一例鸡传染性支气管炎的诊断与防治

王丽辉

（重庆市畜牧科学院，重庆 402460）

鸡传染性支气管炎病是由冠状病毒科冠状病毒属鸡传染性支气管病毒（IBV）感染引起的，主要通过呼吸道感染[1-2]。其潜伏期短、发病快，多发于雏鸡，雏鸡感染会继发引起其他病菌感染，以呼吸道症状和生产性能下降为主要特征，临床上多表现为呼吸困难、假母鸡、肾炎及产蛋量和蛋品质下降[3-5]。

雏鸡感染症状多以呼吸道症状为主，产蛋鸡感染此病，以产蛋率下降、蛋壳和蛋品质下降为主，给养殖户带来的损失更大[6-7]。

试验针对重庆某鸡场的部分发病鸡，经临床诊断和对病死鸡的剖检初步诊断为鸡传染性支气管炎病，并对病死鸡的气管和肾脏的病料进行RTPCR诊断，确诊为鸡传染性支气管炎。我国此前就有鸡传染性支气管炎病的报道，其在不同地区均有发生，并且鸡传染性支气管炎病毒的血清型众多，流行毒株也有地域差异[8-10]。

1 发病情况

重庆某养殖场140日龄的海兰褐壳蛋鸡4 000只，由于气温骤降，引起鸡群应激反应，鸡群中少数鸡表现精神不振、采食和饮水下降、张口呼吸、甩鼻、羽毛粗乱、产蛋量下降症状，病鸡出现消瘦、拉稀，部分症状严重的鸡只死亡。

2 病理剖检

对死亡鸡只进行剖检，发现鼻内有黏液，气管环出血或气管内有黏液性分泌物，卵泡充血、出血，肾脏肿大、表面有尿酸盐沉积，呈现花斑肾，见图1。

图1 花斑肾

3 实验室诊断

依据临床发病情况和病理剖检可初步进行诊断，进一步诊断应进行实验室RT-PCR诊断。

3.1 病料处理

无菌采集3份病死鸡的气管和肾脏，剪碎，按1∶5的比例加入无菌生理盐水进行研磨，研磨后的病料反复冻融3次后，3 000 r·min-1离心15 min，取上清液。

3.2 引物的设计与合成

依据《GB/T 23197-2008鸡传染性支气管炎诊断技术》，在宝生物工程（大连）有限公司合成鸡传染性支气管炎病毒PCR引物：反转录引物5'-AGCAAAAGCAGG-3'，所用引物序列见表1。

表1 鸡传染性支气管炎基因片段RT-PCR扩增引物

3.3 RNA提取及反转录

分别取3份上清液250 μL，按照TRIZol LS Regent操作方法提取病毒RNA，将提取的RNA进行反转录，反转录总体积为20 μL，20 μL反应体系为：RNA模板7 μL，10 pmol·L-1反转录随机引物1 μL，2.5 mmol·L-1dNTP 4 μL，65 ℃水浴5 min、冰浴 2 min 后，加入 5×Buffer 4 μL，0.1 mol·L-1DTT 2 μL，RNA酶抑制剂1 μL，37 ℃ 2 min，加入M-MLV反转录酶1 μL，37℃水浴50 min，70℃水浴15 min，将反转录后的cDNA置于-20℃保存。

3.4 RT-PCR扩增

PCR混合引物为4PS：包括两对引物（Ms/Mx和3's/3'x）分别针对传染性支气管炎病毒（IBV）基因组的M基因及基因组3'末端的非编码区，这两个基因区间保守性强。该混合物引物中，Mx/Ms引物浓度为4 pmol·μL-1，3's/3'x的引物浓度为5 pmol·μL-1。

PCR反应体系为：无RNase水18.5 μL，10×PCR Buffer 2.5 μL，12.5 mmol· L-1dNTPs 2 μL，4PS PCR混合引物1.5 μL，2.5U Taq酶0.5 μL，混匀后，加入反转录后的cDNA模板2 μL，混匀。同时，设立以传染性支气管炎病毒M41株的cDNA为模板的阳性IBV病毒对照和以DEPC水为模板的阴性对照。

PCR反应程序为：94℃ 3min，94℃ 40 s，53℃30 s，72℃30 s，30个循环；72℃7 min。

3.5 电泳检测

待PCR反应结束后，每个PCR样品取5 μL于含0.5 μg·mL-1EB的2.0%琼脂糖凝胶孔中电泳，同时加入5 μL的1 000 bp的Mark作为参照，在120 V恒压电泳中20 min，取凝胶置紫外成像仪观察。电泳检测结果见图2。由图2可知，病料1和2可见清晰的目的条带，为鸡传染性支气管炎病毒阳性，病料3为阴性。

图2 PCR电泳结果

4 治疗和预防

4.1 治疗

对发病鸡只进行隔离治疗，使用抗生素类药物进行紧急治疗，链霉素和复方新诺明按使用说明书2～3倍剂量接种治疗。未发病的鸡群，进行新支二联苗的4倍剂量接种。

4.2 预防

4.2.1 疫苗接种

可根据鸡场附近的流行毒株选用适用的疫苗，进行科学的免疫[11-12]。雏鸡的基础免疫采用活疫苗免疫，加强免疫采用活疫苗和灭活疫苗联合免疫。鸡传染性支气管炎病的免疫程序建议如下：蛋鸡7 d时NDV H120二联苗2倍量点眼免疫，21 d时NDV H52二联苗3倍量点眼免疫，56 d时NDV H52二联苗3倍量点眼免疫，98 d时NDV H52二联苗4倍量点眼免疫，133 d时NDV H52二联苗4倍量点眼免疫，以后每隔45 d做1次NDV H52二联苗4～5倍量点眼免疫；肉鸡为1～7日龄分别进行新支的二联苗2倍量点眼免疫。此外，调查同一地区的几年鸡传染性支气管炎的流行趋势，对选择疫苗及防控疫病的发生具有重大的经济意义[13-15]。

4.2.2 科学的饲养管理

鸡传染性支气管炎病不分季节、不分日龄、不分品种均可发生[16-18]。要进行全进全出的饲养制度，减少持续感染的几率；在进雏前，对育雏舍进行彻底消毒，做好育雏舍的保温工作，温度、湿度要恒定，避免冷、热应激；提高饲养条件，保证良好的通风，控制饲养密度，适应饲养周期；不同的饲养周期选用合理的饲料配方，增加矿物元素和维生素，提高鸡群的免疫力；对进出场区的人员、车辆、物品进行消毒后，才能准入，严禁人员串舍，从而降低病毒传播几率[19-24]。

5 结论

该鸡场在产蛋前未接种过新支二联苗进行来加强免疫，产蛋后由于温度变化，导致鸡群应激，引起呼吸道症状，进而伴随其他呼吸道疾病的继发感染，使疫情变得复杂。可依据临床表现和剖检进行初步诊断，进一步需用RT-PCR进行诊断，该饲养场在发现病情确诊后，紧急进行新支的预防接种，在短时间内缓解了病情[25]。因此，只有对传染性支气管炎病的防治进行科学的疫苗接种和饲养管理，才能有效提高养殖的经济效益。