宫颈癌患者癌组织中内皮特异性分子-1和血管内皮细胞生长因子蛋白的表达及意义

2018-07-18宋晓环

中国老年学杂志 2018年13期

宋晓环

(长春医学高等专科学校病理教研室，吉林长春 131300)

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤，与高危型人乳头状病毒(HPV)感染密切相关，发病率仅次于乳腺癌〔1,2〕。近年相关文献〔3～6〕报道内皮特异性分子(ESM)-1和血管内皮细胞生长因子(VEGF)都与肿瘤发生、发展密切相关。本研究探索ESM-1和VEGF是否参与宫颈癌的发病机制。

1 材料与方法

1.1对象与分组选取2016～2018年经吉林省人民医院病理科确诊的宫颈癌组织150例和癌旁宫颈组织30例作为研究对象，平均年龄分别为(52.6±1.4)岁和(53.3±1.9)岁。宫颈癌组织根据临床分期：Ⅰ期51例、Ⅱ期59例、Ⅲ期40例，根据病理类型：高分化62例、中分化45例、低分化43例，根据有无淋巴结转移：有转移63例、无转移87例。全部病例在术前均未接受任何放、化疗，不合并其他脏器官疾病，两组一般资料比较差异无统计学意义，具有可比性(P>0.05)。

1.2主要试剂和仪器兔抗人ESM-1、VEGF抗体、SP9710和二氨基联苯胺(DAB)试剂盒购于福州迈新生物有限公司。Trizol、反转录试剂盒、实时荧光定量试剂盒购于塔克拉公司。Leica切片机(德国Leica公司)；OLYMPUS BX51光学显微镜(日本OLYMPUS公司)；7300型实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司)。

1.3ESM-1和VEGF mRNA水平检测首先设计、合成引物，由上海生物工程有限公司合成，序列为GADPH引物(371 bp)：上游5′-GATTGTTGCCATC-AACGACC-3′,下游5′-GTGCAGGATGCATTGCTGAC-3′；ESM-1引物(523 bp)：上游5′-AACTATGCTGAAGTCTTAGGA-3′,下游5′-TCAGAACTGAGTAAGGCCTG-3′；VEGF引物(287 bp)：上游5′-TGGGCCAGCAATTGTTCACA-3′,下游5′-ATTGTCTTGCCATCATGCTAG-3′。Trizol提取总RNA然后反转录，通过预变性、变性、退火、延伸及40个循环进行实时荧光定量PCR检测，检测得Ct值，每个样本基因扩增3次，取平均值，采用2-ΔΔCt表示目的基因相对表达水平，ΔCt=Ct目的基因-Ct内参基因，ΔΔCt=ΔCt实验组-ΔCt对照组。

1.4样本中ESM-1、VEGF蛋白阳性表达强度的检测组织石蜡切片3 μm，每个样本2张，65℃烤箱烘片2 h，然后常规脱蜡至水洗，采用柠檬酸抗原修复液煮沸10 min进行抗原修复，分别滴加ESM-1、VEGF抗体，抗体为即用型，其余步骤严格按照SP9710试剂盒说明书进行，DAB显色后，用苏木精复染，封片。OLYMPUS显微镜观察，200倍镜下拍摄图片连续5个视野，采用Motic Images Advanced 3.2图像分析软件，检测光密度值(OD值)，OD值越大阳性表达越强。

1.5统计学分析采用SPSS16.0软件行t检验、χ2检验、Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1各组ESM-1和VEGF mRNA水平比较与癌旁宫颈组织比较，ESM-1和VEGF mRNA水平随宫颈癌分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期表达明显增强，随宫颈癌病理类型高、中、低分化表达明显增强，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2各组ESM-1和VEGF蛋白阳性表达强度比较与癌旁宫颈组织比较，ESM-1和VEGF的蛋白阳性表达强度随宫颈癌分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期表达明显增强，随宫颈癌病理类型高、中、低分化表达明显增强，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1，图1，图2。

2.3ESM-1和VEGF阳性表达率和临床病理特征的关系 ESM-1和VEGF的阳性表达率在不同临床分期、病理类型及有无淋巴结转移组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表1 三组ESM-1、VEGF mRNA及蛋白水平的比较

与癌旁宫颈组织比较：1)P<0.05；与Ⅰ期比较：2)P<0.05；与Ⅱ期比较；3)P<0.05，与高分化比较:4)P<0.05；与中分化比较:5)P<0.05

图1 各组ESM-1蛋白阳性表达强度(×200，免疫组化SP法染色)

图2 各组VEGF蛋白的阳性表达强度(×200，免疫组化SP法染色)

临床病理特征nESM-1+-阳性率(%)VEGF+-阳性率(%)临床分期Ⅰ期512526 49.0224 2747.06Ⅱ期593920 66.101) 362361.021)Ⅲ期4037392.501)2)35587.501)2)病理类型高分化6227 3543.5525 3740.32中分化4534 1175.563)321371.113)低分化4340 393.023)4)38588.373)4)淋巴结转移有63 59493.6556788.89 无87 424548.285) 394844.835)

与Ⅰ期比较:1)P<0.05；与Ⅱ期比较:2)P<0.05；与高分化比较:3)P<0.05；与中分化比较:4)P<0.05；与有淋巴结转移比较:5)P<0.05

2.4ESM-1和VEGF mRNA水平及蛋白阳性表达强度的相关性分析 ESM-1和VEGF mRNA水平及蛋白阳性表达强度均呈正相关(r1=0.529，P1=0.026；r2=0.601，P2=0.035)。

3 讨论

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，仅次于乳腺癌，其发病率逐年年轻化且发病率、死亡率高，严重威胁女性患者的生命健康和生活质量〔1,2〕。近年来手术治疗虽然有一定的效果，但中、晚期患者术后仍易于复发、转移，因此寻找新的治疗手段是肿瘤专家的热衷研究课题。ESM-1是1996年从人脐静脉内皮细胞cDNA文库中克隆出的一种新型内皮细胞，是一种可溶性蛋白多糖，具有调节VEGF的功能〔2～4,7〕。众多研究〔8,9〕证实在肿瘤发生发展过程中转移、浸润与肿瘤新生血管密切相关。ESM-1既能促进血管内皮细胞生长又能改善肿瘤细胞微环境〔7,10〕；VEGF是促血管生成因子，具有多功能性，能直接刺激内皮细胞生长，促进血管生成，还能介导内皮细胞迁移，诱导血管生成〔11～13〕。因此，ESM-1、VEGF与肿瘤发病机制的研究成为热点，探索ESM-1、VEGF能否成为肿瘤靶向治疗的靶点备受关注。本实验结果显示，ESM-1和VEGF参与宫颈癌发生、发展、转移、浸润，阻断二者的表达可能为宫颈癌靶向治疗提供新的指导与靶点。