EGCG-Zn配合物对老年小鼠免疫功能、空间学习及记忆力的影响

2018-07-18钱丹丹张楠楠刘绣华

中国老年学杂志 2018年13期

钱丹丹张楠楠刘慧王珂张昀刘绣华,2

(河南大学民生学院，河南开封 475000)

茶多酚包括黄烷醇类、黄酮类等多种物质，是茶叶中有保健功能的主要成分，其中主要的活性成分为表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。现代药理研究证明其具有抗氧化、清除自由基、抗癌、抗突变及调节免疫力等功能〔1～3〕。锌是人体必需的微量元素，影响多种酶的合成及生物学活性，对机体免疫功能也有一定影响，其体内含量过高或过低都会产生不良影响〔4〕。而老年人缺锌是一种常见现象，有研究表明在免疫功能低下时，适当的补充锌能提高免疫力〔5〕。本实验首次研究EGCG-Zn配合物对老年小鼠免疫功能、空间学习及记忆力的影响，为EGCG-Zn配合物的进一步开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1仪器和试剂 LRH-生化培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)，迷宫系列(北京众实迪创科技发展有限责任公司)，TISSUE-TEAROR手持式匀浆机(上海旦鼎国际贸易有限公司)，EGCG(南京春秋生物工程有限公司)，所有试剂盒购自南京建成生物工程研究所。EGCG-Zn配合物由河南大学天然药物与免疫工程重点实验室提供

1.2动物昆明种小鼠，雌雄各半，清洁级，18个月龄，体重60～70 g，由河南省动物实验中心提供〔动物合格证号：SCXK(豫)2015-0004〕。

1.3动物分组与给药所有小鼠适应性喂养1 w后，随机分为EGCG-Zn组(8.5 mg/kg)、EGCG组(0.102 mg/kg)、Zn(8.4 mg/kg)组和空白组(等量蒸馏水)，每组10只，雌雄各半。每天给药前测定体重，实验开始和结束时各测1次体温，连续灌胃给药25 d后处死，进行各指标测定。

1.4小鼠空间学习和记忆能力的测定采用Morris水迷宫进行定位航行、空间搜索和工作记忆三种实验，按照张魁华等〔6〕方法操作。

1.5血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性肝总蛋白、MDA含量，脑总蛋白和过氧化氢(CAT)含量测定均按照试剂盒进行。

1.6统计学方法采用SPSS21.0统计软件进行方差分析、q检验。

2 结果

2.1体重、体温检测结果各组实验前后体重、体温均无显著性改变，各组无显著性差异。见表1。

表1 各组实验前后体重、体温值

2.2定位航行实验由第3象限入水，各组6 d内潜伏期变化不大，EGCG组最为稳定，空白组和Zn组变化相对较明显。EGCG-Zn组潜伏期有降低趋势，较稳定。由第2象限入水，6 d内Zn组和空白组潜伏期变化相对不稳定，Zn组最后1 d潜伏期突增；EGCG组和EGCG-Zn组趋势相对较稳定，且EGCG-Zn组潜伏期逐渐降低，比空白组潜伏期小。由第4象限入水，各组趋势都不太稳定，且以空白组最不稳定；EGCG-Zn组较Zn组和EGCG组潜伏期小，各组潜伏期差异无统计学意义(P>0.05)。见图1。

2.3工作记忆实验无论平台在第几象限EGCG-Zn组比其他3组稳定性都好，且呈下降趋势。但与其他各组相比，均无显著差异(P>0.05)。见图2。

图1 各组平台位于第1象限不同象限入水水迷宫定位航行实验

图2 各组不同象限平台水迷宫工作记忆实验

2.4空间搜索实验 3种情况下，EGCG-Zn组和Zn组比其他两组穿越原平台次数多，EGCG-Zn组与EGCG组和空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)，与Zn组相比无显著差异(P>0.05)。见表2。

表2 各组抽去平台不同象限入水水迷宫空间搜索实验次)

Ⅰ第2象限；Ⅱ第3象限；Ⅲ第4象限；与EGCG-Zn组比较：1)P<0.05；与Zn组比较：2)P<0.05

2.5各组血清MDA、SOD，肝脏MDA，脑CAT活性检测血清MDA含量，空白组、EGCG组、Zn组、EGCG-Zn组依次降低，EGCG-Zn组与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01)，EGCG组和Zn组与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。空白组血清SOD值最小，EGCG组、Zn组、EGCG-Zn组与空白组比较差异显著(P<0.05)，但这三组差异无统计学意义。肝脏MDA含量空白组明显高于其他3组，Zn组、EGCG组、EGCG-Zn组依次降低，EGCG-Zn组与空白组比较有极显著性差异(P<0.01)，EGCG组和Zn组与空白组比较有显著性差异(P<0.05)。EGCG组、EGCG-Zn组脑CAT活性比空白组、Zn组脑CAT活性大，其中EGCG-Zn组CAT活性最大，是空白组的近3倍。EGCG-Zn组与空白组比较有极显著性差异(P<0.01)，EGCG组与空白组比较有显著性差异(P<0.05)，Zn组与空白组比较无显著性差异(P>0.05)。见表3。

表3 各组血清MDA、SOD，肝脏MDA，脑CAT活性比较

与空白组比较：1)P<0.01,2)P<0.05

3 讨论

现代研究已证明茶多酚具备较强的抗氧化性和多种生理活性，人体中的SOD可以消除体内过量的自由基，提高人体免疫力，延缓衰老。SOD活性越大证明相关免疫功能越好；MDA含量越低，说明相关免疫功能越好。并且，CAT与SOD通过协同清除自由基发挥抗氧化损伤作用，此时CAT活性相应提高，以抵抗SOD所产生的H2O2〔7〕。本文结果表明，Zn、EGCG、EGCG-Zn配合物对老年小鼠免疫功能低下具有增强作用，EGCG-Zn配合物的效果要优于单独使用Zn和EGCG。但对于老年小鼠的空间学习和记忆力的影响则不显著。EGCG-Zn和Zn均对小鼠的空间学习记忆有一定的促进作用，但主要因素可能与Zn相关，与EGCG-Zn配合物关系不大。EGCG、Zn、EGCG-Zn均对老年小鼠的血清MDA活性有一定的降低效应，能延缓小鼠衰老，且EGCG-Zn作用效果最强。EGCG、Zn、EGCG-Zn均对老年小鼠的血清SOD有提高作用，三者之间无明显区别。EGCG-Zn能显著降低老年小鼠肝脏中MDA含量，且比Zn、EGCG单独作用效果要好。EGCG-Zn，EGCG均能有效提高老年小鼠脑CAT活性，且EGCG-Zn效果更好，而Zn单独作用不能提高老年小鼠脑CAT活性。因此，EGCG-Zn配合物有望开发为一种新的免疫增强制剂。