枸杞中甜菜碱的含量测定

□ 卢艳婷 东莞出入境检验检疫局

枸杞子是常用的药食两用材料，具有滋补肝肾、益精明目的功效，枸杞子在植物分类中定义为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实。甜菜碱是一种枸杞特征性的生物碱，为其主要活性物质，其生物活性提供甲基供体，起到抗氧化的作用。本文通过研究实践，建立了HPLC方法测定甜菜碱的含量[1]，该方法与中国药典标准方法薄层色谱法（2015年版第一部P249页）相比更加准确、简便可靠。

1 药典法定测定法

《中国药典》2015 年版枸杞子甜菜碱含量测定采用薄层色谱法，具体操作方法为：取枸杞子约2g，用剪刀剪碎，精密称定，加80%甲醇50mL做溶剂，加热回流，用该溶剂30mL分次洗涤残渣和滤器，将洗液与滤液合并后浓缩至10mL，调节pH值至1，加入活性炭1g脱色，加入新配制的2.5% 硫氰酸铬铵溶液20mL，搅匀，低温静置3 h，过滤。加丙酮定量至5mL，作为供试品溶液[2]。另取甜菜碱对照品20mg，精密称定，加盐酸甲醇溶液（盐酸∶甲醇=0.5∶99.5） 定容至5mL作为对照品溶液。按“薄层色谱法（TLC）操作规程”试验，精密吸取对照品溶液3μL与6μL，供试品溶液5μL硅胶G层析板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸（v∶v ∶v=10∶6∶1 ）为展开剂，喷显色剂改良碘化铋钾试液，按“薄层色谱法操作规程”进行扫描，波长：λs =515nm，λR = 590nm，测量，计算，即得。

笔者经实际操作发现，该方法干扰因素多，而且温度和湿度对显色影响较大，重现性差[3]。

2 HPLC方法的建立

2.1 仪器与试药

安捷伦1260高效液相色谱仪、枸杞子、磷酸二氢钾（分析纯）、甜菜碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号136941-201703）。

2.2 实验方法

2.2.1 溶液配制

对照品溶液：准确称取甜菜碱对照品 0.060g，加纯化水溶解并定容至刻度，制备成 0.600mg/m L的储备液。

流动相：准确称取磷酸二氢钾0.408g，加纯化水溶解并定容至1000mL，配制成 0.003mol/L KH2PO4溶液，0.22μm微孔滤膜过滤，备用。

2.2.2 实验参数

色谱条件：SCX 阳离子交换柱（4.6mm×250mm，5μm），0.003mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，柱温 40℃，检 测 波 长 192nm， 流 速 1.0mL/min，进样量：20μL。

样品处理方法：同上述薄层色谱法前处理[4]。

图1 甜菜碱标准曲线

2.3 结果与分析

2.3.1 制备对照品标准曲线

分别精确量取 0.600mg/mL的甜菜碱对照品储备液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL加纯化水定容至10mL，摇匀。以甜菜碱峰面积的积分值为纵坐标，以质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=2323413X+29.21，r=0.9999（图1）。结果表明，甜菜碱在0-0.300mg/mL范围内线性关系良好。

2.3.2 精密度试验

取浓度为 0.120mg/mL的甜菜碱对照品溶液，于高效液相色谱连续进样 5次，根据峰面积值测定结果（见表1），计算其 RSD值为 0.95%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 重现性试验

取上述枸杞子5 份，制成样品溶液，用高效液相色谱测定样品峰面积值，计算样品中甜菜碱的含量（见表2）。结果可得所测甜菜碱的平均质量分数为 0.82%，RSD为 1.29%。

2.3.4 回收率试验

取上述枸杞子，准确称取100mg，平行6份，分别加入5mL浓度为0.120mg/mL甜菜碱对照品溶液，加纯化水定容至50mL，制成样品溶液，用高效液相色谱测定峰面积值，计算回收率，结果平均回收率为 97.17%，RSD为1.05%，见表3。

表1 精密度试验结果

表 2 重现性试验结果

表3 回收率试验结果

3 结论与讨论

枸杞作为常用的药食两用材料，在食品和药品的标准体系中均有收载。食品标准无需检测甜菜碱的含量，药品标准作为最严格的执行标准，对其有效成分甜菜碱有进行检测，用薄层色谱法，但是该方法温度和湿度对显色影响较大，重现性差。本文建立高效液相色谱方法测定枸杞子甜菜碱的方法操作准确简单快速、重复性好，可用于枸杞子药材及其制剂的质量控制。