球孢白僵菌对茶毛虫4龄幼虫生物测定

包 强，肖 蕾，杨文波，周品谦，李耀明，欧高财，王沅江*

（1.湖南省农业科学院 茶叶研究所，国家茶树改良中心 湖南分中心，湖南 长沙 410125；2.湖南省植保植检站，湖南 长沙 410127）

茶毛虫（Euproctis pseudoconspersa），鳞翅目（Lepidoptera），毒蛾科（Lymantriidae），是茶树的主要害虫之一，以幼虫主要危害茶树的叶片，大量发生时将茶树芽叶、嫩梢、树皮咀食殆尽，严重影响茶叶的产量和茶树的长势[1-2]。局部茶园茶毛虫的防治因化学防治造成再猖獗，同时化学农药残留严重影响和制约了茶叶的优质生产，寻找一种高效、无污染、无农药残留、无副作用的新技术防控茶毛虫是目前茶树病虫害防治中的重要的研究课题之一。

白僵菌（Beauveria bassiana）是昆虫病原真菌之一，能够在自然条件下通过体壁接触感染杀死多种农林害虫，且对人畜无毒，对作物安全，无残留、无污染。据不完全统计，白僵菌可寄生15个目149个科700余种[3-4]。近年来研究学者引进白僵菌防治茶丽纹象甲、茶角胸叶甲和茶小绿叶蝉等茶园害虫取得一些进展[5-7]，由于白僵菌菌株在转寄主过程中致病性发生一定的改变，在应用白僵菌防治病虫前需要对该虫开展必要的室内研究以探明白僵菌菌株最佳浓度及害虫抵抗逆境胁迫下的能力，基于此目的开展本研究，为白僵菌对茶毛虫的生物防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试菌药

孢子含量为400亿个孢子/g的球孢白僵菌水分分散粒剂，由山西绿海农药科技有限公司生产。

1.2 供试虫体

采自湖南怀化沅陵县三眼桥茶厂基地第一代茶毛虫所产卵块孵化，用新鲜茶梢饲养在室内至4龄幼虫，供试验使用。

1.3 孢子悬浮液的配置

用分析天平称取25.00 g 400亿个孢子/g球孢白僵菌放入灭菌过的三角锥形瓶，用量筒量取1000 mL的0.05%吐温-80溶液摇匀配置成浓度为1.0×109孢子/mL的孢子悬浮液母液，用移液管依次移取母液稀释配置1.0×108、1.0×107、1.0×106、1.0×105孢子 /mL的孢子悬浮液，共计5个浓度。

1.4 接种

每个浓度为1个处理，每个处理重复4次，以0.05%吐温-80溶液为对照。每个处理6头茶毛虫幼虫。采用浸渍法接种，将试虫浸入到孢子悬浮液中5 s，对照浸沾0.05%吐温-80溶液，用灭菌过的滤纸吸干虫体表面多余的菌液。接种后把试虫置于一次性灭菌过自制塑料盒（盖子表面用纱布自制通气部位）中，用基部包有湿润脱脂棉的新鲜茶梢置于25℃、湿度95%、L∶D＝1∶1的培养箱饲养，每2 d更换1次新鲜的茶梢。

1.5 调查与统计分析

接菌处理后第2 d开始，每天调查1次茶毛虫的死亡情况。如发现死虫，将其移出塑料盒并置于无菌培养皿内保湿培养，观察死虫上是否长出菌丝。死亡率、校正死亡率的计算公式如下：

累计死亡率（%）＝（死亡虫口数/处理总虫数）×100

累计校正死亡率（%）＝（处理组累计死亡率-对照组累计死亡率）/（1-对照组累计死亡率）×100

采用SPSS17.0软件中单因素方差分析对试验数据进行处理。利用邓肯氏新复极差法对试验数据进行多重比较分析。

2 结果与分析

2.1 致病性

试验结果表明，白僵菌孢子悬浮液可以感染茶毛虫幼虫，白僵菌孢子进入虫体，白僵菌在虫体萌发生长，达到致死茶毛虫幼虫的效果（表1）。

2.2 死亡率

从表1可知，白僵菌孢子悬浮液处理的茶毛虫幼虫死亡率上升，随着浓度增大需要的半数死亡时间逐渐缩短，致死率也逐渐升高。105个孢子/mL浓度白僵菌孢子悬浮液处理的茶毛虫在药后第5 d后出现死亡，死亡率16.67±13.61%；1.0×107个孢子/mL浓度白僵菌孢子悬浮液在药后第7 d茶毛虫致死率达到50%，半致死亡时间为7 d；1.0×108个孢子/mL浓度半致死亡时间仅1 d，死亡率达到了61.11±20.79%，差异显著。109个孢子/mL浓度处理的茶毛虫处理后一天全部死亡，死亡率达到100±0.00%。

2.3 化蛹率

研究发现，茶毛虫4龄幼虫在室内饲养能化蛹，受到白僵菌孢子悬浮液胁迫下部分虫体通过提前化蛹来避免菌液对自身的影响。由图1可知，在清水处理下，茶毛虫在第5 d后进行化蛹，第6 d全部化蛹；在105～106白僵菌孢子悬浮液浓度下，存活的部分茶毛虫在第4 d化蛹，与清水相比，提前1 d。但随菌液浓度增大，在大于108个孢子浓度下，茶毛虫不能通过化蛹来躲避白僵菌的胁迫而死去。

表1 不同剂量的白僵菌菌液处理下茶毛虫的累计校正死亡率Table 1 Cumulative corrected mortality of tea caterpillars treated with different doses of Beauveria tenella

图1 不同浓度的白僵菌孢子悬浮液下茶毛虫化蛹率的比较Fig. 1 Comparison of the rates of tea caterpillar pupation under different concentrations of Beauveria tenella spore suspension

3 结论与讨论

白僵菌作为昆虫病原真菌之一，能够在自然条件下通过体壁接触感染杀死多种农林害虫。本研究结果表明，白僵菌孢子悬浮液通过接触虫体感染茶毛虫幼虫后在虫体萌发，达到致死幼虫的作用。白僵菌孢子悬浮液处理的茶毛虫幼虫死亡率上升，随着浓度增大半致死亡需要的时间逐渐缩短，致死率逐渐升高。1.0×107个孢子/mL浓度白僵菌孢子悬浮液在药后第7 d茶毛虫致死率达到50%，半致死亡时间为7 d；1.0×108个孢子/mL浓度半致死亡时间仅1 d，死亡率达到了61.11%，差异显著。1.0×109个孢子/mL浓度处理的茶毛虫处理后一天全部死亡，死亡率达到100%，推荐使用1.00×108个孢子/mL浓度防治茶毛虫幼虫。本试验结论为田间防治应用浓度提供了一个初筛基础，具体田间的应用效果需要进一步验证筛选。

在白僵菌孢子悬浮液胁迫下部分虫体通过提前化蛹来避免菌液对自身的影响。在105～106白僵菌孢子悬浮液浓度下，存活的部分茶毛虫在第4 d化蛹，与清水相比，提前1 d。但随菌液浓度增大，在大于108个孢子浓度下，茶毛虫不能通过化蛹来躲避白僵菌的胁迫而死去，说明茶毛虫幼虫自身存在抵抗白僵菌逆境胁迫的机制，有待进一步明确。