P504s、P63、PSMA及Ck34βE12在前列腺良恶性病变鉴别中的意义

李国成

山东省菏泽市牡丹区中医医院外科,菏泽 274000

前列腺癌是影响男性生命健康的恶性肿瘤,其发病率仅低于肺癌,占男性恶性肿瘤的30%,死亡率占11%。前列腺癌的发病过程隐匿,进程较慢,且发病早期无明显症状,一旦发现,往往已发展到晚期或已发生转移[1]。因此,前列腺癌的早期发现、早期治疗具有显著的意义。免疫组化染色是诊断前列腺癌的必要方法,其中α-甲酰基辅酶A消旋酶(又称P504S)是近年来研究较为广泛的前列腺癌重要标志物,有报道指出[2],P504S对于前列腺癌的诊断具有显著的特异性。P63和Ck34βE12是前列腺中基底细胞的阳性标志物,对前列腺的恶性癌变及良性病变具有较为灵敏的诊断[3]。前列腺特异性膜抗原(PSMA)在前列腺上皮细胞表面特异表达,在前列腺癌细胞上的表达显著增加[4]。本研究探究P504s、P63、PSMA及Ck34βE12在前列腺良恶性病变鉴别中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月—2016年12月收治的菏泽市牡丹区中医医院直肠B超引导下的手术切除标本112例,前列腺穿刺活检标本89例及经尿道电切除标本23例,共224例作为研究对象。患者年龄55～ 81岁,平均(70.54±4.27)岁;经检测发现,前列腺癌(PCa)51例,前列腺非典型腺瘤性增生(AAH)12例,高级别前列腺上皮内瘤变(HGPIN)15例,基底细胞增生(BCH)9例及良性前列腺瘤样增生(BPH)21例。本研究经医院伦理委员会同意,患者均签署知情同意书。

1.2 检测方法

所获标本均进行石蜡切片,行苏木精-伊红(HE)染色。于10%的中性福尔马林中固定24 h,进行石蜡切片。切片置于65 ℃孵箱过夜,经过抗原修复和封闭后,加入P504S单克隆抗体、p63 单克隆抗体、PSA单克隆抗体或Ck34βE12单克隆抗体于4 ℃过夜,洗涤,加入二抗,洗涤后加入ABC复合物,并进行DAB显色。本研究所用一抗均购自北京中山金桥生物技术有限公司,所有操作按照说明书严格进行,且每次实验设置阳性及阴性对照。

1.3 结果判定

P504S主要存在于细胞胞质中,阳性细胞胞质呈现棕黄色;P63主要分布在细胞核中,阳性细胞细胞核出现棕黄色;PSMA在细胞膜及胞质中分布,阳性细胞的细胞膜及细胞质中呈现棕黄色颗粒;Ck34βE12存在于细胞质中,呈现棕黄色;根据阳性细胞比例分级:阴性(-):视野中无阳性细胞出现;(+):阳性细胞比例<10%;(++):阳性细胞比例在10%～50%;(+++):阳性细胞比例在50%～100%。对单独和联合检测P504S、P63、PSMA及Ck34βE12的准确度,灵敏性及特异性进行统计。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 P504S在前列腺良恶性病变组织中的表达

P504S主要表达在肿瘤细胞的胞质内,51例Pca患者中32例显示出强的棕黄色弥散性胞质染色,弥散阳性率为62.75%,阳性率为100.00%;12例HGPIN患者中11例出现弥散性或散在阳性,阳性率为91.67%;而AAH、BCH及BPH患者标本中P504S的阳性率分别为6.67%、11.11%及0.00%,与Pca和HGPIN患者的P504S相比,具有显著性差异(P< 0.05),见表1。

2.2 P63在前列腺良恶性病变组织中的表达

P63在Pca的阳性率为0%,而在HGPIN,AAH,BCH和BPH中的表达量均为100.00%,Pca中P63的表达量显著低于其他种类的前列腺病变(P< 0.05),见表2。

2.3 PSMA在前列腺良恶性病变组织中的表达

PSMA在Pca和HGPIN的阳性率为98.04%和90.91%,在AAH,BCH和BPH中的表达量分别为13.33%,11.11%和9.52%,Pca,HGPIN的阳性率显著高于AAH、BCH和BPH(P<0.05),见表3。

表1 P504S在前列腺良恶性病变组织中的表达

注:与Pca相比,(1)P< 0.05;与HGPIN相比,(2)P< 0.05。

表2 P63在前列腺良恶性病变组织中的表达

注:与Pca相比,(1)P< 0.05。

表3 PSMA在前列腺良恶性病变组织中的表达

注:与Pca相比,(1)P< 0.05;与HGPIN相比,(2)P< 0.05。

2.4 Ck34βE12在前列腺良恶性病变组织中的表达

Ck34βE12在Pca中阳性率为0.00%,在HGPIN、AAH,BCH和BPH中的阳性率均为100.00%,Pca阳性率显著低于HGPIN、AAH、BCH和BPH(P< 0.05),见表4。

表4 Ck34βE12在前列腺良恶性病变组织中的表达

注:与Pca相比,(1)P< 0.05。

2.5 单独及联合检测P504S、P63、PSMA及Ck34βE12对前列腺癌诊断的准确度,灵敏性及特异性

P504S、P63、PSMA及Ck34βE12联合检测对前列腺癌诊断的准确度,灵敏度及特异性分别达到100.00%,97.85%和98.24%,均高于单独检测,具有一定的临床诊断价值,见表5。

表5单独及联合检测P504S、P63和PSMA对前列腺癌诊断的准确度,灵敏度及特异性(%)

Tab.5Theaccuracy,sensitivity,andspecificityofseparateandjointdetectionofP504S,P63,PSMAandCk34βE12,inthediagnosisofprostatecancer(%)

指标准确度特异性灵敏度P504S90.3596.5289.66P6385.3480.6383.46PSMA92.6794.0195.24Ck34βE1283.4785.4487.25联合检测100.0097.8598.24

3 讨论

目前临床上对于前列腺癌的诊断主要通过其结构、浸润方式的改变及细胞结构的异型性等,但一些微小的形态差别,如前列腺非典型腺瘤性增生,高级别前列腺上皮内瘤变,基底细胞增生及良性前列腺瘤样增生等与恶性前列腺癌变具有的差别甚微,HE染色比较难以区分[5],因此,寻找有效的标志物进行区分,提高前列腺癌的诊断准确性及特异性具有重要意义。

P63和Ck34βE12均为基底细胞的特异性标记物,定位于细胞质和细胞核,通过对P63和Ck34βE12染色强度的分析,能够清楚分辨基底细胞的存活状态及是否缺失,而基底细胞的缺失是前列腺癌变的重要指征,前列腺癌变时,P63和Ck34βE12的染色强度显著降低,许多报道指出P63和Ck34βE12可以作为特异性标记物对前列腺癌进行检测[6]。本研究结果显示,P63和Ck34βE12在Pca的阳性率为0%,而在其他前列腺病变中阳性率为100.00%,与以前研究的结果相似。由此可见,P63和Ck34βE12可以作为特异性标志物用于分辨前列腺的癌性病变和良性增生。有研究结果显示,良性前列腺增生的细胞中含有少数的腺泡和导管周围,存在P63和Ck34βE12间断的阳性或阴性,此结果表明了单独检测P63和Ck34βE12的局限性,对于穿刺活检的标本,存在一定的视野限制,更容易出现假阳性或假阴性的结果[7]。因此,P63和Ck34βE12应与其他检测指标联合应用来对前列腺癌进行诊断。

P450S作为一种高度敏感的前列腺癌的阳性标志物,主要存在于线粒体及过氧化物酶体中,有报道称P450S在前列腺癌组织中高表达,但是在正常前列腺组织中几乎不表达[8]。本研究结果与以前的报道相似,P504S在前列腺癌中的表达显著升高。PSMA在前列腺上皮组织中表达,在胞浆近腔缘侧的染色较深,且其表达量随着上皮细胞形状改变程度的加重而增加,在正常前列腺组织中表达较低。有研究显示,PSMA在前列腺癌中的表达程度与年龄,淋巴结转移及组织分化程度具有密切的关系[9]。也有报道称 99mTc-PSMA全身平面显像结合局部SPECT/CT断层显像对前列腺癌原发灶和转移灶的探测有较高应用价值,灵敏度及特异度均较高[10]。本研究结果显示,PSMA在Pca,HGPIN中的表达显著增加。因此,PMSA是一种诊断前列腺癌较为特异的标志物,能够作为靶向物,与其他技术结合,作为前列腺癌诊断与治疗的新手段。

针对以上原因,本研究对单独检测和联合检测P504S、P63、PSMA及Ck34βE12的准确度,灵敏性及特异性进行评价,发现以上指标联合检测,对前列腺癌诊断的准确度、灵敏性及特异性均得到了增加。