

1.2 方法

1.2.1 实验小鼠处理：用0.9%氯化钠溶液与阿奇霉素粉针配制剂量分别为10、20、50和100 mg/kg雾化液；测得各溶液pH在6.79～6.92之间。将小鼠随机分成6组，放入不完全封闭的雾化箱；空白对照组不予以雾化处理， 实验组使用空气压缩雾化器分别给予0.9%氯化钠溶液和各剂量阿奇霉素溶液雾化。

1.2.2 样品收集：雾化5 d后，分别取肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)、采眼球血(存放于-30 ℃)和取肺组织(存放于10%甲醛溶液)。

1.2.3 BCA法测BALF中白蛋白含量：全自动生化分析仪测其中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase，LDH)活性。

1.2.4 HE染色：光镜下观察肺组织病理改变。

1.2.5 高效液相色谱法测BALF及血中阿奇霉素浓度：通过尿素稀释法计算肺上皮黏液层(lung epithelial mucus layer,ELF)中阿奇霉素浓度[2](图1，2)。

2 结果

2.1 阿奇霉素雾化溶液刺激性的研究：阿奇霉素组100 mg/kg组的BALF中的白蛋白含量及LDH明显升高(P<0.05)(表1)。

2.2 阿奇霉素溶液雾化对呼吸道的病理影响：空白组、0.9% 氯化钠溶液组、10～50 mg/kg阿奇霉素组肺脏组织结构完整，无炎性反应表现。100 mg/kg阿奇霉素组中肺间质及血管周围见少许中性粒细胞浸润，肺泡壁轻度断裂塌陷(图3)。

A.standard; B.blank serum; C.serum+ standard; D.serum sample图1 血浆阿奇霉素色谱图Fig 1 Chromatograms of serum azithromycin

A.standard; B.blank BALF; C.BALF+standard; D.BALF sample图2 BALF阿奇霉素色谱图Fig 2 Chromatograms of BALF azithromycin

groupalbumin(μg/μL)LDH(U/L)blank 0.394±0.083 6.600±2.702normal saline 0.440±0.115 7.400±3.20910 mg/kg Az 0.510±0.208 8.200±2.58820 mg/kg Az 0.544±0.178 8.600±2.70450 mg/kg Az 0.656±0.241 9.800±3.493100 mg/kg Az 0.732±0.228* 11.204±4.231*

*P<0.05 compared with the blank group; Az.azithromycin

2.3 ELF及血中药物浓度比较：小鼠ELF中的药物浓度大于相应雾化组的血药浓度，前者大于肺炎支原体及嗜肺军团菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)(表2)。

3 讨论

近年来阿奇霉素全身不良反应随应用的广泛而日益突出。雾化用药可降低全身用药的不良反应，但其耐受性和可行性是实施的基础。

从小鼠BALF中白蛋白含量和LDH活性及肺组织HE

表2 各组雾化后ELF及血中阿奇霉素的浓度

Az.azithromycin

染色的病理表现看， 小鼠能耐受50 mg/kg以下剂量， 而100 mg/kg剂量雾化时可产生局部非特异性炎性反应，气道肺泡上皮细胞有一定程度损伤，肺泡间质仅见轻度炎性细胞浸润。

10 mg/kg阿奇霉素组 ELF中药物浓度明显超过其对肺炎支原体及嗜肺军团菌的MIC(分别为0.125～0.5 μg/mL和0.08～0.5 μg/mL)[3]，完全达到有效的抗菌作用；当药物浓度超过防耐药浓度时，可减少低药物浓度诱发的耐药突变株选择性富集扩增，说明较高的ELF药物浓度能更有效防止耐药菌的产生。

综上所述，小鼠对10～50 mg/kg阿奇霉素溶液雾化具有良好的耐受性；气道局部浓度远高于血药浓度，大于该药的局部MIC，具有有效性。